從漏蘆花中提取總生物堿的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種從漏蘆花中提取總生物堿的超聲提 取方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 漏蘆花，為一種常見(jiàn)的中蒙藥，別名為祁州漏蘆（Rhaponticum unif lorum(L.) DC.)干燥花，屬于菊科管狀花亞科祁州漏蘆屬植物。漏蘆花作為常用蒙藥，具有止刺痛、清 熱、解毒、解表等功效。
[0003] 總生物堿類物質(zhì)是漏蘆花的主要藥用成分。為此，研究漏蘆花中總生物堿的提取、 分離、純化方法對(duì)后續(xù)研究其生物活性具有重要意義。
[0004] 要從漏蘆花中充分地獲得總生物堿，應(yīng)當(dāng)盡可能地破壞漏蘆花細(xì)胞結(jié)構(gòu)。在提取 階段采用超聲波法提取總生物堿類物質(zhì)，是一種創(chuàng)新，其原理是超聲波可在液體中產(chǎn)生"空 穴作用"，而"空穴作用"產(chǎn)生的沖擊波和射流可以破壞植物細(xì)胞和細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，從而增加細(xì) 胞內(nèi)容物通過(guò)細(xì)胞膜的穿透能力，有助于總生物堿類化合物的釋放與溶出，超聲波使提取 液不斷震蕩，有助于溶質(zhì)擴(kuò)散，同時(shí)超聲波的熱效應(yīng)對(duì)原料有水浴作用。目前，在提取階段 采用超聲波從漏蘆花中提取總生物堿的研究尚未報(bào)道。
[0005] 目前，多采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)中蒙藥中主要成分進(jìn)行提取工藝優(yōu)化，響應(yīng)面優(yōu)化 與其比較具有明顯優(yōu)勢(shì)，可以實(shí)現(xiàn)應(yīng)用較少的試驗(yàn)數(shù)據(jù)在給定的范圍內(nèi)找到因素與響應(yīng)值 之間明確的函數(shù)表達(dá)式，得出最佳因素組合和響應(yīng)值的最優(yōu)值。
[0006] 因此，本發(fā)明以漏蘆花中總生物堿含量為指標(biāo)，采用響應(yīng)面優(yōu)化漏蘆花總生物堿 的提取工藝，為其進(jìn)一步研究提供了科學(xué)的理論基礎(chǔ)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明提供了一種從漏蘆花中提取總生物堿的超聲提取方法，以漏蘆花為原料， 利用超聲波提取，可高得率地獲得較高含量的漏蘆花總生物堿。
[0008] 本發(fā)明提供了一種從漏蘆花中提取總生物堿的超聲提取方法，包括：
[0009] 稱取漏蘆花，加入石油醚，50 °C水浴回流2h，取藥渣，加入1 %酸性乙醇，靜置 30min，在一定超聲溫度下超聲提取一定時(shí)間，進(jìn)行超聲提取，抽濾，將濾液濃縮，即得。
[0010] 作為一種【具體實(shí)施方式】，本發(fā)明提供了一種從漏蘆花中提取總生物堿的超聲提取 方法，包括：
[0011] 稱取漏蘆花〇. 5g，按l:10g/mL比例加入石油醚，50°C水浴回流2h，取藥渣，加入 一定量1 %酸性乙醇，靜置30min，在一定超聲溫度下超聲提取一定時(shí)間，進(jìn)行超聲提取，抽 濾，將濾液濃縮至25mL，即得。
[0012] 優(yōu)選地，所述的超聲溫度在20-60 °C，優(yōu)選為41°C。
[0013] 優(yōu)選地，超聲時(shí)間為20-60分鐘，優(yōu)選為40分鐘。
[0014] 優(yōu)選地，超聲功率為120-200W，優(yōu)選為200W。
[0015] 優(yōu)選地，料液比為l:20(g/mL)到l:40(g/mL)之間，更優(yōu)選為l:28(g/mL)。"料液 比"，指固態(tài)的"料"的質(zhì)量與作為浸提液的"液"的體積的比。"料"的單位用g、mg，"液"的 單位用L、mL，于是"料液比"的單位有g(shù)/L、mg/L、g/mL、mg/mL等。本發(fā)明所采用的單位為 g/mL〇
[0016] 超聲波作為一種物理能對(duì)漏蘆花進(jìn)行處理，更有利于漏蘆花中總生物堿的提取， 一方面，能通過(guò)空化作用產(chǎn)生極大的壓力，造成被破碎物的細(xì)胞壁甚至整個(gè)生物體破裂而 使胞內(nèi)物質(zhì)釋放、擴(kuò)散或溶解出來(lái)；另一方面，適宜強(qiáng)度的超聲波能夠使總生物堿分子的構(gòu) 象發(fā)生正向轉(zhuǎn)化，從而提高總生物堿的活性。
[0017] 在超聲溫度一定時(shí)，隨著超聲功率的增大，總生物喊提取率呈遞增趨勢(shì)，這是由于 超聲功率的增大，有助于超聲波破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，進(jìn)而提高總生物堿提取率。在超聲功率一定 時(shí)，隨著超聲溫度增大，總生物堿提取率呈現(xiàn)先增加后減少趨勢(shì)，其原因是，溫度升高加快 分子運(yùn)動(dòng)速度，提取率增高，但溫度過(guò)高，破壞生物堿結(jié)構(gòu)，進(jìn)而導(dǎo)致總生物堿提取率相對(duì) 下降。綜上所述，在超聲溫度與超聲功率相互作用下，總生物堿提取率呈先增大后減少的趨 勢(shì)。
