用于治療眼障礙的方法
【專利說明】用于治療眼障礙的方法
[0001] 公開內(nèi)容背景 Wnt基因家族編碼一大類與Intl/Wntl原癌基因和果幡無翅（Drosophila wingless) ("Wg")(果幡 Wntl 同系物）（Cadigan 等人（1997)Genes & Development 11:3286-3305) 相關(guān)的分泌性蛋白質(zhì)。fct在多種組織和器官中表達(dá)，并且是許多發(fā)育過程所需的，所述 發(fā)育過程包括果蠅的分段；秀麗隱桿線蟲（C. elegans)的內(nèi)胚層發(fā)育；以及哺乳動物的肢 極性建立、神經(jīng)嵴分化、腎形態(tài)建成、性別決定和腦發(fā)育（Parr，等人（1994)Curr. Opinion Genetics & Devel. 4:523-528)。Wnt途徑是在胚胎發(fā)生期間和在成熟生物兩者的發(fā)育 的主要調(diào)節(jié)物（Eastman,等人（1999)Curr Opin Cell Biol 11: 233-240 ;Peifer,等人 (2000)Science 287: 1606-1609)。
[0002] Wnt信號通過七跨膜域受體的Frizzled(〃Fz〃）家族轉(zhuǎn)導(dǎo)（Bhanot等人（1996) Nature 382:225-230)。Frizzled細(xì)胞表面受體（Fzd)在經(jīng)典和非經(jīng)典Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)兩者 中均發(fā)揮重要作用。在經(jīng)典途徑中，F(xiàn)zd和LRP5/6(低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白質(zhì)5和6) 通過fct蛋白質(zhì)活化后生成信號，其阻止通過"β連環(huán)蛋白破壞復(fù)合物"的β連環(huán)蛋白 磷酸化和降解，允許穩(wěn)定的β連環(huán)蛋白易位和在核中累積，并且因此允許fct信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。 (Perrimon(1994)Cell 76:781-784)(Miller, J. R. (2001)Genome Biology ；3 (I):1-15)〇 非經(jīng)典Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑較不充分確定：存在已提議的至少兩種非經(jīng)典Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑， 包括平面細(xì)胞極性（PCP)途徑，Wnt/Ca++途徑和匯聚延伸途徑。
[0003] 糖原合酶激酶3 (GSK3)、腫瘤抑制基因產(chǎn)物APC (腺瘤性結(jié)腸息肉病） (Gumbiner (1997) Curr. Biol. 7: R443-436)和支架蛋白Axin均為Wnt途徑的負(fù)調(diào)節(jié)物，并 且一起形成"β連環(huán)蛋白破壞復(fù)合物"。在不存在fct配體的情況下，這些蛋白質(zhì)形成復(fù)合 物且促進(jìn)β連環(huán)蛋白的磷酸化和降解，而fct信號轉(zhuǎn)導(dǎo)使復(fù)合物失活且阻止β連環(huán)蛋白 降解。穩(wěn)定的β連環(huán)蛋白因此易位至核，在其中它結(jié)合TCF(T細(xì)胞因子）轉(zhuǎn)錄因子（也稱 為淋巴樣增強(qiáng)子結(jié)合因子-1〇^?1))，且充當(dāng)^^/1^?誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄的輔激活物?化似，等人 (2000)Cell 103: 311-320 ;Polakis，等人（2000)Genes Dev 14: 1837-1851)。
