在胰島移植中作為佐劑的cxcr1/2抑制劑的制作方法
【專利說(shuō)明】在肢島移植中作為佐劑的CXCR1/2抑制劑
[0001]本申請(qǐng)是申請(qǐng)?zhí)枮?01080045208.5、發(fā)明名稱為"在膜島移植中作為佐劑的 CXCR1/2抑制劑"的申請(qǐng)的分案申請(qǐng)，該母案申請(qǐng)是2010年10月6日提交的PCT申請(qǐng)PCT/ EP2010/064921進(jìn)入中國(guó)國(guó)家階段的申請(qǐng)。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明設(shè)及可用于在1型糖尿病患者膜島移植中作為佐劑的化合物。
【背景技術(shù)】
[0003] W整個(gè)膜腺或分離之膜島形式進(jìn)行的膜腺組織移植已經(jīng)成為治療1型膜島素依 賴性糖尿病的臨床選擇。
[0004] 膜島移植特別具有吸引力，該是因?yàn)榕c移植整個(gè)膜腺相比，膜島移植具有更小的 創(chuàng)傷并且與較低的嚴(yán)重并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)；但是，該種方法仍然受限于低效率。
[0005] 膜島移植的早期策略基于已在實(shí)質(zhì)器官移植中得到成功證明的方案（包括施用 免疫抑制劑（如硫挫嚷嶺、環(huán)抱菌素和糖皮質(zhì)激素）。結(jié)果證明該種策略在膜島移植的具 體情形中不是有效的并且結(jié)果非常差，大多數(shù)的植入在移植起一年內(nèi)都失?。⊿ulaiman和 化apiro，Di油etes，Obesity and Met油olism，8,2006，15-25)。
[0006] 近年來(lái)，引入了新的特異性免疫抑制方案和膜島制備技術(shù)的埃德蒙頓方案 巧dmonton Protocol)的開(kāi)發(fā)已顯著地改善了膜島移植的臨床結(jié)果。
[0007] 根據(jù)埃德蒙頓方案，將膜島從已故供者的膜腺中分離、純化接著通過(guò)經(jīng)上腹部 并進(jìn)入肝口靜脈放置的導(dǎo)管移植到受者中；當(dāng)膜島細(xì)胞輸入肝臟后不久，該細(xì)胞開(kāi)始釋 放膜島素。為了防止發(fā)生排斥，使用新的免疫抑制方案，該方案需要使用免疫抑制藥物 (即西羅莫司（Sirolimus)和他克莫司（Tacrolimus))與CD25單克隆抗體達(dá)利珠單抗 值aclizum油）的組合（Saphiro等，N 化gl.JMed，2000，：M3(4) ;230-238)。
[000引遺憾的是，仍然有許多膜島移植的缺陷沒(méi)有解決，并且該些缺陷阻礙該方法成為 針對(duì)患有1型糖尿病患者的標(biāo)準(zhǔn)治療方法。
[0009] 有關(guān)膜島移植的第一個(gè)缺點(diǎn)是，即使埃德蒙頓方案顯著地提高了成功率，由于一 系列復(fù)雜的現(xiàn)象（如血液介導(dǎo)的即刻炎癥反應(yīng)（IBMIR)、炎性細(xì)胞的動(dòng)員和非特異性免 疫）所致，仍有高百分率的早期移植失敗。事實(shí)上，在人體中肝內(nèi)輸入膜島與血液介導(dǎo)的 即刻炎癥反應(yīng)、血栓W及伴隨有血液肝酶升高的肝組織缺血有關(guān)炬arshes NR等，J Am Coll Surg，2005,200(3) ;353-361;Barshes NR等，J Leukoc Biol，2005,77(5) ;587-97; Be;rtuzzi等，J Clin Elndocrinol Met油，2004,89(11) ;5724-8;Miargava R等Di油etes， 2004,53(5)，；l3ll_7;Con1:reras等，2004,53(11) ;2894-14;Johansson等，Diabetes, 2005,54(6) ;1755-62)。在肝臟中植入過(guò)程中有多達(dá)50%至75%的膜島損失（Contreras 等，同上），該被認(rèn)為是造成為實(shí)現(xiàn)血糖量正常而需要巨大數(shù)目膜島的主要原因炬arshes 等，同上）。
