一種高穩(wěn)定性的迷迭香精油納米脂質(zhì)體抗菌劑及制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于抗菌劑及藥物制劑或者化妝品領(lǐng)域，具體涉及一種高穩(wěn)定性的迷迭香 精油納米脂質(zhì)體抗菌劑及制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 迷迭香，系唇形科迷迭香屬植物，常綠灌木，因含有大量天然抗氧化成分而備受人 們關(guān)注，其中迷迭香莖和葉提取得到的揮發(fā)油具有很好的抗菌消炎功效；迷迭香精油無(wú)色 或淡黃色，主要化學(xué)成分為桉葉油素、樟腦、龍腦、a-蒎烯、莰烯、乙酸龍腦酯、馬鞭草烯酮 等，迷迭香全草可入藥，有健胃發(fā)汗功效，精油對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、霍亂弧菌等有 較好的抗菌作用，迷迭香作為香辛料可廣泛地應(yīng)用于食品工業(yè)，而且經(jīng)研究表明迷迭香還 是一種高效理想的抗氧化劑。
[0003] 國(guó)內(nèi)有很多關(guān)于迷迭香在食品、保健品、醫(yī)藥的專(zhuān)利申請(qǐng)；CN103788494A公開(kāi)了 一種果蔬保鮮薄膜及其制備方法，添加迷迭香精油作為活性成分抑制微生物繁殖及起到抗 氧化作用；CN104365822A公開(kāi)了一種用迷迭香精油保鮮南方葡萄的方法；CN103316158A發(fā) 明提供了一種包括迷迭香精油的復(fù)方精油以達(dá)到減肥瘦身效果；CN101506106公開(kāi)了一種 含草藥成分的飲用水的配方及方法，配方包括迷迭香精油以穩(wěn)定成分，從而延長(zhǎng)保存期； CN101402864公開(kāi)了屬于高活性抗氧化產(chǎn)品制備技術(shù)領(lǐng)域的一種從迷迭香中制備抗氧化產(chǎn) 品的方法；CN103031210A公開(kāi)了一種可兼制迷迭香精油的迷迭香脫水方法，最大化利用迷 迭香之良好經(jīng)濟(jì)效果；CN102899170A公開(kāi)了一種采用亞臨界流體技術(shù)萃取迷迭香精油的 方法，適合工業(yè)化推廣。
[0004] 雖然迷迭香精油在醫(yī)學(xué)，食品和化妝品行業(yè)被廣泛應(yīng)用，具有較好的殺菌、增香等 特點(diǎn)，但是迷迭香精油易揮發(fā)，暴露在空氣中不穩(wěn)定，所以要尋找有效地方法降低迷迭香精 油在使用過(guò)程中的揮發(fā)程度，延長(zhǎng)保存期。
[0005] 納米脂質(zhì)體能將迷迭香精油包裹在內(nèi)，并且納米脂質(zhì)體不會(huì)對(duì)迷迭香精油的主要 活性成分造成破壞；納米脂質(zhì)體使迷迭香精油中的活性成分與外界環(huán)境隔絕開(kāi)來(lái)，可以降 低迷迭香精油揮發(fā)性，延長(zhǎng)保存期，但由于脂質(zhì)體的緩釋作用，包裹精油的脂質(zhì)體保質(zhì)期受 限，所以，選用殼聚糖和明膠制成穩(wěn)定性高的多層脂質(zhì)體；此外，納米脂質(zhì)體由于它們的亞 細(xì)胞尺寸，能加強(qiáng)脂質(zhì)體的被動(dòng)吸收機(jī)制，減少物質(zhì)運(yùn)輸阻力，從而增強(qiáng)精油的抗菌等效 果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是公開(kāi)一種高穩(wěn)定的迷迭香精油納米脂質(zhì)體及其制備方法，通過(guò)將 迷迭香精油包裹在多層納米脂質(zhì)體中，以實(shí)現(xiàn)減少迷迭香精油在使用過(guò)程中的揮發(fā)，從而 減少迷迭香精油的浪費(fèi)，達(dá)到長(zhǎng)效抗菌與高效利用的目的。
[0007] -種高穩(wěn)定性的迷迭香精油納米脂質(zhì)體，迷迭香精油包裹在磷脂雙分子層中，其 特征在于：磷脂雙分子層為第一層納米脂質(zhì)體，還設(shè)有第二層納米脂質(zhì)體，第二層由殼聚糖 組成。
[0008] 進(jìn)一步地，所述的一種高穩(wěn)定性的迷迭香精油納米脂質(zhì)體，其特征在于：還設(shè)有第 三層納米脂質(zhì)體，第三層由明膠組成。
[0009] 進(jìn)一步地，第二層納米脂質(zhì)體中殼聚糖的濃度為0? 2mg/mL。
[0010] 進(jìn)一步地，第三層納米脂質(zhì)體中明膠的濃度為0. 4mg/mL。
[0011] 本發(fā)明由迷迭香精油，大豆卵磷脂，膽固醇、表面活性劑，殼聚糖和明膠制成迷迭 香精油納米脂質(zhì)體。
