人工保存液置換血小板溶液的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及人工保存液置換血小板溶液的制造方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 為了輸血、血液制劑的制造而進(jìn)行的獻(xiàn)血大致分為全血獻(xiàn)血和成分獻(xiàn)血。將通過(guò) 獻(xiàn)血采集的血液分離成各成分，由此制造各種血液制劑。血小板制劑指的是被濃縮的血小 板分散于血漿（主要成分為蛋白質(zhì)和水分）而成的溶液。血小板制劑中的血小板的濃度由 于比全血高3倍量以上，血小板之間有可能非常容易聚集。
[0003] 血小板制劑，為了血小板減少癥、血小板機(jī)能降低癥中的出血的預(yù)防、治療而用于 輸血?，F(xiàn)有的血小板制劑，取決于患者會(huì)引起蕁麻疹、發(fā)燒等變態(tài)反應(yīng)而成為問題。作為變 態(tài)反應(yīng)的主要原因，可列舉出血小板制劑中含有的蛋白質(zhì)，期待除去含有蛋白質(zhì)的血衆(zhòng)、置 換為人工保存液而成的人工保存液置換血小板溶液。
[0004] 上述人工保存液置換血小板溶液的制造方法，除了要求操作中血小板不會(huì)活化之 外，還要求高的血小板回收率、高的蛋白質(zhì)除去率。以往，作為除去血小板制劑的蛋白質(zhì)的 方法，通常為離心分離法。通過(guò)離心分離法除去了血小板制劑中的蛋白質(zhì)的情況下，暗示了 引起血小板活化的可能性，另外，利用離心法時(shí)，操作繁雜，需要相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間。但是，現(xiàn)在 的現(xiàn)狀在于，除了離心法以外，利用其它方法時(shí)，不能實(shí)用化。
[0005] 作為其它方法，考慮使用膜來(lái)分離的方法，作為膜分離的方法，存在血球（紅血 球、白血球、血小板）與血衆(zhòng)的分離（專利文獻(xiàn)1~3)等中使用的公知技術(shù)。專利文獻(xiàn)1， 為了防止紅血球的溶血而著眼于膜的溶脹性，公開了多孔膜使用不易溶脹的原材料的同時(shí) 使多孔膜中濕潤(rùn)水分為極少量的技術(shù)。專利文獻(xiàn)2為規(guī)定膜的原纖維結(jié)構(gòu)或者使得血液流 量加快的技術(shù)。進(jìn)而，專利文獻(xiàn)3,作為不易產(chǎn)生堵塞、污染的膜，著眼于親水性高分子，公開 了多孔膜中含有親水性高分子3~30質(zhì)量％而成的聚砜系樹脂多孔膜。無(wú)論怎樣，現(xiàn)有技 術(shù)中進(jìn)行過(guò)濾的對(duì)象為全血，沒有將血小板制劑等容易聚集的溶液作為對(duì)象。進(jìn)而，僅著眼 于膜，沒有關(guān)于分離方法的發(fā)現(xiàn)和暗示。
[0006] 現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn) 專利文獻(xiàn) 專利文獻(xiàn)1 :日本特開昭62-290469號(hào)公報(bào) 專利文獻(xiàn)2 :日本特開昭54-15476號(hào)公報(bào) 專利文獻(xiàn)3 :日本特開昭61-238834號(hào)公報(bào)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 發(fā)明要解決的問題 本發(fā)明的目的在于，提供具有血小板的活化抑制性能、高的血小板回收性能和高的血 漿除去性能的用于制造人工保存液置換血小板溶液的新方法。