[0010] 另外，甚至當(dāng)移植獲得最初成功并且產(chǎn)生不依賴于受者的膜島素時(shí)，該移植的膜 島似乎也隨時(shí)間失去其功能。該一事件限制了在移植患者中實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期不依賴于膜島素 的可能，從移植起兩年后只有14%的患者表現(xiàn)出不依賴于膜島素[MelocheRMWorldJ Gastroenterol2007; 13(47) ;6；M7-6355]。
[0011] 另一個(gè)缺點(diǎn)是埃德蒙頓方案需要使用免疫抑制藥物組合；西羅莫司和他克莫司必 須終生服用或者只要移植的膜島繼續(xù)起作用就要服用。但是該些藥物具有明顯的副作用， 減少該些副作用是所期望的。來(lái)自免疫抑制治療法的并發(fā)癥是在該移植類(lèi)型中報(bào)道的第二 常見(jiàn)的嚴(yán)重事件。
[0012] 因此，仍然有必要進(jìn)一步的開(kāi)發(fā)，W改善植入物的長(zhǎng)期存活和功能，從而使對(duì)葡萄 糖隨時(shí)間的控制并減少免疫抑制治療。
[0013]CXCL8是一種由炎性介質(zhì)誘導(dǎo)的趨化因子，其參與早期組織修復(fù)并且已被證實(shí) 通過(guò)誘導(dǎo)趨化、內(nèi)皮細(xì)胞的存活和增殖來(lái)促進(jìn)血管生成（Li等，JImmunol，2003，170 ; 3369-3376)，W及作為中性粒細(xì)胞引誘劑起作用。CXCL8通過(guò)與其同源的G蛋白偶聯(lián)受體 CXCR1和CXCR2結(jié)合來(lái)發(fā)揮其作用。
[0014] 近來(lái)的文獻(xiàn)假定CXCL8可W通過(guò)誘導(dǎo)植入組織的血管重建來(lái)促進(jìn)植入（Mov址edi 等，Di油etes，2008,57 ;2128_36)。
[0015]EP1123276公開(kāi)了N-(2-芳基-丙酷基）-橫酷胺類(lèi)及其可藥用鹽（其中包括 R(-)-2-[(4-異了基苯基）丙酷基]-甲橫酷胺（I))，其作為CX化-8誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞趨 化和脫顆粒的抑制劑使用，特別是用于治療諸如牛皮癖、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、潰瘍性結(jié)腸炎、 急性呼吸功能不全（ARD巧、先天性纖維化和腎小球腎炎等疾病。
[0016]EP1355641公開(kāi)了R(-)-2-[(4-異了基苯基）丙酷基]-甲橫酷胺及其可藥用鹽 (特別是其賴氨酸鹽）在預(yù)防和治療移植器官的缺血/再灌注損傷W及在實(shí)質(zhì)器官（特別 是需要從供者取得并在移植前儲(chǔ)存的腎）移植后由于排斥反應(yīng)而導(dǎo)致的功能性損傷。所述 損傷被認(rèn)為是造成植入物功能延遲的原因，該使得有必要在腎移植后進(jìn)行透析。
[0017]EP1579859公開(kāi)了N-(2-芳基-丙酷基）-橫酷胺類(lèi)（其中包括R(-)-2-[(4-異了 基苯基）丙酷基]-甲橫酷胺及其賴氨酸鹽）在制備用于治療脊髓損傷的藥物中的用途。

【發(fā)明內(nèi)容】