[0012] 大豆卵磷脂、膽固醇是構(gòu)成脂質(zhì)體的組要成分，膽固醇均有調(diào)節(jié)膜流動(dòng)性的作用， 所以考察其兩者的配比變化，對(duì)構(gòu)成的脂質(zhì)體分散性等參數(shù)有無(wú)影響；表面活性劑是增加 脂質(zhì)體穩(wěn)定性；迷迭香精油濃度是根據(jù)包封率來(lái)確定的；醋酸鹽溶液的PH是為了最佳溶解 殼聚糖；殼聚糖和明膠可以增加穩(wěn)定性。
[0013] 本發(fā)明的制備方法是將迷迭香精油，大豆卵磷脂，膽固醇混合于有機(jī)溶劑，減壓蒸 干形成光滑的薄膜，加入水相介質(zhì)和表面活性劑組成的混合溶液溶解薄膜并超聲成乳、離 心后取上層液體過(guò)濾得到單層迷迭香精油納米脂質(zhì)體，其特征在于：將單層迷迭香精油納 米脂質(zhì)體與殼聚糖溶液攪拌均勻，通過(guò)離心和微孔濾膜過(guò)濾，得到粒徑為納米級(jí)的雙層迷 迭香精油納米脂質(zhì)體。
[0014] 進(jìn)一步地，將雙層迷迭香精油納米脂質(zhì)體與明膠溶液攪拌均勻，通過(guò)離心和微孔 濾膜過(guò)濾，得到粒徑為納米級(jí)的多層迷迭香精油納米脂質(zhì)體。
[0015] 進(jìn)一步地，本發(fā)明的大豆卵磷脂和膽固醇的質(zhì)量比例為5:1;表面活性劑、迷迭香 精油與膽固醇的質(zhì)量比為：1:4:4,此條件下可以得到最高的包封率。
[0016] 進(jìn)一步地，表面活性劑為PVP，混合溶液中PVP的濃度為I. 0mg/mL。
[0017] 單層迷迭香精油納米脂質(zhì)體與殼聚糖溶液的體積比為1:10 ;雙層迷迭香精油納 米脂質(zhì)體與明膠溶液的體積比為1:10。
[0018] 本發(fā)明中所述的有機(jī)溶劑是氯仿。
[0019] 本發(fā)明中所用的水相介質(zhì)是根據(jù)中國(guó)藥典2000版標(biāo)準(zhǔn)配制的醋酸鹽緩沖溶液， pH值 3. 5~4. 0。
[0020] 所述的殼聚糖溶液為殼聚糖的醋酸鹽溶液，濃度為0.2mg/mL，醋酸鹽溶液是根 據(jù)中國(guó)藥典2000版標(biāo)準(zhǔn)配制的醋酸鹽緩沖溶液，pH值3. 5~4. 0,優(yōu)選3. 6,能夠最佳溶解殼 聚糖。
[0021] 所述明膠溶液為明膠的醋酸鹽溶液，濃度為0. 4mg/mL，醋酸鹽溶液是根據(jù)中國(guó)藥 典2000版標(biāo)準(zhǔn)配制的醋酸鹽緩沖溶液，pH值3. 5~4. 0。
[0022] 本發(fā)明中脂質(zhì)體的第一層是磷脂雙分子層，即人工細(xì)胞膜層。
[0023] 本發(fā)明中脂質(zhì)體的第二層由殼聚糖組成，濃度為0.2mg/mL。
[0024] 本發(fā)明中脂質(zhì)體的第三層由明膠組成，濃度為0.4mg/mL。
【附圖說(shuō)明】
[0025] 圖1為迷迭香精油納米脂質(zhì)體的包封率。
[0026] 圖2為迷迭香精油納米脂質(zhì)體的粒徑與多分散系數(shù)roi。
[0027] 圖3為多層迷迭香精油納米脂質(zhì)體熒光顯微圖。
[0028] 圖4為多層迷迭香精油納米脂質(zhì)體原子力顯微圖。
[0029] 圖5多層迷迭香精油納米脂質(zhì)體對(duì)大腸桿菌的抗菌性能。
[0030]圖6多層迷迭香精油納米脂質(zhì)體對(duì)金黃色葡萄球菌的抗菌性能。
[0031] 表1為迷迭香精油納米脂質(zhì)體的Zeta電位。
【具體實(shí)施方式】
[0032] 通過(guò)下面實(shí)例說(shuō)明本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】，但本發(fā)明的保護(hù)內(nèi)容，不僅局限于此 實(shí)施例1多層迷迭香精油納米脂質(zhì)體的包封率 1實(shí)驗(yàn)材料 大豆卵磷脂；BR;國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
[0033] 膽固醇；AR;國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
[0034] 三氯甲烷；AR;國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
[0035] 迷迭香精油；AR;法國(guó)fIorihana精油。
[0036]PVP;GR;國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
[0037] 殼聚糖；BR;國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