[0008] 用于解決問題的方法 本申請(qǐng)發(fā)明人等進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，利用以往的透析治療、分離性輸血 (apheresis)療法用途的分離膜時(shí)，制造人工保存液置換血小板溶液是非常困難的。作為其 原因，可列舉出膜的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)不合適。以往的血液凈化用途的膜，是為了從以紅血球、白血 球、血小板、蛋白質(zhì)作為主要成分的全血除去尿素等低分子量物質(zhì)和一部分蛋白質(zhì)而制作 的。因此，不能除去分子量大的蛋白質(zhì)。
[0009]另外，若為了除去大量蛋白質(zhì)而與本來(lái)的使用條件相比將過(guò)濾量提高則會(huì)在中途 變得不能過(guò)濾。這是由于，在膜內(nèi)部，蛋白質(zhì)堵塞，在膜表面，形成血小板卷入蛋白質(zhì)而成的 堆積層（濾餅），由此過(guò)濾受到阻礙。
[0010] 形成堵塞、濾餅的原因在于，膜表面的孔小、分子量大的蛋白質(zhì)未穿過(guò)膜而停留于 膜表面、膜內(nèi)部，以及過(guò)濾的流量設(shè)計(jì)不合適使得血小板大量堆積于膜表面。另外，若過(guò)濾 受到阻礙則發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)的除去量的減少、血小板損失的增加、活化血小板的增加。
[0011] 如此，本申請(qǐng)發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)，需要使用符合血小板溶液、分離目的的結(jié)構(gòu)的分離膜 來(lái)設(shè)定分離條件。但是，用于除去血小板溶液中含有的蛋白質(zhì)的膜設(shè)計(jì)和分離條件迄今沒 有研究。因此，進(jìn)一步反復(fù)深入研究，成功發(fā)現(xiàn)能夠在不活化血小板的情形下實(shí)現(xiàn)高的血小 板回收性能和高的血漿除去性能的分離條件，從而完成了本發(fā)明。
[0012]S卩，本發(fā)明提供一種人工保存液置換血小板溶液的制造方法，其具備：在下述式1 所示的條件下，使用與血小板溶液接觸的面的平均孔徑為0. 1ym以上且不足2. 0ym的分 離膜，以25~1500s1的入口壁面剪切速率對(duì)前述血小板溶液進(jìn)行錯(cuò)流過(guò)濾，得到濃縮血小 板溶液的過(guò)濾步驟；和將前述濃縮血小板溶液與人工保存液混合、得到人工保存液置換血 小板溶液的混合步驟， 1.0X10n〈(AXBV(yXyP)彡 2.5X1013(fAhr.m2.Pa))式1A:血小板溶液中所含的血小板濃度（個(gè)/mL，其中，8. 0X107~200X10 7個(gè)/mL) B:單位面積的過(guò)濾流量（mL/hr/m2)y:入口壁面剪切速率（s4 yP:血小板溶液的粘度（Pa_s)。
[0013] 另外，本發(fā)明提供一種人工保存液置換血小板溶液的制造方法，其具備：在下述式 1所示的條件下，使用與血小板溶液接觸的面的平均孔徑為〇. 1ym以上且不足2. 0ym的 分離膜，以25~1500s1的入口壁面剪切速率對(duì)前述血小板溶液進(jìn)行錯(cuò)流過(guò)濾，得到濃縮血 小板溶液的過(guò)濾步驟；使人工保存液與前述分離膜接觸，將在前述過(guò)濾步驟中未回收于濃 縮血小板溶液中的血小板回收于前述人工保存液中，得到含血小板的人工保存液的回收步 驟；和將血小板的人工保存液與前述濃縮血小板溶液混合、由此得到人工保存液置換血小 板溶液的混合步驟， 1.0X10n〈(AXBV(yXyP)彡 2.5X1013(fAhr.m2.Pa))式1A:血小板溶液中所含的血小板濃度（個(gè)/mL，其中，8. 0X107~200X10 7個(gè)/mL) B:單位面積的過(guò)濾流量（mL/hr/m2)y:入口壁面剪切速率（s4 yP:血小板溶液的粘度（Pa_s)。
