一種刺激敏感型透明質(zhì)酸原位凝膠的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)計(jì)用于關(guān)節(jié)腔局部注射用溫度刺激敏感型透明 質(zhì)酸原位凝膠及制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 關(guān)節(jié)腔注射給藥可以將藥物直接作用于靶部位，提高局部濃度，避免體內(nèi)生理轉(zhuǎn) 運(yùn)屏障，改變藥物的分布模式，以小劑量發(fā)揮藥效，改善口服藥物長(zhǎng)期服用易產(chǎn)生的胃腸道 不良反應(yīng)，因此在關(guān)節(jié)炎的治療中具有廣泛地應(yīng)用。專利CN100594029、CN101112378和 CN101940587B等均公開了關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射給藥治療關(guān)節(jié)炎的方法。這種制劑具有多種優(yōu)勢(shì)： 緩釋長(zhǎng)效；可降低藥物在關(guān)節(jié)腔的清除率；可減少大劑量藥物的刺激性；可避免反復(fù)給藥 的感染；藥物僅需在注射部位有活性，降低毒副作用等。該類制劑數(shù)日甚至數(shù)月注射一次， 顯著增強(qiáng)藥物有效性與安全性，提高患者順應(yīng)性。
[0003] 溫度敏感型原位凝膠是一種依賴溫度而發(fā)生相轉(zhuǎn)變的凝膠。它在儲(chǔ)藏條件下是自 由流動(dòng)的液體，注射進(jìn)入人體后可填充于組織間隙，迅速發(fā)生相轉(zhuǎn)變，在注射部位形成半固 體狀態(tài)凝膠，達(dá)到局部給藥或延緩藥物釋放的目的。它具有可注射、創(chuàng)傷小、給藥方便、控制 藥物釋放等優(yōu)點(diǎn)，適用于體內(nèi)局部注射給藥。泊洛沙姆（Poloxamer)是研宄最深入的制備 溫度敏感原位凝膠的高分子材料。目前專利和文獻(xiàn)資料報(bào)道的溫敏凝膠的主要基質(zhì)材料多 為泊洛沙姆 407(商品名為Plxxronic? F127 )，如 CN1230108A、CN101185650A、CN1593386A、 CN1377706A、CN100422268C、CN02109503. 5 等。其中，濃度為 20% -30%的 F127 水溶液具 有受熱反向膠凝的性質(zhì)，即冷藏溫度下是自由流動(dòng)的液體，而室溫或體溫時(shí)形成澄明的凝 膠。雖然泊洛沙姆具有良好的生物相容性、安全性和無刺激過敏性，但成本高，溫度調(diào)節(jié)范 圍寬。CN101327183A和CN102125516A等專利公開了殼聚糖溫敏原位凝膠藥劑的制備方法， 其制備溫度為0-40°C，因此通過殼聚糖和泊洛沙姆共同調(diào)節(jié)，能夠更好地達(dá)到人體生理?xiàng)l 件下的溫度敏感性。
[0004] 透明質(zhì)酸關(guān)節(jié)腔注射給藥是治療關(guān)節(jié)炎的常用方法。目前臨床常用的透明質(zhì)酸關(guān) 節(jié)腔注射劑有 Hyalgan、Artz、NRD_101、Hylan G-F20 等。其中，Hylan G-F20 為美國(guó) Genzyme 公司生產(chǎn)的透明質(zhì)酸凝膠注射液。專利CN02822420. 5、US2006003964和CN101112381A均 公開了透明質(zhì)酸用于關(guān)節(jié)腔內(nèi)給藥治療關(guān)節(jié)炎的方法。但是僅注射單一的透明質(zhì)酸普通凝 膠注射劑還存在一定的缺陷，如體內(nèi)滯留時(shí)間短，易被HA酶降解；體外形成凝膠后注射，使 用具有一定難度；沒有包載治療藥物、起效較慢等。因此，對(duì)透明質(zhì)酸進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，制備包 載藥物的緩釋制劑顯得尤為重要。文獻(xiàn)等也研宄報(bào)道了透明質(zhì)酸和NSAIDs組合治療能迅 速改善關(guān)節(jié)炎患者的臨床癥狀，并且在維持良好療效的同時(shí)，能顯著降低NSAIDs的用量。 本發(fā)明通過透明質(zhì)酸-泊洛沙姆和殼聚糖-泊洛沙姆制備凝膠不但更好地調(diào)節(jié)敏感溫度， 而且能夠增大凝膠的疏水區(qū)域，提高載藥量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種溫度刺激敏感型透明質(zhì)酸原位凝膠制劑，以達(dá)到提高載 藥量，降低藥物不良反應(yīng)，減少給藥次數(shù)，發(fā)揮協(xié)同治療關(guān)節(jié)炎的效果。本發(fā)明凝膠由包載 藥物的兩種生物相容性的高分子聚合物通過物理交聯(lián)的方式形成的。
