二甲雙胍用于制備治療柯薩奇病毒b3所致病毒性心肌炎藥物的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及一種二甲雙胍用于制備治療柯薩奇病毒B3所致 病毒性心肌炎疾病的藥物的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 柯薩奇病毒（CVB)屬于小RNA病毒科（Picornaviridae)腸道病毒屬 (Enterovirus)，病毒顆粒為二十面體，立方對稱呈球形，無包膜，直徑約25_30nm，病毒衣殼 包繞著一條單股正鏈RNA。柯薩奇病毒B組（coxsackievirusB)具有高度親心肌性和流行 性，共包括6種血清型（CVB1-CVB6)，其中柯薩奇病毒B3被認為是引起心肌炎和擴張型心肌 病最為常見的病原體，回顧性研宄表明50%以上的病毒性心肌炎和25 %的心肌病與之有 關(guān)。
[0003] 病毒性心肌炎（viralmyocarditis)是指嗜心性病毒感染引起的以心肌炎性病變 為主的疾病，可引起急性心功能不全，且約有1/3的患者進一步發(fā)展為慢性心肌炎和擴張 型心肌病，是引發(fā)心力衰竭的常見病因之一。近年來該病發(fā)病率呈上升趨勢，已成為危害青 少年健康的常見疾病之一，但迄今尚無有效的疫苗以及特異性治療方法。
[0004] 目前對于病毒性心肌炎的臨床治療，還存在諸多不足?，F(xiàn)臨床主要采用抗病毒和 調(diào)節(jié)細胞免疫功能療法。其中臨床抗病毒藥物包括阿昔洛韋、病毒唑和更昔洛韋等，在感 染早期，這些抗病毒藥物能有效抑制病毒復(fù)制，減輕心肌損傷，提高生存率，但是，在感染后 期，其療效有限，因此，目前臨床應(yīng)用的抗病毒藥物的療效均不夠滿意。在細胞免疫功能調(diào) 節(jié)方面，目前臨床上使用的藥物包括：丙種球蛋白、人白細胞干擾素等，雖然這些藥物能減 弱免疫反應(yīng)，清除病毒，改善左心室功能，提高生存率，但仍存在個體療效差異大，有一定副 作用，成本過高等問題。因而，篩選和研制治療病毒性心肌炎的新藥具有重要意義。
[0005] 二甲雙胍（Metformin，其分子式為C4H11N5 ?HC1，分子量為165. 62)作為臨床上廣 泛應(yīng)用的治療2型糖尿病的降糖藥物，近年來不斷有研宄表明其還具有一定的保護心血管 及抗腫瘤的作用，但對于抗柯薩奇病毒B3及所致病毒性心肌炎的活性尚未見報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種二甲雙胍用于制備治療柯薩奇病毒B3所致病毒性心肌 炎疾病藥物的用途。采用本發(fā)明所述藥物，治療柯薩奇病毒B3所致病毒性心肌炎疾病，具 有抗CVB3病毒復(fù)制的作用，抑制心肌炎癥及纖維化效果明顯，可用于制備治療病毒性心肌 炎的藥物，該副作用小，療效高，在目前臨床上治療CVB3所致病毒性心肌炎尤其是在感染 后期，治療的療效不夠滿意的情況下，應(yīng)用前景良好。
[0007] 本發(fā)明的技術(shù)方案是：
[0008] 二甲雙胍在制備治療柯薩奇病毒B3所致病毒性心肌炎疾病的藥物中的用途。
[0009] 本發(fā)明所述藥物采用口服方式給藥，對于成人而言，用藥量為每公斤體重每天 5 ~IOmg0
[0010] 本發(fā)明的有益效果是：
[0011] (1)藥理活性方面
