高純度巖黃連生物堿的生產方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及植物藥的制備，具體涉及巖黃連，更具體是一種高純度巖黃連生物堿的生產方法。
【背景技術】
[0002]巖黃連(學名:Corydalis saxicola Bunting)別稱:巖胡、巖連、菊花黃連、土黃連、石生黃堇，屬罌粟目罌粟科，多年生草本植物，生于山地林緣巖石隙縫中，在我國南方多有分布，主要分布在分布于甘肅、湖北、廣西、四川、貴州、云南等地，而廣西多見于桂西及桂西北等地，以東蘭、巴馬、都安、靖西、德保較多。巖黃連是廣西特色壯藥【藍日春，樊立勇，韋作干.164種特色壯藥的分類及來源[J].中國民族醫(yī)藥雜志，2011，17 (12)，36-40】，巖黃連在黔桂兩省特別是桂西北地區(qū)有著比較悠久的應用歷史，屬于民間特效藥，具有清熱解毒、治療肝炎等多重療效。
[0003]巖黃連根或全草均可入藥，全草含小檗堿，消旋卡文定堿，去氫卡文定堿，消旋巖黃連堿，左旋-13 β羥基金罌粟堿，右旋四氫掌葉防己堿，左旋四氫非洲防己堿，原阿片堿，斯氏紫堇堿，白屈菜紅堿等生物堿。
[0004]巖黃連性味苦、寒，涼。歸經:入胃、肝經、大腸經。功用:清熱解毒、利濕、安定、散瘀消腫，止痛止血、具有抗炎、利膽、抗病毒、殺菌、鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛、增強免疫功能、抗腫瘤的作用、巖黃連對甲、乙、丙型肝炎病毒均存在不同程度的抑制和殺滅作用，并且能快速產生抗體，同時能夠有效穩(wěn)定肝臟細胞膜、線粒體膜，并且還能促進肝細胞再生，起到保肝護肝的作用。
[0005]以巖黃連為原料提取純化的巖黃連生物堿已被制成巖黃連注射液，臨床主要應用于:1)治療肝硬化、肝癌；2)治療肝炎；也用于治療高膽紅素血癥。
[0006]巖黃連藥物的開發(fā)應用極大地促進了以巖黃連為原料提取純化制備高純度巖黃連生物堿的發(fā)展。CN 102600247 B公開了巖黃連生物堿提取物及制備方法，在原材料的預處理中，用纖維素酶配合果膠酶對藥材進行酶水解，用兩次層析法提取出總生物堿，含量達95%以上，使用的溶劑只有乙醇。然而該方法所得的生物堿的純度還不高，不足以保證藥品的使用安全性。
【發(fā)明內容】
[0007]為了確保藥品的使用安全性，滿足制藥要求，為巖黃連藥物的開發(fā)提供質量可靠的原料藥，本發(fā)明公開一種高純度巖黃連生物堿的生產方法。
[0008]本發(fā)明采取以下方法實現(xiàn)上述目的。
[0009]高純度巖黃連生物堿的生產方法，主要包括下述步驟:
[0010]I)藥材干燥粉碎:將巖黃連干燥后粉碎；所述巖黃連為全草。
[0011]2)酶解:粉碎后的藥材加入到酶解池中，加水，再加入由纖維素酶和果膠酶組成的復合酶，在溫度35?65°C，pH4?6.5條件下酶解2?72h，得到酶解混合物；所述的酶解混合物就是酶解后酶解池中的全部物料；
[0012]3)提取濃縮:以體積濃度50?90 %乙醇為提取溶劑，對酶解混合物提取三次，每次提取溶劑用量為酶解混合物重量的3?10倍，合并提取液，濃縮至含藥材折算量2?10g/l ;所述的含干燥藥材折算量為:最開始投入的干燥藥材重量與濃縮得到的液體體積之比；如果最開始投入干燥藥材一噸，到這一步驟濃縮至500L，則結果為2g/l。
[0013]4)分離:濃縮液放置4?8小時后離心處理，收集沉淀物。
