Creg蛋白用于預(yù)防或治療心肌梗死的醫(yī)藥用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及 E1A 激活基因阻遏子（Cellular Repressor of ElA-stimulated Genes，CREG)的醫(yī)藥用途，具體涉及CREG蛋白或其活性片段用于制備預(yù)防或治療心肌梗死 的藥物的用途。本發(fā)明還涉及CREG蛋白或其活性片段用于制備預(yù)防和/或治療心肌梗死 后心室重構(gòu)、心肌梗死后心力衰竭的藥物的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 冠心病（Coronary Heart Disease, CHD)是嚴(yán)重威脅人類健康和生命的重大疾病 之一，其主要表現(xiàn)形式一急性心肌梗死（Acute Myocardial Infarction, AMI)和梗死后心 力衰竭是導(dǎo)致CHD患者死亡的重要原因。2013年發(fā)布的《中國(guó)心血管病研究報(bào)告》指出，中 國(guó)每年新發(fā)AMI至少50萬(wàn)人，現(xiàn)患心肌梗死約有250萬(wàn)人。AMI的高發(fā)病率、高致殘率和高 死亡率已成為我國(guó)重大公共衛(wèi)生問題。
[0003] AMI發(fā)生時(shí)的心肌缺血是引起心肌損傷、壞死的主要原因。心肌缺血數(shù)秒內(nèi)，心肌 細(xì)胞膜通透性增加，細(xì)胞內(nèi)超微結(jié)構(gòu)改變，細(xì)胞器腫脹、水腫、胞質(zhì)外泄等，最終導(dǎo)致心肌細(xì) 胞死亡。心肌細(xì)胞為終末分化細(xì)胞，缺乏增殖及分化能力。因此，死亡心肌細(xì)胞不能由其 他心肌細(xì)胞分化補(bǔ)充，只能由心肌間質(zhì)的成纖維細(xì)胞填充，使心室逐步發(fā)生重構(gòu)，最終引起 AMI患者發(fā)生心力衰竭和死亡。目前，AMI的治療手段主要包括藥物溶栓、冠狀動(dòng)脈介入治 療、冠狀動(dòng)脈旁路手術(shù)等，雖然這些手段可在一定程度上緩解患者心肌缺血的癥狀，但是難 以對(duì)抗AMI后的心肌細(xì)胞損傷及心力衰竭。因此，尋找對(duì)抗心肌細(xì)胞損傷的藥物，從根本上 抑制AMI后心力衰竭，在AMI治療和改善其愈后中具有重要意義。
[0004] CREG基因是1998年美國(guó)哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院Gill等從子宮頸內(nèi)膜癌Hela細(xì)胞cDNA 文庫(kù)中克隆的一個(gè)細(xì)胞分化調(diào)控基因（Veal E, Mol Cell Biol, 1998 ;18(9):5032-5041)。 CREG蛋白是一種小分子量的分泌型糖蛋白，在成熟組織細(xì)胞中廣泛表達(dá)，具有維持組織和 細(xì)胞成熟分化的功能。CREG蛋白主要定位于細(xì)胞核周的高爾基體和溶酶體中，參與溶酶 體酶的轉(zhuǎn)運(yùn)和細(xì)胞外因子的內(nèi)吞（Schahs P，Exp Cell Res，2008,314(16):3036-3047; Kowalewski-Nimmerfall E, Biochim Biophys Acta, 2014, 1843 (12) : 2900-2912)。并且，已 有大量研究表明CREG蛋白參與多種心血管系統(tǒng)疾病的發(fā)生與進(jìn)展。但是，CREG蛋白對(duì)AMI 后心肌細(xì)胞損傷及心力衰竭的作用及機(jī)制尚不清楚。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的發(fā)明人通過大量實(shí)驗(yàn)，令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，小鼠AMI后心肌組織中CREG蛋 白表達(dá)水平明顯下降，CREG雜合子（CREG +/)小鼠AMI后死亡率明顯增加，心功能指標(biāo)左室 射血分?jǐn)?shù)（Ejection Fraction, EF% )和左室短軸縮短率（shortening fraction，F(xiàn)S% ) 均明顯降低，并且心肌纖維化程度加重，心室重構(gòu)更明顯，向發(fā)生AMI后的小鼠外源性補(bǔ)充 CREG蛋白能明顯改善AMI后的心功能，EF%和FS%值顯著增加，并且心肌纖維化程度減輕， 心室重構(gòu)現(xiàn)象改善，表明外源性補(bǔ)充CREG蛋白可用于預(yù)防或治療AMI以及AMI后的心力衰 竭及心室重構(gòu)，本發(fā)明基于以上發(fā)現(xiàn)而完成。
[0006] 本發(fā)明第一方面涉及CREG蛋白或其活性片段在制備藥物中的用途，所述藥物用 于選自以下幾項(xiàng)中的一項(xiàng)或多項(xiàng)：
[0007] 1)預(yù)防和/或治療急性心肌梗死；
[0008] 2)預(yù)防和/或治療急性心肌梗死后心力衰竭；
[0009] 3)預(yù)防和/或治療急性心肌梗死后心室重構(gòu)；
