大吳風(fēng)總黃酮微波輔助雙水相萃取工藝及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種植物有效成分提取工藝，具體涉及大吳風(fēng)總黃酮微波輔助雙水相 萃取工藝及響應(yīng)面優(yōu)化方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 大吳風(fēng)草Farfugiumjaponicum(L.f.)Kitam.為菊科管狀花亞科千里光族款冬亞 族大吳風(fēng)草屬，多年生草本植物，全株入藥。別名蓮蓬草（《福建民間草藥》)、獨(dú)腳蓮（《質(zhì)問(wèn) 本草》)、野金瓜（《浙江民間常用草藥》）。大吳風(fēng)草的嫩葉和莖可作為蔬菜食用，"辛、溫、無(wú) 毒，性涼、味苦"，并具有退熱、解毒、活血之功效。民間廣泛用于治療濕疹、咳嗽、支氣管炎、 淋巴腺炎、痢疾等疾病。大吳風(fēng)草作為藥食兩用的資源植物具有較高的開(kāi)發(fā)價(jià)值。黃酮類(lèi) 物質(zhì)具有抗癌、抗病毒，調(diào)節(jié)免疫力、治療心腦血管疾病、骨質(zhì)疏松和糖尿病并發(fā)癥等多種 生理活性藥用作用。研究表明黃酮類(lèi)物質(zhì)具有很強(qiáng)的抗氧化作用，能清除人體中有害的超 氧自由基團(tuán)，具有抗衰老、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等生理活性。但是目前針對(duì)于大吳風(fēng)總黃酮的提 取方法和抑菌活性方面研究的資料非常少，究其主要原因是利用現(xiàn)有的萃取技術(shù)很難獲得 純度較高的大吳風(fēng)總黃酮，因此在開(kāi)展相關(guān)研究時(shí)收到局限。
[0003] 有鑒于此，需要發(fā)明一種大吳風(fēng)總黃酮的高純度提取工藝，并開(kāi)展其藥理研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種方法簡(jiǎn)單、提取純度高的大吳 風(fēng)總黃酮微波輔助雙水相萃取工藝，并同時(shí)提供其抗菌應(yīng)用。
[0005] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下： 本發(fā)明一方面提供了一種大吳風(fēng)總黃酮微波輔助雙水相萃取工藝，其關(guān)鍵技術(shù)點(diǎn)在 于，包括如下步驟： 1) 大吳風(fēng)粗提液的提取 選取大吳風(fēng)，粉碎，稱取大吳風(fēng)粉末，按1:30-35(g:mL)料液比，加入提取劑體積分?jǐn)?shù) 為60%-70%的乙醇溶液，20-30°C下，對(duì)混合液微波處理20-25min，然后置于60°C恒溫水浴 鍋中浸提1-1. 5h，離心，取上清液，得到粗提液； 2) 雙水相萃取 將步驟1)得到的粗提液，加入C2H5OH- (NH4) 2S04形成的雙水相體系，所述C2H50H的質(zhì)量 分?jǐn)?shù)為20%-28%，所述（NH4)2SO4的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為16%-24%，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1. 5%-3%的NaCl， 調(diào)節(jié)pH值為6-8,混勾，分相； 3) 減壓蒸餾、干燥 取出富含大吳風(fēng)總黃酮的乙醇上相，進(jìn)行減壓蒸餾、濃縮溶液，然后將濃縮液進(jìn)行真空 干燥，得到大吳風(fēng)總黃酮。
[0006] 作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)，所述步驟2)中包含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 3%-0. 5%的羥丙 基-(6-環(huán)糊精。
[0007] 作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)，所述大吳風(fēng)粗提液在雙水相體系中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 10%-19%〇
[0008] 作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)，所述分相溫度為15_35°C，分相時(shí)間為2-4小時(shí)。
[0009] 作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)，所述的真空干燥的溫度為60_80°C。