[0012] 申請人的動物實驗證明，二甲雙胍顯著改善CVB3所致病毒性心肌炎小鼠生存率， 心臟組織實驗方面，二甲雙胍能明顯的抑制炎癥細胞浸潤和組織壞死，具有抗CVB3作用和 抑制其復(fù)制的作用，血清樣本用全自動生物分析儀進行檢測，結(jié)果表明，二甲雙胍具有抑制 心肌酶活性的作用、保護心肌功能的作用，體外抗CVB3活性作用表明二甲雙胍具有顯著的 抑制病毒蛋白表達水平的作用。
[0013] ⑵藥學(xué)方面
[0014] 二甲雙胍為雙胍類口服降血糖藥，其本身理化性質(zhì)穩(wěn)定，藥理作用廣泛，毒性和副 作用較小。
【附圖說明】
[0015] 圖1為二甲雙胍改善CVB3所致病毒性心肌炎小鼠生存率的曲線；
[0016] 圖2為二甲雙胍改善CVB3所致病毒性心肌炎小鼠心臟功能（EF為射血分數(shù)，LV mass為左心室質(zhì)量），*表示p〈0. 05 ;
[0017] 圖3為二甲雙胍抑制CVB3感染所致炎癥細胞浸潤的結(jié)果；
[0018] 圖4為小鼠心肌組織切片H&E染色結(jié)果，圖中Mock為正常對照組，CVB3為CVB3感 染組，CVB3+Met為二甲雙胍治療組；
[0019] 圖5為小鼠心肌組織切片Masson染色結(jié)果；
[0020] 圖6為二甲雙胍抑制CVB3在心肌組織中的復(fù)制，圖為dsRNA染色結(jié)果；
[0021] 圖7為二甲雙胍抑制小鼠心肌組織中CVB3衣殼蛋白VPlRNA表達量（注表示 p<0. 05)；
[0022] 圖8為Westernblot檢測二甲雙狐體外抗CVB3的作用，其中A圖為Westernblot 檢測條帶結(jié)果，0-actin為內(nèi)參對照；B圖為對A圖條帶進行灰度掃描定量分析結(jié)果（注： * 表示p〈〇. 05);
[0023] 圖9為qRT-PCR檢測二甲雙胍體外抗CVB3作用（注表示p〈0. 05)。
【具體實施方式】
[0024] -、材料和試劑
[0025] 1.動物、病毒株
[0026] BALB/c小鼠，雄性，4-6周齡，購買于第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院動物中心；
[0027] 柯薩奇病毒B3(Nancy株）購買于中國科學(xué)院武漢病毒研宄所；
[0028] Hela細胞株購于中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研宄院細胞資源中心。
[0029] 2?主要試劑
[0030]

[0035] 二、實驗方法
[0036] 1.病毒性心肌炎模型的建立
[0037]BALB/c小鼠，雄性，4-6周齡，適應(yīng)性喂養(yǎng)3天。實驗分為正常對照組、病毒性心肌 炎模型組、二甲雙胍治療組。小鼠腹腔注射0.1mlCVB3病毒液（3X105PFU/ml)，次日分別 給予灌胃PBS(正常對照組、病毒性心肌炎模型組）、二甲雙胍（50mg/kg)(轉(zhuǎn)算成人每日適 應(yīng)劑量是：5-10mg/kg)。連續(xù)灌胃7天，7天后每周灌胃3次，21天時進行心功能檢測，28天 處死小鼠，收集心肌組織和血液標本。
[0038] 2.小鼠心肌功能檢測
[0039] 小鼠給藥21天（感染CVB3后連續(xù)給藥7天，7天后每周給藥3次），小鼠用7% 水合氯醛按3ml/kg經(jīng)腹腔注射麻醉，固定，用Vev〇2100高分辨率超聲系統(tǒng)經(jīng)小鼠胸廓進行 超聲心動圖（30MHz，100幀/秒），經(jīng)測量計算得到射血分數(shù)（EF)和左心室質(zhì)量（LVmass) 的數(shù)值。
[0040] 5.免疫組化染色方法
[0041] 小鼠心臟組織用4%多