[0014]5)離子交換樹脂處理:離心沉淀物用稀酸溶解，用酸性陽離子交換樹脂吸附，先水洗至無色，再用體積濃度70%?80%、pH7.5?10的堿性乙醇溶液的洗脫液進行解析，收集解吸后的溶液，調到中性，除去乙醇后過濾得到粗總生物堿。
[0015]6)純化:溶解粗總生物堿，先用截留值10000?50000的超濾膜過濾，再用截留值1000?3000的膜過濾，得到提純物；
[0016]7)干燥、包裝。
[0017]上述方法還包括下述的選擇或改進。
[0018]在步驟2)，溫度為35?40°C，pH為4?6，酶解4?24h，纖維素酶和果膠酶的比例為1: 0.1?3，復合酶的用量為0.1%?1%，加水量為干燥藥材重量的I?5倍。
[0019]更進一步，在步驟2)，溫度為40°C，pH為4.5，酶解6h，纖維素酶和果膠酶的比例為1: 0.5，復合酶的用量為0.25%?0.45%，加水量為干燥藥材重量的3倍。
[0020]特別地，本發(fā)明中的上述步驟3)改變?yōu)?將上一批物料的第3次提取液用作為下一批物料的第I次提取溶劑，且只合并前兩次提取液送入濃縮。
[0021]作為優(yōu)選，在步驟3)，提取溶劑為75%乙醇，每次提取時間為I?4小時，提取液濃縮至含干燥藥材折算量2g/l。
[0022]在步驟4)，濃縮液放置時，對濃縮液進行降溫處理。
[0023]作為優(yōu)選，降溫處理包括循環(huán)水冷卻。
[0024]在步驟5)，酸性陽離子交換樹脂包括D-113、D-151、D-072、110或001 X 7，稀酸為
I?10%重量濃度的稀鹽酸、稀硫酸或稀硝酸。
[0025]在步驟6)，溶解采用水和/或乙醇，優(yōu)選采用乙醇；同樣作為優(yōu)選，先用截留值10000的超濾膜過濾，除去大分子雜質，再用截留值1000的膜過濾除去小分子。
[0026]作為優(yōu)選，在步驟7)，干燥采用真空干燥，溫度不超過60°C。
[0027]本發(fā)明相對于已有技術，其積極效果如下:
[0028]—、優(yōu)化復合酶解技術:操作簡便、易行，對設備要求不高，酶解條件溫和，降低了隨后的溶劑提取難度，使整個提取工藝條件溫和化，有助于保持藥效成分的原有性質并顯著提高藥效成分的提取率。
[0029]二、離子交換樹脂處理:吸附與解吸的效果好，總生物堿的洗脫率達到96%以上；生物堿損失少，回收率均在90%以上，并且本方法所用溶劑毒性小，純化步驟少，對環(huán)境污染小，樹脂可再生重復利用。
[0030]三、兩級膜分離純化技術:可以得到的巖黃連生物堿提取物產品純度達到多98%以上，使產品更適于制備巖黃連注射液。
[0031]四、溶劑套提技術:將上一批物料的第3次提取液用作為下一批物料的第I次提取溶劑，可以有效節(jié)省提取溶媒，節(jié)約20%以上；節(jié)省熱能10%，減少濃縮溶媒量20%左右；提取率多95%。
[0032]該方法可以獲得總生物堿含量大于98%的巖黃連生物堿，完全滿足制藥要求。產品經檢測，巖黃連生物堿含量98.6%，重金屬、農殘、微生物均符合國標GB/T5009、4789標準。
【具體實施方式】
[0033]實施例1
[0034]I)將巖黃連干燥后粉碎；
[0035]2)然后投料到酶解池，加干燥藥材重量的3倍的水，再加入由纖維素酶和果膠酶組成的復合酶，復合酶中纖維素酶和果膠酶的比例為1: 0.5，復合酶的用量為0.45%，在溫度40 °C，pH4.5條件下酶解6h，得到酶解混合物；
[0036]3)以體積濃度75%乙醇為提取溶劑，對酶解混合物提取三次，時間分別為2、1.5、I小時，各次提取溶劑用量分別為酶解混合物重量的6、5、4倍，合并前兩次提取液，回收乙醇至無乙醇味，并濃縮至含干燥藥材