一種兔兒傘總黃酮的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種兔兒傘總黃酮的提取方法，尤其涉及一種利用生物酶協(xié)同超聲波提取兔兒傘總黃酮的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]兔兒傘為菊科兔兒傘屬多年生草本植物，其幼苗嫩葉均可食用，根和全草均可入藥，既有藥用價(jià)值又有經(jīng)濟(jì)價(jià)值。兔兒傘治療風(fēng)濕麻木、關(guān)節(jié)疼痛、癰疽瘡腫、跌打損傷、月經(jīng)失調(diào)等癥效果顯著，是我國(guó)民間習(xí)用藥材之一。兔兒傘中黃酮類(lèi)化合物及生物堿含量較高，經(jīng)研宄表明，兔兒傘總黃酮具有顯著的抗炎、鎮(zhèn)痛及消腫的作用。
[0003]目前關(guān)于兔兒傘總黃酮的提取的專(zhuān)利和文獻(xiàn)較少，通常采用溶劑萃取法、或微波提取法等，其工藝復(fù)雜、收率低并采用多種溶劑，生產(chǎn)成本高。如文獻(xiàn)“兔兒傘總黃酮的微波提取工藝”(作者，吳素珍、李加林等)，取兔兒傘干燥粉末直接置于微波反應(yīng)釜，以乙醇為溶劑的條件下提取lOmin，其得率達(dá)到11%，但微波產(chǎn)能較高，易破壞熱不穩(wěn)定成分，從而影響兔兒傘總黃酮的提取。
[0004]本發(fā)明利用酶解破壞細(xì)胞壁和超聲波的空化效應(yīng)，在低溫下即可得到高的提取率，為熱不穩(wěn)定物質(zhì)的提取提供了一種新的強(qiáng)化方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種兔兒傘總黃酮的提取方法，該方法具有工藝簡(jiǎn)單、易操作、提取時(shí)間短、提取率高、對(duì)環(huán)境友好的優(yōu)點(diǎn)。
[0006]本發(fā)明包括以下步驟:
a.將兔兒傘烘干，粉碎，過(guò)20目篩；
b.向上述原料中加入1~2倍的蒸餾水，再加入原料重量2~5%的生物酶，控溫在45-55 0C，攪拌，酶解時(shí)間為2~3h ；
c.將酶轉(zhuǎn)化后的物料再加入6~8倍的60~70%的乙醇，置于頻率為40KHz的超聲波提取器中，于60~70 °C的條件下提取2~4h，離心，取出上清液；
d.將步驟c中的上清液濃縮后，上大孔吸附樹(shù)脂柱，先用蒸餾水除雜，再用5~7BV的50-70%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，得兔兒傘總黃酮。
[0007]步驟b中所述的生物酶為質(zhì)量比2:1的纖維素酶和半纖維素酶的混合物。
[0008]步驟d中所述的大孔吸附樹(shù)脂型號(hào)為NKA-9、H1020、D-1Ol中的任意一種。
[0009]本發(fā)明選用生物酶(纖維素酶和半纖維素酶為主體的復(fù)合酶)在適宜溫度下酶解兔兒傘。由于纖維素酶和半纖維素酶能水解結(jié)構(gòu)致密的植物細(xì)胞壁，使其疏松、膨脹、崩潰，從而增大了有效成分的擴(kuò)散面積，減小了阻力，提高了有效成分的得率。再結(jié)合超聲波的空化效應(yīng)，加劇運(yùn)動(dòng)，使胞外液容易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，溶解并釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，具有強(qiáng)力、瞬時(shí)、高效的特點(diǎn)。該方法工藝簡(jiǎn)單、成本低、萃取效率高、對(duì)環(huán)境友好，同時(shí)也保證了兔兒傘總黃酮的生物活性。
[0010]下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。
[0011]【具體實(shí)施方式】:
實(shí)施例1:
將兔兒傘烘干，粉碎，過(guò)20目篩；向上述原料中加入I倍的蒸餾水，再加入原料重量2%的生物酶(纖維素酶與半纖維素酶的質(zhì)量比為2:1)，控溫在45°C，攪拌，酶解時(shí)間為2h;將酶轉(zhuǎn)化后的物料再加入6倍的60%的乙醇，置于頻率為40KHz的超聲波提取器中，于60°C的條件下提取2h，離心，取出上清液，濃縮后，上D-101大孔吸附樹(shù)脂柱，先用蒸餾水除雜，再用5BV的50%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，得兔兒傘總黃酮，其得率為12.8%，經(jīng)UV檢測(cè)，總黃酮含量為93.4%。