[0004] Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)經(jīng)由經(jīng)典和非經(jīng)典機(jī)制發(fā)生。在經(jīng)典途徑中，F(xiàn)zd和LRP5/6通過Wnt 蛋白質(zhì)活化后，穩(wěn)定的β連環(huán)蛋白在核中累積且導(dǎo)致TCF靶基因活化（如上所述；Miller， J. R. (2001) Genome Biology ;3(1) :1-15)。非經(jīng)典Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑較不充分確定：已提 議至少兩種非經(jīng)典fct信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，包括平面細(xì)胞極性（PCP)途徑和Wnt/Ca ++途徑。
[0005] 視神經(jīng)和視網(wǎng)膜的疾病和變性病癥是全世界的失明主因。黃斑變性（MD)是負(fù)責(zé) 高敏銳度視力，稱為黃斑的中央視網(wǎng)膜部分中的光感受器的喪失。年齡相關(guān)性黃斑變性 (AMD)描述為"干性"或"濕性"。濕性、滲出性、新生血管形式的AMD影響約10%的具有AMD 的人，并且特征在于生長穿過視網(wǎng)膜色素上皮（RPE)的異常血管，導(dǎo)致出血、滲出物、結(jié)瘢 或漿液性視網(wǎng)膜脫離。百分比九十的AMD患者具有干燥形式，特征在于視網(wǎng)膜色素上皮的 萎縮和黃斑光感受器的喪失。目前不存在任何形式的MD或AMD的治愈，盡管已用光動力療 法在減弱方面獲得一些成功。
[0006] 青光眼是起因于幾種不同的眼疾病的病癥，其通過對視神經(jīng)的損害引起視力喪 失。由于眼排出不足夠而升高的眼內(nèi)壓（IOP)是青光眼的最常見原因。青光眼通常隨著眼 老化而發(fā)展，或它可以由于眼損傷、炎癥、腫瘤或者在白內(nèi)障或糖尿病的晚期病例中發(fā)生。 它還可以通過由用類固醇治療引起的IOP的增加引起。證明在青光眼中有效的藥物療法通 過減少玻璃體液產(chǎn)生或通過促進(jìn)眼排出而降低Ι0Ρ。此類試劑通常是血管擴(kuò)張劑，并且像這 樣作用于交感神經(jīng)系統(tǒng)且包括腎上腺素能拮抗劑。
[0007] 存在用于眼障礙的新治療的迫切需要，所述眼障礙例如黃斑變性（MD)、年齡相關(guān) 性黃斑變性（AMD)、青光眼、白內(nèi)障、色素性視網(wǎng)膜炎（retinitis pigmentosa)、脈絡(luò)膜新生 血管形成（choroidal neovascularization)、視網(wǎng)膜變性（retinal degeneration)和氧誘 導(dǎo)視網(wǎng)膜病變（oxygen-induced retinopathy)。
[0008] 公開內(nèi)容概述 本公開內(nèi)容一般涉及α螺旋模擬結(jié)構(gòu)，且具體涉及為β連環(huán)蛋白抑制劑的α螺旋模 擬結(jié)構(gòu)。公開內(nèi)容還涉及在眼病癥例如黃斑變性和青光眼治療中的應(yīng)用，以及包含此類α 螺旋模擬β連環(huán)蛋白抑制劑的藥物組合物。
[0009] 附圖簡述 圖I A-1D.在用化合物A處理后，分裂免疫細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和米勒 細(xì)胞數(shù)目。化合物A是4- (((6S，9S，9aS) -1-(芐基氨基甲酰基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧 代-8-(喹啉-8-基甲基）八氫-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-6-基）甲基）苯基二 氫磷酸酯。（A)，化合物A處理不影響免疫細(xì)胞應(yīng)答。（B-D)，相對于對照媒介物水平，在視 網(wǎng)膜脫離后的增殖神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞（A)、米勒細(xì)胞（B)和星形膠質(zhì)細(xì)胞（D)數(shù)目的增加在用化 合物A處理的眼中減弱。
[0010] 圖2A-2B.在用化合物A處理后，神經(jīng)膠質(zhì)瘢痕頻率和大小的定量分析。（A)，神經(jīng) 膠質(zhì)瘢痕的頻率在用化合物A處理后顯著降低。（B)平均神經(jīng)膠質(zhì)長度在用化合物A處理 后顯著降低。
