用于治療貧血的方法
【專利說明】用于治療貧血的方法
[0001] 本申請要求2012年10月24日提交的美國臨時專利申請?zhí)?1/718, 128的優(yōu)先權(quán)， 其公開內(nèi)容通過引用以其整體結(jié)合到本文中。
[0002] 1?引言
[0003] 本文提供用于治療貧血的方法，其中所述方法包括將生長分化因子11(⑶Fll;亦 稱為骨形態(tài)生成蛋白Il(BMPll))的拮抗劑給予需要所述治療的對象。
[0004] 2.發(fā)明背景
[0005] 貧血是一種紅細胞數(shù)減少或小于正常量或血液中的血紅蛋白功能降低的疾病。貧 血是最常見的血液病癥。
[0006] 貧血可能由無效紅細胞發(fā)生（ineffective erythropoiesis)引起。如果發(fā)生有 效紅細胞發(fā)生但成熟的紅細胞不能以適當(dāng)?shù)乃俾拾l(fā)育，則存在無效紅細胞發(fā)生。在達到紅 細胞成熟期之前，祖細胞進行細胞凋亡。貧血還包括血紅蛋白的氧結(jié)合能力降低。
[0007] 地中海貧血是一種無效紅細胞發(fā)生的形式。在地中海貧血中，無效紅細胞發(fā)生 的特征在于成熟中的有核類紅細胞（erythroid cell)凋亡。具體地說，|3地中海貧血 (beta-thalassemia)是一種特征在于血紅蛋白（或Hgb)合成缺陷導(dǎo)致紅細胞成熟和產(chǎn)生 受損的疾病。所述減少主要被認為是由于在紅細胞分化的晚嗜堿性（late basophilic)/ 多染性成紅細胞（polychromatic erythroblast)期紅細胞分化和凋亡異常加速所致，導(dǎo)致 了成熟紅細胞產(chǎn)生的總體降低。e地中海貧血的特征在于細胞過多的骨髓腔隙，在腔隙中 異常成紅細胞蓄積，并進行凋亡，導(dǎo)致了全身性貧血。
[0008] 轉(zhuǎn)化生長因子e (TGF-e)家族（該家族包括TGF-e、激活素、骨形態(tài)發(fā)生蛋白 (BMP)和生長分化因子（GDF))包括已知在發(fā)育和組織穩(wěn)態(tài)兩者中調(diào)節(jié)多個細胞過程的分 泌的蛋白質(zhì)。在各種模型系統(tǒng)中，TGF-M、激活素A、BMP-2和BMP-4全都與紅細胞發(fā)生的 調(diào)節(jié)有關(guān)。TGF-M既抑制又促進紅細胞分化，這取決于特定情況；激活素A顯示是促紅細 胞分化劑，而BMP-4在鼠模型中參與應(yīng)激紅細胞發(fā)生和從急性貧血中恢復(fù)。BMP-2作用于早 幼類紅細胞以增加獲自經(jīng)動員的外周血或骨髓CD34+細胞的樣品的集落形成。這些生長因 子中的一些的異常高的水平與各種血液病有關(guān)。例如，高水平的GDF-15通常不是正常紅細 胞發(fā)生的特征，但在無效紅細胞發(fā)生的情況下，⑶F-15表達升高。
[0009] TGF-0超家族包括30多種蛋白質(zhì)，并僅通過少數(shù)受體和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑發(fā)出信號， 表明了其作用的固有混雜性和豐余性。此外，在任何指定的組織中，可發(fā)現(xiàn)幾種不同的配 體，而且據(jù)推測，通過受體的重疊亞型發(fā)生信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，使將特定配體與其功能相關(guān)聯(lián)的能力 復(fù)雜化。⑶Fll是⑶F亞家族的成員，與⑶F8(亦稱為肌肉生長抑制素）有約90%氨基酸 同源性。兩者可結(jié)合激活素IIA型和B型受體，并激活Smad 2/3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。⑶Fll在 發(fā)育中起重大作用，參與肌肉、軟骨、骨、腎和神經(jīng)系統(tǒng)的形成，同時在成人組織中，在胰腺、 腸、腎、骨骼肌、腦和牙髓中檢出GDF11。還可在循環(huán)中發(fā)現(xiàn)少量的GDF-11。然而，迄今仍沒 有描述⑶F-Il在紅細胞發(fā)生中的作用的證據(jù)。
[0010] 激活素的II型受體還可結(jié)合⑶F11。已鑒定出兩種相關(guān)的II型受體ActRIIa和 ActRIIb (Mathews 和 Vale, 1991，Cell 65:973-982 ;Attisano 等，1992, Cell 68:97-108) 〇 除⑶Fll以外，ActRIIa和ActRIIb可與幾種其它的TGF-0家族蛋白質(zhì)在生物化學(xué)上相互 作用，包括 BMP7、Nodal、⑶F8 和激活素（Yamashita 等，1995, J. Cell Biol. 130:217-226 ; Lee 和 McPherron，2001，P;roc.Natl.Acad.Sci.98:9306-9311 ;Yeo 和 Whitman, 2001，Mol. Cell 7:949-957 ;0h 等，2002, Genes Dev. 16:2749-54)。ALK4 是激活素，特別是激活素 A 的 主要I型受體，而ALK-7也可用作激活素，特別是激活素B的受體。
[0011] 由激活素-受體IIA型（ActRIIA)的胞外域（E⑶）和人IgGlFc結(jié)構(gòu)域組成的人源 化融合蛋白以高親和力與激活素-A和其它TGF 0超家族配體結(jié)合，通過內(nèi)源ActRIIA-受 體阻斷信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。激活素-A亦稱為紅細胞分化因子（EDF)，其影響后期的RBC成熟 (Murata，1988)。描述了用于提高紅細胞水平的ActRII抑制劑（例如專利申請公布號 20110038831、20100204092、20100068215、20100028332、20100028331 和 20090163417)。
[0012] 3?發(fā)明概述
[0013] 在某些實施方案中，本文提供用于治療患者的貧血、無效紅細胞發(fā)生、0地中海貧 血或增加患者的正染性成紅細胞（Ery-C)的方法，其中所述方法包括給予GDFll拮抗劑。在 某些實施方案中，相對于健康個體和/或相對于貧血發(fā)病前患者的GDFll水平，在骨髓、脾、 肝、血清或血漿中患者的⑶Fll水平升高。
[0014] 在某些實施方案中，如果⑶Fll拮抗劑是ActRIIA多肽，則ActRIIA多肽優(yōu)先與 ⑶Fll結(jié)合。如果⑶Fll拮抗劑是ActRIIB多肽，則ActRIIB多肽優(yōu)先與⑶Fll結(jié)合。
[0015] 在某些實施方案中，⑶Fll拮抗劑降低⑶Fll的表達、降低⑶Fll活性或降低 ⑶Fll蛋白水平。在某些實施方案中，⑶Fll拮抗劑是抗⑶Fll抗體。在某些實施方案中， ⑶Fll拮抗劑是結(jié)合⑶Fll的截短受體。在某些實施方案中，⑶Fll拮抗劑包含ActRIIA 的突變胞外域，其中與野生型的ActRIIA相比，ActRIIA的突變胞外域相對于激活素A對 ⑶Fll的親和力提高。
[0016] 在某些實施方案中，本文提供的方法還包括監(jiān)測⑶Fll水平。在某些實施方案中， 所述方法還包括
[0017] a.測定⑶Fll水平；和
[0018] 調(diào)節(jié)⑶Fll拮抗劑的劑量，其中，如果⑶Fll增加超過正常，則增加⑶Fll拮抗劑 的劑量，且其中，如果GDFll降低低于正常，則減少GDFll拮抗劑的劑量。在某些實施方案 中，以⑶FllmRNA水平、⑶Fll蛋白水平或⑶Fll蛋白活性水平測定⑶Fll水平。
[0019] 在某些實施方案中，給予GDFll拮抗劑導(dǎo)致患者中晚嗜堿性和多染性成紅細胞的 細胞計數(shù)減少。在某些實施方案中，⑶Fl 1拮抗劑降低⑶Fl 1表達、⑶Fl 1活性和/或⑶Fl 1 蛋白水平。
[0020] 4?附圖簡述
