與igf1r結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本公開提供了涉及或源自抗IGFlR抗體的組合物及方法。更具體地來說，本公開 提供了與IGFlR結(jié)合的人抗體、能夠結(jié)合IGFlR的所述抗體片段及衍生物、包含所述片段的 IGFlR結(jié)合性多肽。進(jìn)一步而言，本公開提供了編碼所述抗體、抗體片段和衍生物及多肽的 核酸，包含所述多肽的細(xì)胞，用于制備所述抗體、抗體的片段和衍生物及多肽的方法，以及 使用所述抗體、所述抗體片段及其衍生物和多肽的方法，包括治療或診斷患有IGFlR相關(guān) 疾病或癥狀的對象，包括各種炎性疾病和各種癌癥。
【背景技術(shù)】
[0002] 類胰島素生長因子，亦稱為生長調(diào)節(jié)素，包括類胰島素生長因子I (IGF-I)和 類胰島素生長因子 II(IGF-II)(Klapper，et al·，（1983)Endocrinol. 112:2215and Rinderknecht，et al. ,(1978)Febs. Lett. 89:283)。所述生長因子通過與稱為類膜島 素生長因子受體I(IGFlR)的共同受體相結(jié)合（Sepp-Lorenzino, (1998)Breast Cancer Research and Treatment 47:235)，對各種類型細(xì)胞具有促有絲分裂活性，包括腫瘤細(xì)胞 (Macaulay, (1992)fc.J. Cancer 65:311)。IGFs與IGFlR的相互作用，通過觸發(fā)受體酪氨酸 殘基的自磷酸化，激活受體 residues (Butler, et al·，（1998) Comparative Biochemistry and Physiology 121:19)。IGFlR-旦被激活，便磷酸化胞內(nèi)目標(biāo)，以激活細(xì)胞信號通路。 該受體激活是刺激腫瘤細(xì)胞生長和生存的關(guān)鍵。因此，抑制IGFlR活性是一種治療或預(yù)防 人癌癥和其他增值性疾病的寶貴潛在方法。
[0003] 數(shù)種證據(jù)表明，IGF-I、IGF-II及其受體IGFlR是惡性表型的重要介導(dǎo)。IGF-I血 衆(zhòng)水平據(jù)發(fā)現(xiàn)是前列腺癌風(fēng)險(xiǎn)的最佳指標(biāo)（Chan, et al.，（1998)Science 279:563)，還有 類似的流行病學(xué)研宄有力地將血漿IGF-I水平與乳腺癌、結(jié)腸癌和肺癌風(fēng)險(xiǎn)聯(lián)系在一起。
[0004] 類胰島素生長因子受體1的過度表達(dá)也被發(fā)現(xiàn)存在于數(shù)種癌細(xì)胞系和腫瘤組 織中。IGFlR在40%所有乳腺癌細(xì)胞系中過度表達(dá)（Pandini，etal.，（1999)Cancer Res.5:1935)，且在15%肺癌細(xì)胞系中過度表達(dá)。與正常組織相比，乳腺癌腫瘤組織中， IGFlR過度表達(dá)6-14倍，且IGFlR表現(xiàn)出高2-4倍的激酶活性（Webster, et al.，（1996) Cancer Res. 56:2781and Pekonen, et al. , (1998)Cancer Res. 48:1343) 〇 90%的結(jié)腸直 腸癌組織切片表現(xiàn)出IGFlR水平的提高，其中IGFlR表達(dá)程度與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)。與正 常的子宮頸陰道部細(xì)胞相比，原代宮頸癌細(xì)胞培養(yǎng)物和宮頸癌細(xì)胞系的分析，分別顯示出3 倍和 5倍過度表達(dá)（Steller, et al.，（1996) Cancer Res. 56:1762)。IGFlR在滑膜肉瘤細(xì)胞 中的表達(dá)也與侵襲性表型（即迀移和高增殖率，Xie，et al.，（1999) Cancer Res. 59:3588) 相關(guān)。此外，肢端肥大癥，一種慢性發(fā)展疾病，是生長荷爾蒙和IGF-I過度分泌造成的 (Ben_Schlomo，et al·，（2001)Endocrin. Metab. Clin. North. Am. 30:565-583)。對 IGFlR功 能的拮抗可能有助于治療該疾病。