[0010] 本發(fā)明另一方面，提供了一種上述方法得到的大吳風(fēng)總黃酮在制備抑菌產(chǎn)品中的 應(yīng)用。
[0011] 本發(fā)明中"加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1. 5%-3%的NaCl"，是指加入雙水相中NaCl的質(zhì)量分 數(shù)為L(zhǎng)5%-3%。
[0012] 本發(fā)明中"質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 3%_0. 5%的羥丙基-P-環(huán)糊精"是指雙水相中羥丙 基-0 -環(huán)糊精的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為〇. 3%_0. 5%。
[0013] 基于黃酮的多種優(yōu)良藥用性能以及植物源食藥同補(bǔ)的廣泛認(rèn)可，植物中黃酮的提 取和合理使用，已經(jīng)成為業(yè)內(nèi)研發(fā)的熱點(diǎn)。不同的植物黃酮存在不同的藥理活性，為了得到 高純度的大吳風(fēng)總黃酮，并開(kāi)發(fā)其藥用價(jià)值，發(fā)明人進(jìn)行了大量的研究工作。發(fā)明人嘗試 了利用不同相的雙水相萃取法進(jìn)行大吳風(fēng)總黃酮的萃取，大吳風(fēng)總黃酮的分配系數(shù)和萃取 率均不理想。原因可能為微波提取時(shí)，粗提液中摻雜了較多的雜質(zhì)成分，致使在雙水相萃取 時(shí)，較多的雜質(zhì)混合大吳風(fēng)總黃酮進(jìn)入了上相，使其純度和萃取率受到影響。發(fā)明人放棄了 微波輔助提取法，采用常規(guī)的固液浸提的方法進(jìn)行粗提，雖然篩選雙水相條件可以獲得純 度滿意的大吳風(fēng)總黃酮，但是其提取率偏低，無(wú)法滿足工業(yè)生產(chǎn)要求，并造成了資源浪費(fèi)， 并不可取。發(fā)明人將關(guān)注點(diǎn)放到如何優(yōu)選雙水相萃取步驟的研究，經(jīng)過(guò)大量的試驗(yàn)和創(chuàng)造 性的勞動(dòng)，驚喜的發(fā)現(xiàn)，在雙水相體系中加入羥丙基P環(huán)糊精可以達(dá)到良好的萃取分離效 果。分析其原因是羥丙基0環(huán)糊精將雜質(zhì)物質(zhì)選擇性的進(jìn)行了包裹，由于羥丙基0環(huán)糊 精的水溶性大，將雜質(zhì)滯留在下相中，達(dá)到了和大吳風(fēng)黃酮的分離。本發(fā)明人對(duì)提取工藝各 條件參數(shù)進(jìn)行了充分深入的研究，形成了本發(fā)明。
[0014] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明取得有益效果為： 本發(fā)明針對(duì)大吳風(fēng)本身，采用微波輔助雙水相萃取工藝，使大吳風(fēng)總黃酮的提取率變 高，雜質(zhì)成分的提取率變低，使最終得到的大吳風(fēng)總黃酮的純度和收率顯著提高。
[0015] 本發(fā)明在雙水相萃取工藝中加入羥丙基P環(huán)糊精，可以有效提高大吳風(fēng)總黃酮 的分配系數(shù)和萃取率，萃取率可以高達(dá)97%。
[0016] 本發(fā)明操作工藝簡(jiǎn)單、成本低、易操作，可以用于工業(yè)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)的敘述。
[0018] 實(shí)施例1 一種大吳風(fēng)總黃酮微波輔助雙水相萃取工藝，包括如下步驟： 1) 大吳風(fēng)粗提液的提取 準(zhǔn)確稱取〇. 5Kg大吳風(fēng)粉末，加入提取劑體積分?jǐn)?shù)為60%乙醇溶液15L，與大吳風(fēng)粉 末混合，浸提。首先在25°C下，對(duì)混合液微波處理25min，然后置于60°C恒溫水浴鍋中浸提 I. 5h，離心，取上清液，得到粗提物； 2) 雙水相萃取 將步驟I)得到的粗提液，加入C2H5OH- (NH4) 2S04形成的雙水相體系，使粗提液在雙水相 體系中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為19%，所述C2H5OH的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%，所述（NH4) 2S04的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為16%， 加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2. 68%的NaCl，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 5%的羥丙基-P-環(huán)糊精，調(diào)節(jié)pH值為 7. 64,混勾，分相，分相溫度為25°C，分相時(shí)間為2h。