[001引本發(fā)明人出乎意料地發(fā)現(xiàn)，與從現(xiàn)有技術(shù)教導(dǎo)中所期望的相反，CXCR1和/或CXCR2的激動(dòng)劑對(duì)膜島移植后的膜島存活是有害的。如在之后的實(shí)施例中將描述的，與野生 型小鼠相比，當(dāng)將膜島移植到CXCR2敲除的BALB/C小鼠中時(shí)，膜島表現(xiàn)出增強(qiáng)的功能和存 活，并且與對(duì)照小鼠相比具有持續(xù)更好的葡萄糖耐量和更低的葡萄糖濃度。
[0019] 另外，本發(fā)明人實(shí)施的實(shí)驗(yàn)清楚地證明了抑制CXCR1和/或CXCR2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的化 合物能夠有效地改善膜島移植后植入物的存活和功能。
[0020] 因此，本申請(qǐng)的第一個(gè)目的是CXCR1和/或CXCR2的抑制劑作為佐劑在1型糖尿 病患者膜島移植中的用途。
[0021] 對(duì)于根據(jù)本發(fā)明的"CXCR1和/或CXCR2的抑制劑"而言，其意指能夠阻遏CX化8 之源自CXCR1和/或CXCR2活化的生物學(xué)活性的化合物。該些化合物可W是所述受體的競(jìng) 爭(zhēng)性括抗劑或變構(gòu)抑制劑。
[0022] 本發(fā)明優(yōu)選的化合物是式I化合物或其可藥用鹽：
[0023]
[0024] 其中，R選自直鏈或支鏈的4- (Ci-Ce)烷基、4-S氣甲橫酷氧基或3-苯甲酯基，并 且Ri是直鏈或支鏈的（Ci-Ce)烷基。具體地，根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的化合物是R(-)-2-[(4-異 了基苯基）丙酷基]-甲橫酷胺（通常稱為瑞帕他辛化epertaxin)或瑞帕利辛，在下文中 稱為瑞帕利辛）和R(-)-2-[(4'-=氣甲橫酷氧基）苯基]-丙酷基-甲橫酷胺（通常并且 在下文中稱為莫瑞辛（Meraxin))。
[0025] 本發(fā)明化合物的優(yōu)選的鹽是賴氨酸鹽和鋼鹽。本發(fā)明化合物的特別優(yōu)選的鹽是瑞 帕利辛的賴氨酸鹽和莫瑞辛的鋼鹽。
【附圖說(shuō)明】
[0026] 圖1 ;圖A表示在敲除小鼠（淡色線）和野生型小鼠（黑線）中從同系移植400膜 島的-1天至移植后巧天測(cè)量的非禁食性血糖（單位為mg/dl)。圖B表示口服葡萄糖耐 量試驗(yàn)（OGTT)的結(jié)果。在施用葡萄糖之前W及口服葡萄糖后10分鐘、20分鐘、30分鐘、60 分鐘和90分鐘后立即測(cè)定血糖（單位為mg/dl)。示出每只動(dòng)物的血液葡萄糖曲線。
[0027] 圖2;圖A表示移植后在瑞帕利辛巧巧arixin)處理的小鼠（實(shí)線）或?qū)φ招∈?(虛線）中在不同時(shí)間時(shí)的血糖。圖B表示Cox回歸多變量分析。
[002引圖3a和3b用散點(diǎn)示出在瑞帕利辛存在或不存在時(shí)移植有來(lái)自同一分離物之膜島 的小鼠在口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（0GTT)(圖3a)和靜脈葡萄糖耐量試驗(yàn)（IVGTT)(圖3b)中 獲得的平均值。標(biāo)記指明該分離物的數(shù)目。方形和圓形分別表示移植有250膜島當(dāng)量（1巧 或150膜島當(dāng)量的小鼠。上圖和下圖分別示出移植后1個(gè)月和3個(gè)月的數(shù)據(jù)。實(shí)線是鑒 別線；在鑒別線上方的圓形表示在瑞帕利辛組中比在載劑處理組（A+)中具有更高的觀測(cè) 值。
[0029] 圖4表示在移植有150膜島當(dāng)量（圖A)或250膜島當(dāng)量（圖B)的瑞帕利辛處理 的動(dòng)物和載劑處理的動(dòng)物移植后24小時(shí)和48小時(shí)時(shí)的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT)的循環(huán)水 平。
[0030] 圖5 ;圖A表示在用瑞帕利辛、雷帕霉素、瑞帕利辛+雷帕霉素或載劑處理的小鼠