本領(lǐng)域中仍存在對IGFlR拮抗劑療法的需要，用于治療 或預(yù)防所述疾病和紊亂，尤其有用的是基于抗IGFlR抗體的療法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本公開提供一種與IGFlR表位結(jié)合且結(jié)合親和性至少為KT6M的IgG類全人抗體， 其重鏈可變域序列與選自下列的氨基酸序列至少95%相同：SEQ ID NO. 1、SEQ ID NO. 3、 SEQ ID NO. 5、SEQ ID NO. 7、SEQ ID NO. 9、SEQ ID NO. 11、SEQ ID NO. 13、SEQ ID NO. 15、 SEQ ID NO. 17,SEQ ID NO. 19,SEQ ID NO. 2USEQ ID NO. 23,SEQ ID NO. 25,SEQ ID NO. 27, SEQ ID NO. 29、SEQ ID NO. 31，及其組合；其輕鏈可變域序列與選自下列的氨基酸序列至少 95%相同：SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 4、SEQ ID NO. 6、SEQ ID NO. 8、SEQ ID NO. 10、SEQ ID NO. 12、SEQ ID NO. 14、SEQ ID NO. 16、SEQ ID NO. 18、SEQ ID NO. 20、SEQ ID NO. 22、SEQ ID NO. 24、SEQ ID NO. 26、SEQ ID NO. 28、SEQ ID NO. 30、SEQ ID NO. 32,及其組合。優(yōu)選地， 該全人抗體具有重鏈和輕鏈，其中該抗體的重鏈/輕鏈可變域序列選自下列序列：SEQ ID NO. 1/SEQ ID NO. 2 (本文稱為 GFAl)、SEQ ID NO. 3/SEQ ID NO. 4 (本文稱為 GFA3)、SEQ ID NO. 5/SEQ ID NO. 6 (本文稱為 GFA5)、SEQ ID NO. 7/SEQ ID NO. 8 (本文稱為 GFA6)、SEQ ID N0.9/SEQ ID Ν0·10(本文稱為GFA12)、SEQ ID NO.ll/SEQ ID Ν0·12(本文稱為GFC2)、SEQ IDN0·13/SEQIDN0·14(本文稱為A2)、SEQIDN0·15/SEQIDN0·16(本文稱為A11)、SEQ ID NO. 17/SEQ ID NO. 18(本文稱為 B9)、SEQ ID NO. 19/SEQ ID Ν0·20(本文稱為 B10)、SEQ ID NO. 21/SEQ ID NO. 22 (本文稱為 A6)、SEQ ID NO. 23/SEQ ID NO. 24 (本文稱為 C8)、SEQ ID NO. 25/SEQ ID NO. 26 (本文稱為 C4)、SEQ ID NO. 27/SEQ ID NO. 28 (本文稱為 E2)、SEQ ID NO. 29/SEQ ID NO. 30 (本文稱為 B3)、SEQ ID NO. 31/SEQ ID NO. 32 (本文稱為 D12)，及 其組合。
[0006] 本公開提供一個全人Fab抗體片段，其具有來自重鏈的可變域和來自輕鏈的可變 域，其中，重鏈可變域序列與選自下列的氨基酸序列及至少95%相同：SEQ ID NO. USEQ ID NO. 3、SEQ ID NO. 5、SEQ ID NO. 7、SEQ ID NO. 9、SEQ ID NO. 11、SEQ ID NO. 13、SEQ ID NO. 15,SEQ ID NO. 17,SEQ ID NO. 19,SEQ ID NO. 2USEQ ID NO. 23,SEQ ID NO. 25,SEQ ID NO. 27、SEQ ID NO. 29、SEQ ID NO. 31，及其組合；且其輕鏈可變域序列與選自下列的氨基酸 序列至少95%相同：SEQ ID N0.2、SEQ ID N0.4、SEQ ID N0.6、SEQ ID N0.8、SEQ ID NO. 10、 SEQ ID NO. 12,SEQ ID NO. 14,SEQ ID NO. 16,SEQ ID NO. 18,SEQ ID NO. 20,SEQ ID NO. 22, SEQ ID NO. 24、SEQ ID NO. 26、SEQ ID NO. 28、SEQ ID NO. 30、SEQ ID NO. 32,及其組合；優(yōu) 選地，該全人抗體Fab片段具有重鏈可變域和輕鏈可變域，其中該抗體的重鏈/輕鏈可變域 序列選自下列序列：SEQ ID NO. 1/SEQ ID N0.2、SEQ ID N0.3/SEQ ID N0.4、SEQ ID N0.5/ SEQ ID NO. 6、SEQ ID NO. 7/SEQ ID NO. 8、SEQ ID NO. 9/SEQ ID NO. 10、SEQ ID NO. 11/SEQ ID NO. 12,SEQ ID NO. 13/SEQ ID NO. 14,SEQ ID NO. 15/SEQ ID NO. 16,SEQ ID NO. 17/SEQ ID NO. 18,SEQ ID NO. 19/SEQ ID NO. 20,SEQ ID NO. 21/SEQ ID NO. 22,SEQ ID NO. 23/SEQ ID NO. 24,SEQ ID NO. 25/SEQ ID NO. 26,SEQ ID NO. 27/SEQ ID NO. 28,SEQ ID NO. 29/SEQ ID NO. 30、SEQ ID NO. 31/SEQ ID NO. 32,及其組合。
[0007] 本公開提供一個單鏈人抗體，其具有來自重鏈的可變域、來自輕鏈的可變域、連接 重鏈和輕鏈可變域的連接肽，其中，重鏈可變域序列與選自下列的氨基酸序列至少95%相 同：SEQ ID NO. 1、SEQ ID NO. 3、SEQ ID NO. 5、SEQ ID NO. 7、SEQ ID NO. 9、SEQ ID NO. 11、 SEQ ID NO. 13,SEQ ID NO. 15,SEQ ID NO. 17,SEQ ID NO. 19,SEQ ID NO. 2USEQ ID NO. 23, SEQIDN0·25、SEQIDN0·27、SEQIDN0·29、SEQIDN0·31，及其組合；其輕鏈可變域序列 與選自下列的氨基酸序列至少95%相同：SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 4、SEQ ID NO. 6、SEQ ID NO. 8、SEQ ID NO. 10、SEQ ID NO. 12、SEQ ID NO. 14、SEQ ID NO. 16、SEQ ID NO. 18、SEQ ID NO. 20,SEQ ID NO. 22,SEQ ID NO. 24,SEQ ID NO. 26,SEQ ID NO. 28,SEQ ID NO. 30,SEQ ID NO. 32,及其組合。優(yōu)選地，該全人單鏈抗體具有重鏈可變域和輕鏈可變域，其中該抗單鏈全 人抗體的重鏈/輕鏈可變域序列選自下列序列：SEQ ID NO. 1/SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3/ SEQ ID NO. 4,SEQ ID NO. 5/SEQ ID NO. 6,SEQ ID NO. 7/SEQ ID NO. 8,SEQ ID NO. 9/SEQ ID NO. 10,SEQ ID NO. 11/SEQ ID NO. 12,SEQ ID NO. 13/SEQ ID NO. 14,SEQ ID NO. 15/SEQ ID NO. 16,SEQ ID NO. 17/SEQ ID NO. 18,SEQ ID NO. 19/SEQ ID NO. 20,SEQ ID NO. 21/SEQ ID NO. 22,SEQ ID NO. 23/SEQ ID NO. 24,SEQ ID NO. 25/SEQ ID NO. 26,SEQ ID NO. 27/SEQ ID N0·28、SEQIDN0·29/SEQIDN0·30、SEQIDN0·31/SEQIDN0·32，及其組合。
[0008] 本公開進(jìn)一步提供一種治療廣譜哺乳動物癌癥或廣譜炎性疾病和自體免疫疾病 的方法，包括以抗IGFlR多肽的有效劑量給藥，其中所述抗IGFlR多肽選自：一種與IGFlR 表位結(jié)合且結(jié)合親和度為至少KT6M的IgG類全人抗體、具有重鏈可變域和輕鏈可變域的全 人Fab抗體片段、具有來自重鏈的可變域和來自輕鏈的可變域以及連接所述輕鏈和重鏈可 變域的連接肽的單鏈人抗體，及其組合；