[0021] 圖1說明SEQ ID NO 7的鼠對應(yīng)物（mActRIIA-Fc)改進0地中海貧血小鼠的血液 學(xué)參數(shù)。Hbb thl/tM小鼠（Skow LC等，Cell 34:1043-52, 1983)用PBS或mActRIIA-Fc(10mg/ Kg體重一周兩次）治療60天。在第5、10、30和60天評價血液學(xué)參數(shù)。（A)紅細胞計數(shù)、 (B)血細胞比容和（C)血紅蛋白的評價與（D)網(wǎng)狀細胞增多減少有關(guān)。循環(huán)紅細胞（RBC) 參數(shù)的分析還顯示在用mActRIIA-Fc治療的小鼠中，（E)平均紅細胞容積（MCV)、（F)平均 紅細胞血紅蛋白（MCH)和（G) MCH濃度（MCHC)增加。（H)總抗氧化狀態(tài)。（I)形態(tài)學(xué)分析 顯示紅細胞大小不均、異形紅細胞和靶細胞減少。還對地中海貧血小鼠的（J)全身鐵水平、 (K)運鐵蛋白合成、（L)運鐵蛋白和（M)鐵蛋白水平飽和度進行了評價。（N)還評價了炎性 細胞計數(shù)。通過（O)脾重和總細胞數(shù)評價的地中海貧血小鼠中mActRIIA-Fc對脾大的作用。 (P)在用mActRIIA-Fc治療的小鼠中，骨髓成紅細胞數(shù)和增殖（伊紅/蘇木精染色）也減 少。（Q)經(jīng)TER119染色，通過流式細胞術(shù)定量測定了骨髓和脾成紅細胞。*p〈0. 05,對于各 獨立實驗N = 3-5。
[0022] 圖2說明mActRIIA-Fc降低地中海貧血小鼠的無效紅細胞發(fā)生。（A-C)收獲骨髓 和脾，經(jīng)⑶71/TER119染色和FSC/SSC分配，通過流式細胞術(shù)評價了成紅細胞分化。（D)總 膽紅素水平和直接膽紅素水平的分析。（E)使用二氯二氫熒光素，通過流式細胞術(shù)評價了主 要原成紅細胞分化中的活性氧類別（ROS)產(chǎn)生。（F)用mActRIIA-Fc或PBS處理48小時的 主要地中海貧血原成紅細胞中血紅蛋白溶解度的分析。*P〈〇.05，#p〈0. 01，*#p〈0. 005,對 于各獨立實驗N = 3-5。
[0023] 圖3說明mActRIIA-Fc對來自地中海貧血小鼠的成紅細胞的凋亡的作用。來自 用mActRIIA-Fc或PBS治療的小鼠的骨髓（A)和脾⑶成紅細胞中Fas-L的表達。（C)在 mActRIIA-Fc治療的小鼠中成紅細胞的Tunel染色增強。
[0024] 圖4表明地中海貧血小鼠脾中ActRIIA配體的表達。（A)在mActRIIA-Fc治療的 動物中，ActRII、激活素A、激活素B和⑶Fll的mRNA表達水平提高。（B)⑶Fll蛋白水平的 蛋白質(zhì)印跡分析，在mActRIIA-Fc治療的動物該水平降低。（C)針對⑶Fll的骨髓免疫組織 化學(xué)染色顯示野生型和用mActRIIA-Fc治療的小鼠之間無變化。
[0025] 圖5說明主要地中海貧血原成紅細胞中mActRIIA-Fc對⑶Fll表達的作用。（A) 對用PBS或mActRIIA-Fc治療30天的地中海貧血小鼠的激活素/⑶F信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的免 疫組織化學(xué)分析，顯示地中海貧血小鼠中高水平的⑶Fll、ActRII和p-Smad2。（B)與其 它貧血模型相比，對地中海貧血小鼠的激活素A、激活素B和⑶Fll的免疫組織化學(xué)分析。 (C)使用針對激活素A、激活素B、⑶Fll前肽和⑶F8/⑶Fll切割肽的特異性抗體對用PBS 或mActRIIA-Fc處理48小時的主要地中海貧血原成紅細胞的FACS分析。柱狀圖中表示 ⑶Fll染色的定量測定。（D)用PBS或mActRIIA-Fc治療的地中海貧血小鼠脾中⑶Fll前 體（proform)表達的免疫組織化學(xué)分析。*p〈0. 05, N = 4。
[0026] 圖6說明抑制⑶Fll降低地中海貧血小鼠中的無效紅細胞發(fā)生。（A)收獲骨髓和 脾，經(jīng)⑶71/TER119染色和FSC/SSC分配，通過流式細胞術(shù)評價主要原成紅細胞分化。（B) 使用二氯二氫熒光素，通過流式細胞術(shù)評價主要原成紅細胞分化中的ROS產(chǎn)生。*p〈0. 05， N = 4〇
[0027] 圖7說明檢測血清中的⑶Fll的夾心ELISA測定法。（A)測定示意圖。⑶將板用 5 y g/mL mActRIIA-Fc 和遞增劑量的重組⑶Fll (Ong/ y 1、0. lng/ y 1、0. 5ng/ y 1、2. 5ng/ U 1)包被或?qū)φ昭澹?/4-1/500稀釋度）加入用mActRIIA-Fc包被的板中，板經(jīng)洗 滌，用抗GDF8/11抗體檢測結(jié)合的蛋白質(zhì)，接著使用辣根過氧化物酶偶聯(lián)的抗兔IgG檢測。 GDFll蛋白以劑量依賴性方式結(jié)合板。