[0018] 總生物堿提取率隨著料液比和超聲溫度的增加呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)。料液比一定 時(shí)，在高溫區(qū)和低溫區(qū)的生物堿提取率較低，這主要是因?yàn)闇囟鹊纳呤沟梅肿咏飧胶蛿U(kuò) 散運(yùn)動(dòng)速度加快，從而提高了生物堿析出速度和提取率，而溫度過(guò)高會(huì)破壞生物堿結(jié)構(gòu)，降 低提取率。料液比的增大，使得生物堿濃度降低，更容易從細(xì)胞中溶出。
[0019] 總生物堿提取率隨超聲時(shí)間的延長(zhǎng)和超聲溫度的升高而增大，根據(jù)超聲波作用原 理，超聲時(shí)間的延長(zhǎng)有利于超聲波充分破壞漏蘆花細(xì)胞壁，從而使生物堿得以充分溶出，同 時(shí)超聲溫度的升高使得分子解附和擴(kuò)散運(yùn)動(dòng)速度加快，從而提高了總生物堿提取率。因此 適當(dāng)?shù)匮娱L(zhǎng)時(shí)間和提高溫度有助于提高生物堿的提取率。但超聲溫度過(guò)高、超聲時(shí)間過(guò)長(zhǎng) 導(dǎo)致生物堿提取率下降，這是由于時(shí)間長(zhǎng)、溫度高使生物堿分解或破壞了生物堿結(jié)構(gòu)。
[0020] 在料液比不變時(shí)，生物堿提取率隨功率增大而逐漸增大，這是由于超聲功率的增 大，有助于超聲波破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，進(jìn)而提高生物堿提取率。在功率不變時(shí)，生物堿提取率隨 料液比增大，呈拋物線形狀，料液比的增大，使得生物堿濃度降低，更容易從細(xì)胞中溶出。
[0021] 在超聲時(shí)間不變時(shí)，生物堿提取率隨超聲功率增大而逐漸增大，這是由于超聲功 率的增大，有助于超聲波破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，進(jìn)而提高生物堿提取率。在超聲功率不變時(shí)，生物 堿提取率隨超聲時(shí)間增大，呈拋物線形狀。這是因?yàn)槌晻r(shí)間的延長(zhǎng)有利于超聲波充分破 壞漏蘆花細(xì)胞壁，從而使生物堿得以充分溶出。
[0022] 在超聲時(shí)間一定時(shí)，總生物堿提取率隨料液比增加而升高，在料液比一定時(shí)，生物 堿提取率隨超聲時(shí)間延長(zhǎng)先增加后減小。主要原因是超聲波可以使得漏蘆花的細(xì)胞壁破 碎，從而使生物堿從細(xì)胞中析出，而超聲時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)破壞生物堿結(jié)構(gòu)，進(jìn)而影響提取率。
[0023] 本發(fā)明利用超聲對(duì)漏蘆花中的總生物堿進(jìn)行了提取，首先通過(guò)石油醚進(jìn)行脫脂脫 色脫蠟，將漏蘆花細(xì)胞中總生物堿以乙醇為溶劑進(jìn)行提取，協(xié)同超聲波處理破碎的漏蘆花 細(xì)胞，可高效獲得含總生物堿的漏蘆花內(nèi)容物提取液；再通過(guò)抽濾處理以除去提取液中的 藥渣后，即可高得率地獲得漏蘆花總生物堿。相比傳統(tǒng)提取法，該法具有使用溶劑少、工藝 簡(jiǎn)便、條件溫和、易于控制、安全可靠等特點(diǎn)；該法提取效率更高，操作時(shí)間短，提取得率較 尚。
【附圖說(shuō)明】
[0024] 圖1 :對(duì)照品溶液和供試品溶液的吸收光譜曲線
[0025] 圖2 :鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)曲線
[0026] 圖3 :超聲溫度對(duì)漏蘆花中總生物堿提取效果的影響
[0027] 圖4 :超聲功率對(duì)漏蘆花中總生物堿提取效果的影響
[0028] 圖5 :料液比對(duì)漏蘆花中總生物堿提取效果的影響
[0029] 圖6 :超聲時(shí)間對(duì)漏蘆花中總生物堿提取效果的影響
[0030] 圖7 :超聲溫度（A)和超聲功率⑶交互作用對(duì)總生物堿提取率影響的響應(yīng)面（左 圖）及等高線圖（右圖）
[0031] 圖8 :超聲溫度㈧和料液比（C)交互作用對(duì)總生物堿提取率影響的響應(yīng)面（左 圖）及等高線圖（右圖）
[0032] 圖9 :超聲溫度（A)和超聲時(shí)間⑶交互作用對(duì)總生物堿提取率影響的響應(yīng)面（左 圖）及等高線圖（右圖）
[0033] 圖10 :超聲功率⑶和料液比（C)交互作用對(duì)總生物堿提取率影響的響應(yīng)面（左 圖）及等高線圖（右圖）
[0034] 圖11 :超聲功率（B)和超聲時(shí)間（D)交互作用對(duì)總生物堿提取率影響的響應(yīng)面 (左圖）及等高線圖（右圖）
[0035] 圖12 :料液比（C)和超聲時(shí)間⑶交互作用對(duì)總生物堿提取率影響的響應(yīng)面（左 圖）及等高線圖（右圖）
【具體實(shí)施方式】
[0036] 下面對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例進(jìn)行描述：
[0037] 實(shí)施例1.從漏蘆花中提取總生物堿的方法
[0038] I. 1實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備
[0039] 漏蘆花，采自內(nèi)蒙古呼和浩特市大青山，經(jīng)鑒定為菊科管狀花亞科祁州漏蘆屬植 物的干燥花（Rhaponticum uniflorum(L.)DC·)] 〇
[0040] 1. 2實(shí)驗(yàn)具體方法
[0041] 1. 2. 1緩沖溶液及顯色劑的配制
[0042] pH = 5. 4緩沖溶液：取40m