[0009] 其中，所述全人抗體的重鏈可變域序列與選自下列的氨基酸序列至少95%相同： SEQ ID NO. 1、SEQ ID NO. 3、SEQ ID NO. 5、SEQ ID NO. 7、SEQ ID NO. 9、SEQ ID NO. 11、SEQ ID NO. 13、SEQ ID NO. 15、SEQ ID NO. 17、SEQ ID NO. 19、SEQ ID NO. 21、SEQ ID NO. 23、SEQ ID NO. 25、SEQ ID NO. 27、SEQ ID NO. 29、SEQ ID NO. 31及其組合；且其輕鏈可變域序列與 選自下列的氨基酸序列至少95%相同：SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 4、SEQ ID NO. 6、SEQ ID NO. 8、SEQ ID NO. 10、SEQ ID NO. 12、SEQ ID NO. 14、SEQ ID NO. 16、SEQ ID NO. 18、SEQ ID NO. 20,SEQ ID NO. 22,SEQ ID NO. 24,SEQ ID NO. 26,SEQ ID NO. 28,SEQ ID NO. 30,SEQ ID NO. 32,及其組合；
[0010] 其中，所述全人抗體Fab片段的重鏈可變域序列與選自下列的氨基酸序列至少 95%相同：SEQ ID NO. 1、SEQ ID NO. 3、SEQ ID NO. 5、SEQ ID NO. 7、SEQ ID NO. 9、SEQ ID NO. IUSEQ ID NO. 13,SEQ ID NO. 15,SEQ ID NO. 17,SEQ ID NO. 19,SEQ ID NO. 2USEQ ID NO. 23、SEQ ID NO. 25、SEQ ID NO. 27、SEQ ID NO. 29、SEQ ID NO. 31，及其組合；且其輕鏈 可變域序列與選自下列的氨基酸序列至少95%相同：SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 4、SEQ ID NO. 6、SEQ ID NO. 8、SEQ ID NO. 10、SEQ ID NO. 12、SEQ ID NO. 14、SEQ ID NO. 16、SEQ ID NO. 18,SEQ ID NO. 20,SEQ ID NO. 22,SEQ ID NO. 24,SEQ ID NO. 26,SEQ ID NO. 28,SEQ ID NO. 30,及其組合；以及
[0011] 其中，所述單鏈人抗體的重鏈可變域序列與選自下列的氨基酸序列至少95%相 同：SEQ ID NO. 1、SEQ ID NO. 3、SEQ ID NO. 5、SEQ ID NO. 7、SEQ ID NO. 9、SEQ ID NO. 11、 SEQ ID NO. 13,SEQ ID NO. 15,SEQ ID NO. 17,SEQ ID NO. 19,SEQ ID NO. 2USEQ ID NO. 23, SEQ ID NO. 25、SEQ ID NO. 27、SEQ ID NO. 29、SEQ ID NO. 31，及其組合；且其輕鏈可變域序 列與選自下列的氨基酸序列至少95%相同：SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 4、SEQ ID NO. 6、SEQ ID NO. 8、SEQ ID NO. KKSEQ ID NO. 12、SEQ ID NO. 14、SEQ ID NO. 16、SEQ ID NO. 18、SEQ ID NO. 20,SEQ ID NO. 22,SEQ ID NO. 24,SEQ ID NO. 26,SEQ ID NO. 28,SEQ ID NO. 30,SEQ ID NO. 32,及其組合。
[0012] 優(yōu)選地，所述全人抗體具有重鏈和輕鏈，其中所述抗體的重鏈/輕鏈可變域序列 選自以下序列：SEQ ID NO. 1/SEQ ID NO. 2(本文稱為GFA1)、SEQ ID NO. 3/SEQ ID NO. 4(本 文稱為 GFA3)、SEQ ID NO. 5/SEQ ID NO. 6(本文稱為 GFA5)、SEQ ID NO. 7/SEQ ID NO. 8(本文 稱為GFA6)、SEQ ID N0.9/SEQ ID NCX 10(本文稱為GFA12)、SEQ ID NO. 11/SEQ ID NO. 12(本 文稱為 GFC2)、SEQ ID NO. 13/SEQ ID NO. 14(本文稱為A2)、SEQ ID NO. 15/SEQ ID NO. 16(本 文稱為A11)、SEQIDN0·17/SEQIDN0·18(本文稱為B9)、SEQIDN0·19/SEQIDN0·20(本 文稱為B10)、SEQ ID N0.21/SEQ ID Ν0·22(本文稱為A6)、SEQ ID N0.23/SEQ ID Ν0·24(本 文稱為 C8)、SEQ ID N0.25/SEQ ID Ν0·26(本文稱為 C4)、SEQ ID N0.27/SEQ ID