[0028] 圖8說明在0地中海貧血患者的血清中檢出遞增水平的⑶F11。血清獲自出現(xiàn)地 中海貧血的患者和健康對照。
[0029] 圖9說明檢測血清中的激活素A的夾心ELISA測定法。（A)測定示意圖。（B)將 板用 5 y g/mL ActRIIA-Fc (SEQ ID NO. 7)和遞增劑量的重組激活素A(0ng/ y 1、0. lng/ y 1、 0? 5ng/ y 1、2. 5ng/ y 1)包被或?qū)φ昭澹?/4-1/500稀釋度）加入ActRIIA-Fc板中，板 經(jīng)洗滌，并用抗激活素A抗體檢測結(jié)合的蛋白質(zhì)，接著使用辣根過氧化物酶偶聯(lián)的抗兔IgG 檢測。激活素A蛋白以劑量依賴性方式結(jié)合板。（C)0地中海貧血患者血清中激活素A水 平的檢測。血清獲自出現(xiàn)地中海貧血的患者和健康對照。地中海貧血患者中激活素A的血 清水平?jīng)]有變化。
[0030] 圖10說明檢測血清中的激活素B的夾心ELISA測定法。（A)測定示意圖。（B) 將板用 5 y g/mL ActRIIA-Fc 和遞增劑量的重組激活素 B(0ng/ y 1、0. lng/ y 1、0. 5ng/ y 1、 2. 5ng/ y 1)包被或?qū)φ昭澹?/4-1/500稀釋度）加入ActRIIA-Fc板中，板經(jīng)洗滌，并 用抗激活素B抗體檢測結(jié)合的蛋白質(zhì)，接著使用辣根過氧化物酶偶聯(lián)的抗兔IgG檢測。激 活素B蛋白質(zhì)以劑量依賴性方式結(jié)合板。（C) 0地中海貧血患者血清中激活素B水平的檢 測。血清獲自出現(xiàn)地中海貧血的患者和健康對照。地中海貧血患者中激活素B的血清水平 沒有變化。
[0031] 圖11說明將mActRIIA-Fc給予C57BL/6野生型小鼠不改變其血液學(xué)參數(shù)。（A)紅 細胞計數(shù)，（B)血細胞比容，（C)血紅蛋白的評價顯示與mActRIIA-Fc無關(guān)。（D)網(wǎng)狀細胞增 多略有減少。mActRIIA-Fc不改變紅細胞（RBC)參數(shù)，例如（E)平均紅細胞容積（MCV)，（F) 平均紅細胞血紅蛋白（MCH)或（G)MCH濃度（MCHC)。*p〈0. 05,對于各獨立實驗N = 3-5。
[0032] 圖12說明將mActRIIA-Fc給予C57BL/6野生型小鼠對小鼠的脾和骨髓細胞數(shù)無 作用。
[0033] 圖13說明mActRIIA-Fc通過抑制⑶Fll刺激紅細胞分化。（A-C)通過在含有EP0、 +/-50 y g/mL mActRIIA-Fc的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，來進行⑶34+/⑶36+細胞的紅細胞分化；對 (A)祖紅細胞，（B)細胞增殖和（C)紅細胞前體進行了分析。（D-F)當(dāng)在含有EP0、+/-50yg/ mL mActRIIA-Fc的培養(yǎng)基中與骨髓（BM)細胞共培養(yǎng)時⑶34+/⑶36+細胞的紅細胞分化； 對（D)祖紅細胞，（E)細胞增殖和（F)紅細胞前體進行了分析。（G-H)通過在含有EP0、 +/-200ng/mL⑶Fll、+/-100ug/mL mActRIIA-Fc的培養(yǎng)基中培養(yǎng)來進行CD36+細胞的紅細 胞分化；對（G)細胞增殖和⑶紅細胞前體GPA+的百分比進行了分析。
[0034] 5?發(fā)明詳述
[0035] 5. 1 概述
[0036] -方面，本文提供用于治療貧血的方法，其中所述方法包括將生長分化因子 11 (⑶Fll ;亦稱為骨形態(tài)生成蛋白Il(BMP-Il))的拮抗劑給予需要治療的患者。在某些實 施方案中，所述方法包括給予有需要的個體（例如患有貧血的個體）治療有效量的GDFll 拮抗劑。在某些具體的實施方案中，⑶Fll拮抗劑不是ActRII受體或ActRII受體的衍生 物，例如不是ActRIIA-Fc融合蛋白或ActRIIB-Fc融合蛋白。GDFl 1拮抗劑可在任何水平上 對⑶Fl 1起作用，即可降低或消除⑶Fl 1表達、降低⑶Fl 1穩(wěn)定性（例如通過增加⑶Fl 1降 解）或拮抗⑶Fll活性（例如通過防止⑶Fll與其受體結(jié)合）。⑶Fll拮抗劑更詳細的描 述可見下面的第 Error ! Reference source not found?節(jié)。