[0006] 本發(fā)明的另一目的是提供包載藥物的溫敏型原位凝膠的制備方法。
[0007] 上述的凝膠是由高分子聚合物由化學(xué)合成的透明質(zhì)酸-泊洛沙姆和殼聚糖-泊洛 沙姆組成。
[0008] 其中，透明質(zhì)酸的分子量為50萬-500萬道爾頓，優(yōu)選70萬-200萬道爾頓；殼聚 糖的脫乙酰度為70 % -100%，優(yōu)選80 % -95%。殼聚糖的分子量為10萬-300萬，優(yōu)選25 萬-90萬；泊洛沙姆為Pluronic F127〇
[0009] 上述凝膠中的透明質(zhì)酸-泊洛沙姆和殼聚糖-泊洛沙姆的重量比在10:1 _ 1 :1〇 之間，優(yōu)選3:1 - 1:2之間。
[0010] 上述凝膠中藥物包括塞來昔布、雙氯芬酸、美洛昔康、依托度酸、酮洛芬、萘丁美 酮、吲哚美辛、羅非昔布的一種或幾種組合。
[0011] 上述凝膠中的藥物可以包載或分散于聚合物中。聚合物的濃度和載藥量不受限 制，除非影響到聚合物的膠凝行為，使其不能形成凝膠。
[0012] 上述凝膠具有溫度敏感性質(zhì)，當(dāng)溫度低于體溫時(shí)，以納米混懸液形式存在，在注射 部位溫度升高至體溫，制劑由納米混懸液轉(zhuǎn)變成凝膠，延長(zhǎng)藥物的釋放時(shí)間。
[0013] 本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案加以實(shí)現(xiàn)的，將Pluronic F-127分別鏈接到透明質(zhì)酸 和殼聚糖主鏈上，形成兩親性共聚物，溫度低于30°C的條件下，聚合物溶液通過自組裝包載 藥物，制備納米凝膠混懸液。然后，將納米凝膠注射到體內(nèi)，在體溫度下形成原位凝膠。
【附圖說明】
[0014] 圖1為凝膠對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞的毒性影響。
[0015] 圖2為凝膠在不同溫度下的藥物釋放曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 以下通過具體實(shí)施例來對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)的說明，但是本發(fā)明的范圍并不限于 以下實(shí)施例。
[0017] 實(shí)施例1
[0018] 將活化后的泊洛沙姆F127與透明質(zhì)酸溶于去離子水中，加入硫酸銅及抗壞血酸 鈉，于40°C、氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下反應(yīng)48h。反應(yīng)結(jié)束后，去離子水中透析3d，冷凍干燥得透明質(zhì) 酸-泊洛沙姆聚合物。
[0019] 將聚合物懸浮于PBS緩沖液（pH 7. 4)中，探頭超聲6min (工作功率90W，工作脈沖 為工作Is暫停5s)，可得空白納米凝膠混懸液。將羅非昔布溶于DMF溶液中，共聚物溶于甲 酰胺溶液中，攪拌過夜后混合后，用PBS緩沖液（pH 7. 4)透析12h，離心取上清液，過濾后凍 干，制得載藥溫敏納米凝膠混懸液。
[0020] 實(shí)施例2
[0021] 以4-二甲基吡啶（DMAP)為催化劑，將泊洛沙姆與丁二酸酐溶于1，4-二氧六環(huán) 中，滴加少量三乙胺，室溫反應(yīng)24h。然后，將其與殼聚糖溶于pH4-5的緩沖液中，加入EDC/ NHS活化后，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后，蒸餾水透析三天，冷凍干燥得到白色殼聚 糖-泊洛沙姆聚合物。
[0022] 實(shí)施例3
[0023] 透明質(zhì)酸-泊洛沙姆和殼聚糖-泊洛沙姆聚合物溶于PBS緩沖液（pH 7.4)中，攪 拌過夜后，超聲細(xì)胞粉碎機(jī)探頭超聲6min (工作功率90W，工作脈沖為工作Is暫停5s)，制 備空白納米凝膠混懸液。測(cè)定其對(duì)細(xì)胞的毒性（圖1)。