Ν0·28(本 文稱為 E2)、SEQ ID N0.29/SEQ ID Ν0·30(本文稱為 B3)、SEQ ID N0.31/SEQ ID Ν0·32(本 文稱為D12)，及其組合；優(yōu)選地，所述全人抗體Fab片段具有重鏈可變域和輕鏈可變域，其 中所述抗體的重鏈/輕鏈可變域序列選自下列序列：SEQ ID NO. 1/SEQ ID NO. 2 (本文稱為 GFA1)、SEQ ID N0.3/SEQ ID Ν0·4(本文稱為 GFA3)、SEQ ID N0.5/SEQ ID Ν0·6(本文稱為 GFA5)、SEQ ID N0.7/SEQ ID Ν0·8(本文稱為 GFA6)、SEQ ID N0.9/SEQ ID Ν0·10(本文稱為 GFA12)、SEQ ID NO. 11/SEQ ID NO. 12(本文稱為GFC2)、SEQ ID NO. 13/SEQ ID NO. 14(本文 稱為A2)、SEQIDN0·15/SEQIDN0·16(本文稱為A11)、SEQIDN0·17/SEQIDN0·18(本文 稱為 B9)、SEQ ID NO. 19/SEQ ID NO. 20 (本文稱為 B10)、SEQ ID NO. 21/SEQ ID NO. 22 (本 文稱為 A6)、SEQ ID N0.23/SEQ ID Ν0·24(本文稱為 C8)、SEQ ID N0.25/SEQ ID Ν0·26(本 文稱為 C4)、SEQ ID N0.27/SEQ ID Ν0·28(本文稱為 E2)、SEQ ID N0.29/SEQ ID Ν0·30(本 文稱為Β3)、SEQ ID NO. 31/SEQ ID NO. 32(本文稱為D12)，及其組合；優(yōu)選地，所述全人單 鏈抗體具有重鏈可變域和輕鏈可變域，其中所述單鏈全人抗體的重鏈/輕鏈可變域序列 選自下列序列：SEQ ID NO. 1/SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3/SEQ ID NO. 4、SEQ ID NO. 5/SEQ ID NO. 6、SEQ ID NO. 7/SEQ ID NO. 8、SEQ ID NO. 9/SEQ ID NO. 10、SEQ ID NO. 11/SEQ ID NO. 12,SEQ ID NO. 13/SEQ ID NO. 14,SEQ ID NO. 15/SEQ ID NO. 16,SEQ ID NO. 17/SEQ ID NO. 18,SEQ ID NO. 19/SEQ ID NO. 20,SEQ ID NO. 21/SEQ ID NO. 22,SEQ ID NO. 23/SEQ ID NO. 24,SEQ ID NO. 25/SEQ ID NO. 26,SEQ ID NO. 27/SEQ ID NO. 28,SEQ ID NO. 29/SEQ ID NO. 30、SEQ ID NO. 31/SEQ ID NO. 32,及其組合。
[0013] 優(yōu)選地，待治療的廣譜哺乳動物癌癥選自骨肉瘤、橫紋肌肉瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、任 何兒科癌、腎癌、白血病、腎移行細(xì)胞癌、沃納-莫里森（Werner-Morrison)綜合征、膀胱癌、 腎母細(xì)胞癌、卵巢癌、胰腺癌、良性前列腺增生、乳腺癌、前列腺癌、骨癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸直 腸癌、子宮頸癌、滑膜肉瘤、轉(zhuǎn)移性類癌相關(guān)性腹瀉、血管活性腸肽分泌腫瘤、頭頸部癌、鱗 狀細(xì)胞癌、多發(fā)性骨髓瘤、孤立性漿細(xì)胞瘤、腎細(xì)胞癌、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、生殖細(xì)胞腫瘤、肝 母細(xì)胞瘤、肝細(xì)胞癌、黑素瘤、腎橫紋肌樣瘤、尤因肉瘤（Ewing Sarcoma)、軟骨肉瘤、血液惡 性腫瘤、慢性成淋巴細(xì)胞白血病、慢性骨髓單核細(xì)胞性白血病、急性成淋巴細(xì)胞性白血病、 急性淋巴細(xì)胞性白血病、急性骨髓性白血病、急性粒細(xì)胞白血病、慢性成髓細(xì)胞性白血病、 霍奇金（Hodgekin)氏病、非霍奇金（Hodgekin)氏淋巴瘤、慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性骨髓 性白血病、骨髓增生異常綜合征、毛細(xì)胞白血病、肥大細(xì)胞白血病、肥大細(xì)胞瘤、濾泡性淋巴 