一種雙功能抗雄激素藥物及其用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種抗雄激素藥物及其在治療前列腺性疾病中 的應(yīng)用，具體涉及一種雙功能抗雄激素藥物及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 癌癥是死亡率極高的人類健康第二號(hào)"殺手"，開(kāi)發(fā)和研制高效低毒的天然抗癌藥 物是目前乃至未來(lái)人類所需著重解決的重大科技任務(wù)之一。現(xiàn)在常用的化學(xué)抗腫瘤藥物存 在著毒副作用較大的缺點(diǎn)，限制了臨床應(yīng)用，因此開(kāi)發(fā)低毒的天然抗腫瘤藥物已顯現(xiàn)了巨 大的潛力，并已日益成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的焦點(diǎn)和熱點(diǎn)。
[0003] 前列腺癌（Prostate Cancer，PCa)是男性生殖系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤，尤其在老 年男性中發(fā)病率最高。在我國(guó)，雖然較歐美發(fā)達(dá)國(guó)家前列腺癌發(fā)病及死亡率低，近年來(lái)呈現(xiàn) 持續(xù)快速增長(zhǎng)趨勢(shì)，2012年已成為中國(guó)男性泌尿生殖系統(tǒng)發(fā)病率最高的腫瘤。
[0004] 隨著對(duì)PCa病程演進(jìn)過(guò)程中相關(guān)分子機(jī)制的深入研究，一系列調(diào)控PCa微環(huán)境、雄 激素受體及骨轉(zhuǎn)移等的信號(hào)通路及關(guān)鍵分子成為靶向治療干預(yù)的重要目標(biāo)。以AR為靶向 治療PCa是繼雄激素剝奪療法（ADT)后的研究熱點(diǎn)，一系列靶向調(diào)控AR的藥物也被證實(shí)具 有良好的抗PCa作用，目前臨床應(yīng)用的AR拮抗劑主要是氟他胺和比卡魯胺，屬于非甾類雄 激素拮抗劑，但這兩種藥物在治療早期前列腺癌起重要作用，晚期療效差，可能還會(huì)產(chǎn)生抗 雄激素戒斷綜合征。另外如2011年美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市的新藥醋酸阿比特龍（Abiraterone Acetate)通過(guò)抑制雄激素合成中的關(guān)鍵酶_CYP450cl7,降低雄激素水平。再有美國(guó) Medivation公司近期開(kāi)發(fā)的MDV-3100可阻斷AR的核轉(zhuǎn)位及其與DNA的結(jié)合，起到抗雄激 素治療作用，這兩種藥物均能使患者前列腺特異性抗原（PSA)水平降低，有效延長(zhǎng)患者生 存期。然而目前有研究指出雖然AR對(duì)大部分PCa細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用，但AR對(duì)PCa干細(xì) 胞（CSCs)和上皮基底細(xì)胞增殖有抑制作用；AR表達(dá)的缺失還會(huì)激活PCa細(xì)胞的Stat3信 號(hào)，促進(jìn)PCa細(xì)胞增殖。因此單一靶向AR的藥物還存在促使PCa病程發(fā)展的可能性，相對(duì) 于單一靶向治療，多靶點(diǎn)治療藥物更具有優(yōu)勢(shì)，2012年Nature發(fā)表的文章采用多聚藥理學(xué) 多靶點(diǎn)策略抗擊癌癥，多靶點(diǎn)藥物較單一靶點(diǎn)藥物能更有效地影響細(xì)胞的復(fù)雜系統(tǒng)，提高 治療效果。迄今為止，尚無(wú)有關(guān)同時(shí)具有AR拮抗和Stat3抑制雙重功能的藥物報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種雙功能抗雄激素藥物及其用途，該抗雄 激素藥物同時(shí)具有AR拮抗和抑制Stat3信號(hào)傳導(dǎo)雙重活性。
[0006] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
[0007] -種雙功能抗雄激素藥物，所述抗雄激素藥物的化學(xué)式為C15H12O 4，分子量為 256. 25,結(jié)構(gòu)式如式（1)所示：
[0008]
[0009] 式（1)化合物同時(shí)具有AR拮抗和抑制Stat3信號(hào)傳導(dǎo)的雙重活性。在本發(fā)明中， 將式（1)化合物簡(jiǎn)稱為HYLY008。