[0037] 在某些實施方案中，本文提供用于提高貧血患者的紅細胞水平的方法（對于待用 本文所述方法治療的貧血類型參見例如第5. 2節(jié)）。可如下描述本文提供的方法的生理結(jié) 果。具體地說，以下參數(shù)的提高表明患者貧血的治療。在某些實施方案中，紅細胞水平提 高至少 1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、 17 %,18%,19%,20 %,25 %,30 %,35 %,40 %,45 %,50 %,55 %,60 %,65 %,70 %,75 %, 80%、85%、90%、95%或至少100%。在某些實施方案中，血紅蛋白水平提高至少1%、 2%,3 %,4%,5 %,6%,7 %,8 %,9 % ,10% > 11 % > 12 % ,13% ,14% ,15% ,16% ,17% ,18%, 19 %,20 %,25 %,30 %,35 %,40 %,45 %,50 %,55 %,60 %,65 %,70 %,75 %,80 %,85 %, 90%、95%或至少100%。在某些實施方案中，血細胞比容水平提高至少1%、2%、3%、4%、 5 %,6 %,7 %,8 %,9 %UO %> 11 %> 12 %,13%,14%,15%,16%,17%,18%,19%,20 %, 25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 或 至少100%。在某些實施方案中，集落形成單位水平提高至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、 7%,8%,9 % UO % > 11 % > 12% ,13% ,14% ,15% ,16% ,17% ,18% ,19%,20 %,25%,30 %, 35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 或至少 100%。 在某些實施方案中，平均細胞容積提高至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、 10%>11 %> 12 %,13%,14%,15%,16%,17%,18%,19%,20 %,25 %,30 %,35 %,40 %, 45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或至少100%。在某些實施 方案中，平均細胞血紅蛋白提高至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、 12 %,13%,14%,15%,16%,17%,18%,19%,20 %,25 %,30 %,35 %,40 %,45 %,50 %, 55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 或至少 100%。在某些實施方案中，平均 紅細胞血紅蛋白濃度提高至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、 13 %,14%,15%,16%,17%,18%,19%,20 %,25 %,30 %,35 %,40 %,45 %,50 %,55 %, 60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 或至少 100%。