瘤、彌漫性大細(xì)胞淋巴瘤、套細(xì)胞淋巴瘤、伯基特（Burkitt)淋巴瘤、蕈樣真菌病、西扎里 (Seary)綜合征、皮膚T細(xì)胞淋巴瘤、慢性骨髓增殖性疾病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、腦癌、成膠 質(zhì)細(xì)胞瘤、非成膠質(zhì)細(xì)胞瘤腦癌、腦膜瘤、垂體腺瘤、前庭神經(jīng)鞘瘤、原始神經(jīng)外胚層瘤、髓 母細(xì)胞瘤、星形細(xì)胞瘤、間變性星形細(xì)胞瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、室管膜瘤和脈絡(luò)叢乳頭狀瘤、 骨髓增生性障礙、真性紅細(xì)胞增多癥、血小板增多癥、特發(fā)性骨髓纖維化、軟組織肉瘤、甲狀 腺癌、子宮內(nèi)膜癌、類癌腫瘤、生殖細(xì)胞腫瘤、肝癌，及其組合。
【附圖說明】
[0014] 圖1展示了以兩種方法測定的抗IGFlR抗體C2親和性。感應(yīng)器上涂覆了 rhIGFIR 或C2IgG之一，然后與其中另外一種共同培養(yǎng)，并以Forte Bio Octet Red裝置測定親和性。 兩種方法測出的C2親和性為5. 38nM或I. 45nM。
[0015] 圖2展示了以Forte Bio Octet Red裝置測定抗IGFlR抗體對抗hlgG Fe捕獲傳 感器的親和性。B9的親和性測定為I. 25nM。
[0016] 圖3展示了抗IGFlR抗體與MCF7細(xì)胞的細(xì)胞結(jié)合度和EC50值。
[0017] 圖4戰(zhàn)士了對比抗IGFlR抗體與IGFlR和與胰島素受體結(jié)合的ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 克隆B9、BlO和C8并不與胰島素受體交叉反應(yīng)。
[0018] 圖5展示了 MCF7乳腺癌細(xì)胞中IGFl刺激的IGFlR自磷酸化。比較濃度為10 μ g/ ml的各種抗IGFlR抗體，克隆A6、B9、B10、B10VAR、C2和C8展現(xiàn)出最大的拮抗作用。
[0019] 圖6展示了抗IGFlR抗體克隆A6、B9、B10VAR、C2和C8對MCF7乳腺癌細(xì)胞中的 IGFl刺激的IGFlR自磷酸化的抑制作用的IC5(I。B9展示了 IGFlR自磷酸化的出眾拮抗作 用，其 IC5tl為 94pM。
[0020] 圖7展示了抗IGFlR抗體對MCF7細(xì)胞中IGFl刺激的增殖的抑制作用。與未用抗 體處理的細(xì)胞相比，抗IGFlR抗體克隆C2、BlOVAR和C8展現(xiàn)出對IGFl刺激的增殖的強(qiáng)烈 劑量依賴性拮抗作用
[0021] 圖8顯示，以100ng/ml IGF2處理MCF7細(xì)胞，顯現(xiàn)出IGFlR的強(qiáng)力激活磷酸化（第 2欄"僅IGF2"與第1欄"未處理"相比較）。以抗IGFlR抗體抗體預(yù)處理細(xì)胞在不同程度 上阻斷了對IGFlR的此種激活?？寺lO展示出對IGFlR自磷酸化的最強(qiáng)力拮抗作用。數(shù) 據(jù)顯示為三聯(lián)樣本的540nm吸光度（ABS 450nm) 土標(biāo)準(zhǔn)誤差，且直接與IGFlR磷酸化/激 活成正比。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 本公開提供一個與IGFlR表位結(jié)合且結(jié)合親和性為KT6M或以下的IgG類全人抗 體，其重鏈可變域序列與選自下列的氨基酸序列至少95%相同：ID NO. 1、SEQ ID NO. 3、SEQ ID NO. 5,SEQ ID NO. 7,SEQ ID NO. 9,SEQ ID NO. IUSEQ ID NO. 13,SEQ ID NO. 15,SEQ ID NO. 17,SEQ ID NO. 19,SEQ ID NO. 2USEQ ID NO. 23,SEQ ID NO. 25,SEQ ID NO. 27,SEQ ID NO. 29、SEQ ID NO. 31，及其組合；其輕鏈可變域序列與選自下列的氨基酸序列及其組合至 少95%相同：SEQ ID N0.2、SEQ ID N0.4、SEQ ID N0.6、SEQ ID N0.8、SEQ ID NO. 10、SEQ ID NO. 12、SEQ ID NO. 14、SEQ ID NO. 16