[0024] 實(shí)施例4
[0025] 將塞來昔布溶于DMF溶液中，兩種聚合物溶于甲酰胺溶液中，攪拌過夜后混合后， 用PBS緩沖液（pH 7. 4)透析12h，離心取上清液，過濾后凍干，復(fù)溶，制得載藥溫敏納米凝膠 混懸液。不同溫度下的體外藥物釋放曲線如圖2。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種溫度刺激敏感型透明質(zhì)酸原位凝膠及其制備方法，其特征在于，該凝膠是由包 載藥物的生物相容性和生物可降解性的高分子聚合物通過物理交聯(lián)的方式形成的。2. 如權(quán)利要求1所述的凝膠，其中的高分子聚合物由化學(xué)合成的透明質(zhì)酸-泊洛沙姆 和殼聚糖-泊洛沙姆組成。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的凝膠，其中的透明質(zhì)酸的分子量為50萬-500萬道爾頓，優(yōu)選 70萬-200萬道爾頓。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的凝膠，其中的殼聚糖的脫乙酰度為70 % -100 %，優(yōu)選 80% -95%。殼聚糖的分子量為10萬-300萬，優(yōu)選25萬-90萬。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的凝膠，其中的泊洛沙姆為Pluronic F127。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的凝膠，其中的透明質(zhì)酸-泊洛沙姆和殼聚糖-泊洛沙姆的重 量比在10:1-1 :10之間，優(yōu)選3:1-1:2之間。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的凝膠，其中藥物包括塞來昔布、雙氯芬酸、美洛昔康、依托度 酸、酮洛芬、萘丁美酮、吲哚美辛、羅非昔布的一種或幾種組合。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的凝膠，其中藥物可以包載或分散于聚合物中。聚合物的濃度 和載藥量不受限制，除非影響到聚合物的膠凝行為，使其不能形成凝膠。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的凝膠，具有溫度敏感性質(zhì)，當(dāng)溫度低于體溫時(shí)，以納米混懸液 形式存在，在注射部位溫度升高至體溫，制劑由納米混懸液轉(zhuǎn)變成凝膠，延長(zhǎng)藥物的釋放時(shí) 間。10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的溫度刺激敏感型透明質(zhì)酸原位凝膠的制備方法，其中將 Pluronic F-127分別鏈接到透明質(zhì)酸和殼聚糖主鏈上，形成兩親性共聚物，溫度低于30°C 的條件下，聚合物溶液通過自組裝包載藥物，制備納米凝膠混懸液。然后，將納米凝膠注射 到體內(nèi)，在體溫度下形成原位凝膠。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種溫度刺激敏感型透明質(zhì)酸原位凝膠及其制備方法，其載體為透明質(zhì)酸-泊洛沙姆和殼聚糖-泊洛沙姆兩種生物可降解性高分子聚合物，藥物通過物理方式包載到凝膠內(nèi)。該凝膠具有溫度敏感反向凝膠的特性，溫度低于體溫時(shí)，以納米凝膠液體形式存在，可通過注射器注入到體內(nèi)；在體內(nèi)溫度達(dá)到體溫時(shí)，其由納米混懸液轉(zhuǎn)變成原位固態(tài)或半固態(tài)凝膠，維持藥物緩慢釋放。本發(fā)明的凝膠劑可攜載難溶性藥物，生物相溶性好，安全無毒。
【IPC分類】A61K47/36, A61K31/365, A61K47/34, A61K9/10, A61K9/06, A61P19/02
【公開號(hào)】CN104940138
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510333313
【發(fā)明人】劉松巖, 邱立朋, 劉婷婷, 莊小鶯, 朱佳鳳, 慕松林, 陳敬華
【申請(qǐng)人】江南大學(xué)
【公開日】2015年9月30日
【申請(qǐng)日】2015年6月16日