[0010] 在本發(fā)明的一個(gè)較佳實(shí)施例中，進(jìn)一步包括，式（1)化合物用于治療前列腺癌。
[0011] 在本發(fā)明的一個(gè)較佳實(shí)施例中，進(jìn)一步包括，式（1)化合物用于治療前列腺癌的 方式為：抗雄激素藥物、前藥或先導(dǎo)化合物。
[0012] 在本發(fā)明的一個(gè)較佳實(shí)施例中，進(jìn)一步包括，式（1)化合物能夠抑制前列腺癌 LNCaP細(xì)胞和PC-3細(xì)胞的活性，其抑制LNCaP細(xì)胞和PC-3細(xì)胞活性的作用表現(xiàn)為：濃度依 賴性和時(shí)間依賴性。
[0013] 式（1)化合物（HYLY008)的抑制前列腺癌LNCaP細(xì)胞和PC-3細(xì)胞的活性進(jìn)行 研究，結(jié)果表明：在相同作用時(shí)間下，隨HYLY008濃度升高，細(xì)胞活力降低，與對(duì)照組相比， HYLY008能顯著抑制LNCaP和PC-3的生長(zhǎng)活力，并且有明顯的濃度依賴性。對(duì)于LNCaP細(xì) 胞，HYLY008 作用 24h 和 48h 的 IC50 分別是 49. 34 μ M，24. 53 μ M，對(duì)于 PC-3 細(xì)胞，HYLY008 作用 24h 和 48h 的 IC50 分別是 37. 21 μΜ，19. 59 μΜ。25、50、100 μΜ 的 HYLY008 隨作用時(shí) 間的增加，細(xì)胞活力與對(duì)照組相比顯著降低，呈明顯的時(shí)間依賴性。
[0014] 在本發(fā)明的一個(gè)較佳實(shí)施例中，進(jìn)一步包括，式（1)化合物能夠影響前列腺癌 LNCaP細(xì)胞和PC-3細(xì)胞的周期，其影響周期的作用表現(xiàn)為：對(duì)LNCaP細(xì)胞和PC-3細(xì)胞的S 期有阻滯作用，作用具有時(shí)間依賴性。
[0015] 式（1)化合物（HYLY008)對(duì)前列腺癌LNCaP和PC-3細(xì)胞周期的影響進(jìn)行研究，結(jié) 果表明：HYLY008對(duì)LNCaP和PC-3細(xì)胞的S期有阻滯作用，其作用呈一定的時(shí)間依賴性。
[0016] 在本發(fā)明的一個(gè)較佳實(shí)施例中，進(jìn)一步包括，式（1)化合物能夠影響前列腺癌 LNCaP細(xì)胞和PC-3細(xì)胞凋亡，式（1)化合物對(duì)LNCaP細(xì)胞和PC-3細(xì)胞作用48小時(shí)后， LNCaP凋亡細(xì)胞的百分比從6. 41 %上升至17. 49%，PC-3凋亡細(xì)胞的百分比從3. 76%上升 至 46. 87%。
[0017] 式（1)化合物（HYLY008)對(duì)前列腺癌LNCaP和PC-3細(xì)胞凋亡的影響進(jìn)行研究，流 式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示：HYLY008作用48h后，LNCaP凋亡細(xì)胞的百分比從6. 41 %上升至 17. 49%，PC-3凋亡細(xì)胞的百分比從3. 76%上升至46. 87%，說(shuō)明HYLY008對(duì)前列腺癌細(xì)胞 有明顯的誘導(dǎo)凋亡的作用。
[0018] 在本發(fā)明的一個(gè)較佳實(shí)施例中，進(jìn)一步包括，式（1)化合物對(duì)前列腺癌LNCaP細(xì)胞 分泌PSA具有影響作用：式（1)化合物降低LNCaP細(xì)胞分泌PSA水平，其能夠顯著下調(diào)PSA mRNA水平以及蛋白水平的表達(dá)并呈劑量依賴性。
[0019] HYLY008對(duì)前列腺癌LNCaP細(xì)胞分泌PSA的影響研究，結(jié)果表明：50 μ M
[0020] 式（1)化合物（HYLY008)作用于LNCaP能明顯降低細(xì)胞分泌PSA的水平，與對(duì)照 組PSA 113. 63ng/ml相比，作用48h后PSA下降至4L 55ng/ml。以50 μΜ Bic作為陽(yáng)性對(duì) 照，均作用于LNCaP細(xì)胞48h后，50 μ M HYLY008下調(diào)細(xì)胞分泌PSA的效果與50 μ M Bic的 效果相當(dāng)。此外，HYLY008能顯著下調(diào)PSA mRNA水平以及蛋白水平的表達(dá)并呈劑量依賴性， 在0. 1 μ M R1881刺激下LNCaP細(xì)胞的PSA顯著升高，然而在HYLY008的干預(yù)下，對(duì)PSA的 表達(dá)上調(diào)有明顯的拮抗作用，0組或control組的PSA水平均已標(biāo)準(zhǔn)化為1. 0。