[0038] 明膠；BR;國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
[0039] 2實(shí)驗(yàn)方法 1)單層迷迭香精油納米脂質(zhì)體的制備 ①稱(chēng)取Ig大豆卵磷脂，0.2g膽固醇和200mg的迷迭香精油，加50mL氯仿使其溶 解。
[0040] ②在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)至溶劑蒸干，蒸發(fā)溫度為10~30 °C，圓底燒瓶?jī)?nèi)壁會(huì)形 成光滑的薄膜；然后將所得產(chǎn)品放入真空干燥箱中，30 °C，真空狀態(tài)下干燥24小時(shí)。
[0041] ③稱(chēng)取0. 05g的PVP于50mL醋酸鹽緩沖液中，超聲波條件下擴(kuò)散，然后將PVP 的醋酸鹽緩沖液加入圓底燒瓶中超聲波條件下進(jìn)行水化。
[0042] ④將水化后的混合液于細(xì)胞超微粉碎儀中以工作10s，間隙5s的頻率粉碎 30min〇
[0043] ⑤將所得產(chǎn)品進(jìn)行離心，4000rpm，15min，取上層液體D
[0044] ⑥將所得液體用0.22ym濾膜進(jìn)行過(guò)濾，得濾液，為單層迷迭香精油納米脂質(zhì) 體。
[0045] 2)雙層迷迭香精油納米脂質(zhì)體的制備 ①按照上述單層迷迭香精油納米脂質(zhì)體的制備方法，制備含200mg迷迭香精油的單 層納米脂質(zhì)體。
[0046] ②將單層迷迭香精油納米脂質(zhì)體分散在含0. 2mg/mL殼聚糖的醋酸鹽溶液中混 合均勻；單層迷迭香精油納米脂質(zhì)體與殼聚糖的醋酸鹽溶液的體積比1 :1〇。
[0047] ③將所得混合液于細(xì)胞超微粉碎儀中以工作10s，間隙5s的頻率粉碎30 min〇
[0048] ④將所得產(chǎn)品進(jìn)行離心，4000rpm，15min，取上層液體。
[0049] ⑤將所得液體用0.22ym濾膜進(jìn)行過(guò)濾，得濾液，為雙層迷迭香精油納米脂質(zhì) 體。
[0050] 3)多層迷迭香精油納米脂質(zhì)體的制備 ①按照上述雙層迷迭香精油納米脂質(zhì)體的制備方法，制備含200mg迷迭香精油的雙 層納米脂質(zhì)體。
[0051] ②將雙層迷迭香精油納米脂質(zhì)體分散在含0.4mg/mL明膠的醋酸鹽溶液中使其 混合均勻；雙層迷迭香精油納米脂質(zhì)體與明膠的醋酸鹽溶液的體積比為1 :1〇。
[0052] ③將所得混合液于細(xì)胞超微粉碎儀中以工作10s，間隙5s的頻率粉碎30 min〇
[0053] ④將所得產(chǎn)品進(jìn)行離心，4000rpm，15min，取上層液體。
[0054] ⑤將所得液體用0.22ym濾膜進(jìn)行過(guò)濾，得濾液，為多層迷迭香精油納米脂質(zhì) 體。
[0055] 4)包封率的測(cè)定 用無(wú)水乙醇稀釋迷迭香精油，逐級(jí)稀釋成濃度分別為0.l、〇. 2、0. 4、0. 6、0. 8mg/mL的 標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后，分別吸取IyL標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行GC-MS分析，對(duì)其主要成分1，8-桉葉素的譜 峰面積進(jìn)行自動(dòng)積分，繪制1，8-桉葉素峰面積-迷迭香精油濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，首先取ImL迷 迭香精油納米脂質(zhì)體樣品，13500rpm，離心3h，倒掉上清液，接著加入ImL乙醇破乳劑，超 聲3h，最后以10000rpm的轉(zhuǎn)速離心15min，取上清液，用于GC-MS分析。制備好的脂質(zhì) 體樣品，對(duì)精油主成分的峰面進(jìn)行自動(dòng)積分，再根據(jù)步驟1中繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算出脂質(zhì) 體中植物精油的含量。
[0057] 3迷迭香精油納米脂質(zhì)體的包封率 包封率是評(píng)價(jià)脂質(zhì)體制劑質(zhì)量好壞的最重要的指標(biāo)，也是脂質(zhì)體能否發(fā)揮較普通制劑 尚效、低毒等特點(diǎn)的關(guān)鍵；由圖1可看出，單層迷迭香精油納米脂質(zhì)體的包封率為37. 1%，雙 層迷迭香精油納米脂質(zhì)體的包封率為56. 3%，多層