[0012]實(shí)施例2:
將兔兒傘烘干，粉碎，過(guò)20目篩；向上述原料中加入2倍的蒸餾水，再加入原料重量4%的生物酶(纖維素酶與半纖維素酶的質(zhì)量比為2:1)，控溫在50°C，攪拌，酶解時(shí)間為3h;將酶轉(zhuǎn)化后的物料再加入7倍的65%的乙醇，置于頻率為40KHz的超聲波提取器中，于65°C的條件下提取3h，離心，取出上清液，濃縮后，上NKA-9大孔吸附樹(shù)脂柱，先用蒸餾水除雜，再用6BV的60%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，得兔兒傘總黃酮，其得率為14.1%，經(jīng)UV檢測(cè)，總黃酮含量為95.8%。
[0013]實(shí)施例3:
將兔兒傘烘干，粉碎，過(guò)20目篩；向上述原料中加入2倍的蒸餾水，再加入原料重量5%的生物酶(纖維素酶與半纖維素酶的質(zhì)量比為2:1)，控溫在55°C，攪拌，酶解時(shí)間為4h;將酶轉(zhuǎn)化后的物料再加入8倍的70%的乙醇，置于頻率為40KHz的超聲波提取器中，于70°C的條件下提取4h，離心，取出上清液，濃縮后，上H1020大孔吸附樹(shù)脂柱，先用蒸餾水除雜，再用7BV的70%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，得兔兒傘總黃酮，其得率為14.2%，經(jīng)UV檢測(cè)，總黃酮含量為90.2%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種兔兒傘總黃酮的提取方法，其特征在于，包括以下步驟: a.將兔兒傘烘干，粉碎，過(guò)20目篩； b.向上述原料中加入1~2倍的蒸餾水，再加入原料重量2~5%的生物酶，控溫在45-55 0C，攪拌，酶解時(shí)間為2~3h ； c.將酶轉(zhuǎn)化后的物料再加入6~8倍的60~70%的乙醇，置于頻率為40KHz的超聲波提取器中，于60~70 °C的條件下提取2~4h，離心，取出上清液； d.將步驟c中的上清液濃縮后，上大孔吸附樹(shù)脂柱，先用蒸餾水除雜，再用5~7BV的50-70%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，得兔兒傘總黃酮。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種兔兒傘總黃酮的提取方法，其特征在于，步驟b中所述的生物酶為質(zhì)量比2:1的纖維素酶和半纖維素酶的混合物。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種兔兒傘總黃酮的提取方法，其特征在于，步驟d中所述的大孔吸附樹(shù)脂型號(hào)為NKA-9、H1020、D-101中的任意一種。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種兔兒傘總黃酮的提取方法，其處理步驟包括：a.兔兒傘干燥、粉碎，過(guò)20目篩；b.生物酶酶解；c.超聲波輔助提?。籨.大孔吸附樹(shù)脂純化，濃縮干燥即得兔兒傘總黃酮。本發(fā)明以兔兒傘為原料，充分利用酶解和超聲波的疊加效果，最大限度的溶出兔兒傘中的兔兒傘總黃酮，提高了兔兒傘總黃酮的得率。本發(fā)明具有工藝簡(jiǎn)單、提取時(shí)間短、提取率高、反應(yīng)條件溫和的優(yōu)點(diǎn)，對(duì)環(huán)境友好，同時(shí)也保證了兔兒傘總黃酮的生物活性。
【IPC分類(lèi)】A61K36/28, A61P29/00
【公開(kāi)號(hào)】CN104922175
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510262611
【發(fā)明人】劉東鋒, 楊成東
【申請(qǐng)人】南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司
【公開(kāi)日】2015年9月23日
【申請(qǐng)日】2015年5月22日