[0019] 3)減壓蒸餾、干燥 取出富含大吳風(fēng)總黃酮的乙醇上相，進(jìn)行減壓蒸餾、濃縮溶液，然后將濃縮液在60°C進(jìn) 行真空干燥，得到大吳風(fēng)總黃酮0. 〇5Kg，UV檢測(cè)含量96. 3%。
[0020] 實(shí)施例2 一種大吳風(fēng)總黃酮微波輔助雙水相萃取工藝，包括如下步驟： 1)大吳風(fēng)粗提液的提取 準(zhǔn)確稱取〇. 5Kg大吳風(fēng)粉末，加入提取劑體積分?jǐn)?shù)為60%乙醇溶液15L，與大吳風(fēng)粉末 混合，浸提。首先在25°C下，對(duì)混合液微波處理20min，然后置于60°C恒溫水浴鍋中浸提lh， 離心，取上清液，得到粗提物。
[0021] 2)雙水相萃取 將步驟1)得到的粗提液，加入C2H5OH- (NH4) 2S04形成的雙水相體系，使粗提液在雙水相 體系中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為19%，所述C2H5OH的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為28%，所述（NH4) 2S04的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為24%， 加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1. 5%的NaCl，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 3%的羥丙基-P-環(huán)糊精，調(diào)節(jié)pH值為 6,混勾，分相，分相溫度為25°C，分相時(shí)間為2h。
[0022] 3)減壓蒸餾、干燥 取出富含大吳風(fēng)總黃酮的乙醇上相，進(jìn)行減壓蒸餾、濃縮溶液，然后將濃縮液在60°C進(jìn) 行真空干燥，得到大吳風(fēng)總黃酮0. 〇49Kg，UV檢測(cè)含量96. 0%。
[0023] 實(shí)施例3 一種大吳風(fēng)總黃酮微波輔助雙水相萃取工藝，包括如下步驟： 1)大吳風(fēng)粗提液的提取 準(zhǔn)確稱取〇. 5Kg大吳風(fēng)粉末，加入提取劑體積分?jǐn)?shù)為60%乙醇溶液15L，與大吳風(fēng)粉末 混合，浸提。首先在25°C下，對(duì)混合液微波處理20min，然后置于60°C恒溫水浴鍋中浸提lh， 離心，取上清液，得到粗提物。
[0024] 2)雙水相萃取 將步驟1)得到的粗提液，加入C2H5OH- (NH4) 2S04形成的雙水相體系，使粗提液在雙水相 體系中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%，所述C2H5OH的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為24%，所述（NH4) 2S04的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為18%， 加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%的NaCl，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 4%的羥丙基P環(huán)糊精，調(diào)節(jié)pH值8,混勻， 分相，分相溫度為25°C，分相時(shí)間為2h。
[0025] 3)減壓蒸餾、干燥 取出富含大吳風(fēng)總黃酮的乙醇上相，進(jìn)行減壓蒸餾、濃縮溶液，然后將濃縮液在60°C進(jìn) 行真空干燥，得到大吳風(fēng)總黃酮0. 〇51Kg，UV檢測(cè)含量為96. 1%。
[0026] 實(shí)施例4抑菌試驗(yàn) 采用K-B紙片擴(kuò)散法，在無(wú)菌的條件下，取IOOuL菌種于MH(MullerHintonagar)培 養(yǎng)基內(nèi)，密封并輕輕搖勻，置于搖床37°C培養(yǎng)18h。取適量種供試菌液于試管中，稀釋成 0. 5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)濁度。將蘸取供試藥溶液直徑為7mm的無(wú)菌濾紙片，均勻擺放在涂有菌懸液 的MHA培養(yǎng)基上，每個(gè)培養(yǎng)皿中均擺放4個(gè)紙片，分別配置高中低3個(gè)劑量的TFF和陽(yáng)性對(duì) 照藥物：