[0014] 通過(guò)上述制造方法得到的人工保存液置換血小板溶液，優(yōu)選蛋白質(zhì)除去率（原來(lái) 的血小板溶液中的蛋白質(zhì)濃度作為100)為60%以上且人工保存液置換血小板溶液的CD62P 陽(yáng)性血小板比率為60%以下，更優(yōu)選蛋白質(zhì)除去率為65%以上且人工保存液置換血小板溶 液的⑶62P陽(yáng)性血小板比率為40%以下。在此，⑶62P陽(yáng)性血小板比率越高則表示血小板 越活化。
[0015] 另外，上述過(guò)濾步驟中的膜間壓力差優(yōu)選為5.0X103Pa以下，上述分離膜的透水 性能優(yōu)選為35~150mL/hr/m2/Pa。
[0016] 進(jìn)而，上述分離膜優(yōu)選為中空纖維膜，上述錯(cuò)流過(guò)濾優(yōu)選為內(nèi)壓式錯(cuò)流過(guò)濾，上述 中空纖維膜的內(nèi)徑優(yōu)選為100~500ym，上述中空纖維膜的有效長(zhǎng)度優(yōu)選為5~50cm，上 述分離膜包含親水性聚合物，對(duì)于前述分離膜的與血小板溶液接觸的面、以90°測(cè)定角度 通過(guò)X射線電子分光法測(cè)定而得到的前述親水性聚合物存在量?jī)?yōu)選為30~60質(zhì)量％。
[0017] 進(jìn)而，本發(fā)明提供一種濃縮血小板溶液的制造方法，其具備：在下述式1所示的條 件下，使用與血小板溶液接觸的面的平均孔徑為〇. 1ym以上且不足2. 0ym的分離膜，以 25~1500s1的入口壁面剪切速率對(duì)前述血小板溶液進(jìn)行錯(cuò)流過(guò)濾，得到濃縮血小板溶液 的過(guò)濾步驟， 1.0X10n〈(AXBV(yXyP)彡 2.5X1013(fAhr.m2.Pa))式1A:血小板溶液中所含的血小板濃度（個(gè)/mL，其中，8. 0X107~200X10 7個(gè)/mL) B:單位面積的過(guò)濾流量（mL/hr/m2)y:入口壁面剪切速率（s4 yP:血小板溶液的粘度（Pa_s)。
[0018] 發(fā)明的效果 根據(jù)本發(fā)明的人工保存液置換血小板溶液的制造方法，即使并非全血、而是血小板制 劑等容易聚集的血小板溶液，也可以抑制血小板的活化的同時(shí)實(shí)現(xiàn)高的血小板回收率和高 的蛋白質(zhì)除去率，可以制造品質(zhì)良好的人工保存液置換血小板溶液。
【附圖說(shuō)明】
[0019] 圖1的A)為實(shí)施例中使用的中空纖維膜的內(nèi)表面（血液接觸面）的10000倍的 掃描型電子顯微鏡圖像的一例。圖1的B)為將實(shí)施例中使用的中空纖維膜的內(nèi)表面（血 液接觸面）的10000倍的掃描型電子顯微鏡圖像填充（fill)并且二值化而得到的圖像的 一例。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 本發(fā)明中，"血小板溶液"指的是在含有血漿的介質(zhì)中分散有血小板和蛋白質(zhì)的、 實(shí)質(zhì)上不含有紅血球和白血球的液體。介質(zhì)典型地說(shuō)為血漿，但是人工保存液等緩沖液 也可以作為介質(zhì)的一部分含有。本發(fā)明中使用的血小板溶液的血小板濃度為8. 0X107~ 200X107個(gè)/mL。血小板溶液可以如下得到：通過(guò)將全血離心分離后、通入白血球除去過(guò)濾 器等的方法，除去紅血球和白血球，由此得到上述血小板溶液。通常作為血小板制劑已知的 制劑，為將經(jīng)過(guò)濃縮的血小板分散于血漿中而成的制劑，若血小板濃度處于上述范圍內(nèi)則 可以直接作為"血小板溶液"供于本發(fā)明的方法?；蛘?，本發(fā)明中，也可以使用血小板制劑 中含有的血漿的一部分被人工保存液置換而成的血小板溶液、預(yù)先混合人工保存液進(jìn)行稀 釋而成的血小板溶液來(lái)作為血小板溶液。需要說(shuō)明的是，血漿如該領(lǐng)域中周知那樣，指的是 由全血通過(guò)離心分離等手法除去紅血球、白血球、血小板而殘留的成分，主要成分為蛋白質(zhì) 和水分。