[0021] 在本發(fā)明的一個(gè)較佳實(shí)施例中，進(jìn)一步包括，式（1)化合物對(duì)AR信號(hào)下調(diào)和抑制 AR在LNCaP細(xì)胞中的表達(dá)具有影響作用：式（1)化合物能夠下調(diào)AR蛋白的表達(dá)并呈劑量 依賴性。
[0022] 式（1)化合物（HYLY008)對(duì)AR信號(hào)下調(diào)及抑制AR在LNCaP細(xì)胞中的表達(dá)進(jìn)行 研究，結(jié)果表明：20, 40或80 μΜ HYLY008能顯著下調(diào)LNCaP細(xì)胞中ARmRNA表達(dá)水平，分 別下調(diào)至25 %，50 %和85 %，50 μ M HYLY008下調(diào)AR的作用比陽(yáng)性對(duì)照藥Bic更明顯。而 在0.1以]?1?1881的誘導(dǎo)下，41?1111?熟表達(dá)比未用1?1881誘導(dǎo)組增加了30%，而用10,25和 50 μ M HYLY008的干預(yù)后，分別能下調(diào)60%，75 %和80 %的ARmRNA的表達(dá)。進(jìn)一步我們通 過(guò)蛋白免疫印跡發(fā)現(xiàn)HYLY008能下調(diào)AR蛋白的表達(dá)并呈劑量依賴性
[0023] 在本發(fā)明的一個(gè)較佳實(shí)施例中，進(jìn)一步包括，式（1)化合物對(duì)Stat3信號(hào)下調(diào)和抑 制Stat3在LNCaP細(xì)胞中的表達(dá)：式（1)化合物對(duì)Stat3mRNA和Stat3蛋白表達(dá)明顯下調(diào) 并呈劑量依賴性。
[0024] 式（1)化合物（HYLY008)對(duì)Stat3信號(hào)下調(diào)及抑制Stat3在LNCaP細(xì)胞中的表達(dá) 進(jìn)行研究，結(jié)果表明：20, 40或80 μ M HYLY008干預(yù)LNCaP細(xì)胞24小時(shí)，Stat3mRNA和Stat3 蛋白表達(dá)明顯下調(diào)并呈劑量依賴性；采用0. 1 μΜ R1881誘導(dǎo)LNCaP細(xì)胞12或24小時(shí)后， Stat3蛋白水平分別升高了 45%和78%，表明通過(guò)人工合成雄激素刺激可以正向調(diào)節(jié)前 列腺癌細(xì)胞中的Stat3信號(hào)。在HYLY008的干預(yù)下Stat3回調(diào)至陰性對(duì)照組的表達(dá)水平， 50 μΜ HYLY008能明顯下調(diào)Stat3蛋白表達(dá)，下降約為R1881誘導(dǎo)組的70%
[0025] 在本發(fā)明的一個(gè)較佳實(shí)施例中，進(jìn)一步包括，式（1)化合物能夠抑制裸鼠前列腺 癌細(xì)胞PC-3移植瘤生長(zhǎng)。
[0026] 對(duì)HYLY008的抑制裸鼠前列腺癌細(xì)胞PC-3移植瘤生長(zhǎng)進(jìn)行研究，結(jié)果表明： HYLY00850mg/kg/day從第13天開(kāi)始能明顯抑制腫瘤的生長(zhǎng)，該組的腫瘤體積為對(duì)照組 體積的40 % ;繼續(xù)給藥直到第28天，25mg/kg/day與50mg/kg/day給藥組腫瘤體積為 (538. 4±98. 6)mm3和（368. 6±62. 7)mm3,而對(duì)照組的腫瘤體積為（992. 0±158. 9)mm3;給藥 組腫瘤的重量分別為（0. 36 ±0. 05) g和（0. 24±0. 06) g，而對(duì)照組為（0. 63 ±0. 12) g ;試驗(yàn) 過(guò)程中我們對(duì)小鼠體重和脾組織進(jìn)行重量測(cè)定，發(fā)現(xiàn)給藥組與對(duì)照組沒(méi)有顯著差異，初步 提示在給藥劑量50mg/kg/day下HYLY008對(duì)小鼠沒(méi)有毒副作用。
[0027] 本發(fā)明的有益效果是：
[0028] 其一、本發(fā)明的式（I)化合物HYLY008同時(shí)具有AR拮抗和抑制Stat3的信號(hào)傳導(dǎo) 雙重活性；實(shí)驗(yàn)結(jié)果提供了該藥物的抗雄激素機(jī)制，其不同于已知的抗雄激素藥物氟他胺 和比卡魯胺，本發(fā)明藥物可以作為抗雄激素藥物、前藥或先導(dǎo)化合物用于治療前列腺癌。
[0029] 其二、本發(fā)明通過(guò)關(guān)于式（I)化合物HYLY008的用途的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，驗(yàn)證了其在治療 前列腺癌藥物中應(yīng)用的作用，填補(bǔ)了 AR拮抗和Stat3抑制雙重功能的藥物的空白。
【附圖說(shuō)明】