[0038] 還可如下描述本文提供的方法的生理結(jié)果。具體地說，下列參數(shù)的降低表明患者 的無效紅細胞發(fā)生的治療。在某些實施方案中，血液中網(wǎng)織紅細胞的比例降低至少1%、 2%,3 %,4%,5 %,6%,7 %,8 %,9 % ,10% > 11 % > 12 % ,13% ,14% ,15% ,16% ,17% ,18%, 19 %,20 %,25 %,30 %,35 %,40 %,45 %,50 %,55 %,60 %,65 %,70 %,75 %,80 %,85 %, 90%、95%或至少100%。在某些實施方案中，血液中網(wǎng)織紅細胞的比例降低至少1%、 2%,3 %,4%,5 %,6%,7 %,8 %,9 % ,10% > 11 % > 12 % ,13% ,14% ,15% ,16% ,17% ,18%, 19 %,20 %,25 %,30 %,35 %,40 %,45 %,50 %,55 %,60 %,65 %,70 %,75 %,80 %,85 %, 90%、95%或至少100%。在某些實施方案中，脾重或脾細胞總數(shù)降低至少1%、2%、3%、 4 %,5 %,6 %,7 %,8 %,9%UO%> 11 %> 12 %,13%,14%,15%,16%,17%,18%,19%, 20 %,25 %,30 %,35 %,40 %,45 %,50 %,55 %,60 %,65 %,70 %,75 %,80 %,85 %,90 %, 95%或至少100%。在某些實施方案中，每股骨的骨髓細胞數(shù)降低至少1%、2%、3%、4%、 5 %,6 %,7 %,8 %,9 %UO %> 11 %> 12 %,13%,14%,15%,16%,17%,18%,19%,20 %, 25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 或 至少100%。在某些實施方案中，骨髓成紅細胞數(shù)降低至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、 7%,8%,9 % UO % > 11 % > 12% ,13% ,14% ,15% ,16% ,17% ,18% ,19%,20 %,25%,30 %, 35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 或至少 100%。
[0039] 5. 2待治療的貧血
[0040] 在某些實施方案中，待用本文提供的方法治療的患者被診斷為貧血。在某些 更具體的實施方案中，貧血由無效紅細胞發(fā)生引起。在某些實施方案中，本文提供用 于治療遺傳性骨髓衰竭綜合征（例如但不限于無巨核細胞性血小板減少癥、戴-布貧 血（Diamond-Blackfan Anemia)、先天性角化不良、范科尼貧血、皮爾遜綜合征（Pearson Syndrome)、重度先天性中性白細胞減少癥、重度先天性中性白細胞減少癥、血小板減少伴 燒骨缺失（Thrombocytopenia Absent Radii))的方法，特別是影響紅細胞的遺傳性骨髓衰 竭綜合征。更具體地講，本文提供方法用于治療特異性影響紅細胞的遺傳性骨髓衰竭綜合 征。在某些實施方案中，本文提供用于治療貧血的方法，其中對象對給予紅細胞生成素?zé)o反 應(yīng)。在某些實施方案中，本文提供用于治療貧血的方法，其中對象對給予鐵、維生素B-12和 /或葉酸無反應(yīng)。在某些實施方案中，本文提供用于治療貧血的方法，所述貧血由對通過細 胞凋亡的死亡十分敏感的祖紅細胞和紅細胞前體引起。
[0041] 在某些甚至更具體的實施方案中，待用本文提供的方法治療的患者被診斷為0 地中海貧血。e地中海貧血是特征在于血紅蛋白合成缺陷的疾病，所述血紅蛋白合成缺陷 導(dǎo)致紅細胞成熟和產(chǎn)生受損。該疾病主要被認為是在紅細胞分化的晚嗜堿性/多染性成紅 細胞期由于紅細胞分化和凋亡異常加速，導(dǎo)致了成熟紅細胞產(chǎn)生的總體降低所致。該疾病 的特征在于細胞過多的骨髓腔隙，在所述骨髓腔隙中成紅細胞蓄積并進行細胞凋亡，導(dǎo)致 全身性貧血。
[0042] 在某些實施方案中，待用本文提供的方法治療的患者的脾和/或骨髓和/或血清 和/或血漿和/或肝中的GDFll表達和/或活性的水平提高。在某些實施方案中，對患者 的GDFll水平相對于貧血之前同一人中的GDFll表達和/或活性的水平（如果可獲得樣品 或數(shù)據(jù)）或相對于沒有貧血的人的GDFll表達和/或活性的水平進行比較。在某些實施方 案中，測量并比較脾、骨髓、血清、血漿和/或肝中的GDFll表達和/或活性水平。在某些實 施方案中，待用本文提供的方法治療的患者的⑶FllmRNA水平升高至少1 %、2%、3%、4%、 5 %,6 %,7 %,8 %,9 %UO %> 11 %&g