[0011] 圖3A-3D.免疫組織化學(xué)鑒定出作為延伸到視網(wǎng)膜下間隙內(nèi)的波形蛋白標(biāo)記的米 勒細(xì)胞突存在可見的視網(wǎng)膜下神經(jīng)膠質(zhì)增生（或結(jié)瘢）。0S，外層/視網(wǎng)膜下間隙；ONLjF 核層；GCL，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層。（A-B)，媒介物處理的眼。在脫離后，波形蛋白表達(dá)在米勒細(xì)胞 中增加，并且米勒細(xì)胞突可見延伸進(jìn)入視網(wǎng)膜下間隙內(nèi)（箭頭）。箭頭指向分裂米勒細(xì)胞。 (C-D)，化合物A處理了的眼。未觀察到生長進(jìn)入視網(wǎng)膜下間隙內(nèi)的米勒細(xì)胞。一個(gè)分裂細(xì) 胞（星形膠質(zhì)細(xì)胞）存在于GCL中（箭頭）。
[0012] 圖4A-4B.在用化合物A或化合物C處理后的CNV損害大小。化合物C是 (6S，9S，9aS) -N-芐基-6- (4-羥基芐基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基） 八氫-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺。（A)，在第15天時(shí)的平均CNV損害大 小。（B)，在第22天時(shí)的平均CNV損害大小。
[0013] 公開內(nèi)容詳述 近來，已開發(fā)了非肽化合物，其模擬生物活性蛋白質(zhì)或肽中發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)角 (reverse-turn)的二級結(jié)構(gòu)。例如，美國專利號5, 440, 013以及公開的PCT申請?zhí)?W094/03494、W001/00210A1和W001/16135A2,各自公開了構(gòu)象約束的非肽化合物，其模擬 轉(zhuǎn)角的三維結(jié)構(gòu)。另外，美國專利號5, 929, 237及其部分繼續(xù)申請美國專利號6, 013, 458 公開了構(gòu)象約束的化合物，其模擬生物活性肽和蛋白質(zhì)中的轉(zhuǎn)角區(qū)域的二級結(jié)構(gòu)。與轉(zhuǎn)角 模擬物相關(guān)，已公開了構(gòu)象約束的化合物，其模擬W02007/056513和W02007/056593中的生 物活性肽和蛋白質(zhì)中的α螺旋區(qū)域的二級結(jié)構(gòu)。
[0014] 本發(fā)明的α螺旋模擬β連環(huán)蛋白抑制劑的相關(guān)結(jié)構(gòu)和化合物公開于WO 2010/044485、TO 2010/128685、TO 2009/148192 和 US 2011/0092459,其各自整體引入本 文作為參考。這些化合物目前已發(fā)現(xiàn)可用于治療眼病癥和障礙，例如黃斑變性和青光眼。 雖然不希望被束縛，但這些化合物在治療這些病癥中的有效性部分基于這些化合物抑制β 連環(huán)蛋白的能力，從而改變fct途徑信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，已發(fā)現(xiàn)這改善多種眼疾病和病癥。
[0015] 本發(fā)明的α螺旋模擬β連環(huán)蛋白抑制劑的優(yōu)選結(jié)構(gòu)具有下式（I):
其中 A 是 _CHR7_， 其中 R7是任選取代的芳基烷基、任選取代的雜芳基烷基、任選取代的環(huán)烷基烷基或任選取 代的雜環(huán)烷基烷基； G 是-NH-、-NR6-或-0-其中 R6是低級烷基或低級烯基； R1 是-Ra-R 10; 其中 Ra是任選取代的低級亞烷基，和 Rltl是任選取代的二環(huán)稠合芳基或任選取代的二環(huán)稠合雜芳基； R2是- (CO)-NH-Rb-R 20， 其中 Rb是鍵或任選取代的低級亞烷基；和 R2tl是任選取代的芳基或任選取代的雜芳基；和 R3是C η烷基。
[0016] 這些化合物尤其可用于預(yù)防和/或治療眼病癥，例如黃斑變性和青光眼。
[0017] 本發(fā)明的α螺旋模擬β連環(huán)蛋白抑制劑的更優(yōu)選結(jié)構(gòu)具有在上述式（I)中的下 述取代基： A 是 _CHR7_， 其中 R7是任選由羥基或C η烷基取代的芳基烷基； G 是-NH-、-NR6-或-0_ 其中 R6是C i_4烷基或C i_4烯基； R1 是-Ra-R 10; 其中 Ra是