[0021] 本發(fā)明中，"人工保存液"指的是能夠作為分散血小板的介質(zhì)使用的人工的（非天 然的）溶液。用于血小板的人工保存液是公知的，作為具體例，可列舉出PASIII-M、M-S〇l、 生理鹽水、匕'力本4卜（注冊(cè)商標(biāo)）等通常作為輸液使用的溶液、進(jìn)而A⑶-A液等含有檸檬 酸的溶液。但是不限于它們，若為具有適于血小板的保存的性能的溶液，即與血小板接觸 時(shí)、不會(huì)造成聚集塊的產(chǎn)生、滲透壓等所導(dǎo)致的血小板的破壞的溶液，則任意溶液都能夠用 作本發(fā)明中的"人工保存液"。
[0022] "人工保存液置換血小板溶液"指的是血小板溶液的介質(zhì)的大部分被人工保存液 置換而成的溶液。主要是作為血漿的介質(zhì)被置換為人工保存液，由此血小板溶液中的蛋白 質(zhì)質(zhì)量大幅降低。根據(jù)上述人工保存液置換血小板溶液的制造方法，可以得到防止血小板 的活化的同時(shí)如愿以償?shù)爻チ说鞍踪|(zhì)的人工保存液置換血小板溶液。另外，上述人工保 存液置換血小板溶液的制造方法中，優(yōu)選蛋白質(zhì)除去率為60%以上并且人工保存液置換血 小板溶液的⑶62P陽(yáng)性血小板比率為60%以下，更優(yōu)選蛋白質(zhì)除去率為65%以上并且人工 保存液置換血小板溶液的⑶62P陽(yáng)性血小板比率為40%以下。在此，⑶62P陽(yáng)性血小板比率 越高則表示血小板越活化。⑶62P陽(yáng)性血小板比率為60%以上時(shí)，血小板聚集，血小板機(jī)能 容易降低，因此不活化的制造方法是重要的。另外，若CD62P陽(yáng)性血小板比率過(guò)低則血小板 的聚集機(jī)能有可能受損，因此人工保存液置換血小板溶液中的CD62P陽(yáng)性血小板比率優(yōu)選 為1%以上，進(jìn)一步優(yōu)選為3%以上。另外，原來(lái)的血小板溶液的⑶62P陽(yáng)性血小板比率為1 時(shí)的人工保存液置換血小板溶液的⑶62P血小板比率的增加比為3. 0以下，優(yōu)選為2. 0以 下，進(jìn)一步優(yōu)選為1.5以下。
[0023]本發(fā)明的人工保存液置換血小板溶液的制造方法中，使用與血小板溶液接觸的膜 表面的平均孔徑為0. 1iim以上且不足2. 0iim的分離膜，在下述式1所示的條件下，使得入 口壁面剪切速率為25~1500s15W血小板溶液進(jìn)行錯(cuò)流過(guò)濾。通過(guò)在這種條件下濃縮血小 板溶液，可以抑制血小板的活化的同時(shí)以高的效率達(dá)成蛋白質(zhì)的除去。 1.0X10n〈(AXBV(yXyP)<2.5X1013(fAhr.m 2.Pa))----SlA:血小板溶液中所含的血小板濃度[個(gè)/mL] (其中，8.0X107~200X10 7f/mL) B:單位面積的過(guò)濾流量[mL/hr/m2]y:入口壁面剪切速率[s1 yP:血小板溶液的粘度[Pa_s]。
[0024]通過(guò)過(guò)濾血小板溶液、制作除去血漿的血小板溶液時(shí)的最大問題在于，蛋白質(zhì)和 血小板堵塞膜。膜表面的平均孔徑為〇. 1ym以上且不足2. 0ym的情況下，堵塞的原因在 于，血小板堆積于表面、形成還卷入有蛋白質(zhì)的堆積層。將該堆積層稱為濾餅。若形成濾餅 則血漿的除去效率降低。進(jìn)