[0010] 4)改善急性心肌梗死后的心功能。
[0011] 本發(fā)明還涉及編碼CREG蛋白或其活性片段的核酸分子、表達(dá)CREG蛋白或其活性 片段的重組載體或重組細(xì)胞在制備藥物中的用途，所述藥物用于選自以下幾項(xiàng)中的一項(xiàng)或 多項(xiàng)：
[0012] 1)預(yù)防和/或治療急性心肌梗死；
[0013] 2)預(yù)防和/或治療急性心肌梗死后心力衰竭；
[0014] 3)預(yù)防和/或治療急性心肌梗死后心室重構(gòu)；
[0015] 4)改善急性心肌梗死后的心功能。
[0016] 在本發(fā)明的實(shí)施方案中，所述重組載體含有編碼CREG蛋白或其活性片段的核酸 分子。
[0017] 本發(fā)明還涉及能夠抑制CREG蛋白或其活性片段表達(dá)下調(diào)或促進(jìn)CREG蛋白或其 活性片段表達(dá)上調(diào)的試劑在制備藥物中的用途，所述藥物用于選自以下幾項(xiàng)中的一項(xiàng)或多 項(xiàng)：
[0018]1)預(yù)防和/或治療急性心肌梗死；
[0019] 2)預(yù)防和/或治療急性心肌梗死后心力衰竭；
[0020] 3)預(yù)防和/或治療急性心肌梗死后心室重構(gòu)；
[0021] 4)改善急性心肌梗死后的心功能。
[0022] 本發(fā)明還涉及檢測(cè)CREG蛋白或其活性片段表達(dá)水平的試劑在制備試劑盒中的用 途，所述試劑盒用于選自以下幾項(xiàng)中的一項(xiàng)或多項(xiàng)：
[0023]1)急性心肌梗死的診斷和/或患病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估；
[0024] 2)急性心肌梗死后心力衰竭的診斷和/或患病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估；
[0025] 3)急性心肌梗死后心室重構(gòu)的診斷和/或患病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估；
[0026] 4)急性心肌梗死后心功能的預(yù)測(cè)和/或評(píng)估。
[0027] 本發(fā)明還涉及CREG蛋白或其活性片段用于篩選預(yù)防和/或治療急性心肌梗死、急 性心肌梗死后心力衰竭和/或急性心肌梗死后心室重構(gòu)的藥物的用途。
[0028] 在本發(fā)明的實(shí)施方案中，CREG蛋白或其活性片段可以作為靶蛋白用于篩選預(yù)防和 /或治療急性心肌梗死、急性心肌梗死后心力衰竭和/或急性心肌梗死后心室重構(gòu)的藥物； 例如能夠抑制CREG蛋白或其活性片段表達(dá)下調(diào)和/或促進(jìn)CREG蛋白或其活性片段表達(dá)上 調(diào)的試劑可以作為預(yù)防和/或治療急性心肌梗死、急性心肌梗死后心力衰竭和/或急性心 肌梗死后心室重構(gòu)的藥物。
[0029] 本發(fā)明還涉及組合物，其含有CREG蛋白或其活性片段、編碼CREG蛋白或其活性片 段的核酸分子、表達(dá)CREG蛋白或其活性片段的重組載體或重組細(xì)胞、或者能夠抑制CREG蛋 白或其活性片段表達(dá)下調(diào)的試劑，以及任選的藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑，所述組合物 用于選自以下幾項(xiàng)中的一項(xiàng)或多項(xiàng)：
[0030] 1)預(yù)防和/或治療急性心肌梗死；
[0031] 2)預(yù)防和/或治療急性心肌梗死后心力衰竭；
[0032] 3)預(yù)防和/或治療急性心肌梗死后心室重構(gòu)；
[0033] 4)改善急性心肌梗死后的心功能。
[0034] 本發(fā)明還涉及試劑盒，其含有檢測(cè)CREG蛋白或其活性片段表達(dá)水平的試劑，所述 試劑盒用于選自以下幾項(xiàng)中的一項(xiàng)或多項(xiàng)：
[0035] 1)急性心肌梗死的診斷和/或患病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估；
[0036] 2)急性心肌梗死后心力衰竭的診斷和/或患病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估；
[0037] 3)急性心肌梗死后心室重構(gòu)的診斷和/或患病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估；
[0038] 4)急性心肌梗死后心功能的預(yù)測(cè)和/或評(píng)估。
[0039] 在本發(fā)明中，所述CREG蛋白為重組CREG蛋白，來(lái)源于哺乳動(dòng)物，特別是來(lái)源于人。 在本發(fā)明的實(shí)施方案中，所述CREG蛋白的GenBank號(hào)為NP_003842. 1。在本發(fā)明的實(shí)施方 案中，所述CREG基因的GenBank號(hào)為NM_003851. 2〇
[0040] 在本發(fā)明中，所述CREG蛋白的活性片段是指具有CREG蛋白功能的片段，其可以 為CREG蛋白的一部分，也可以為CREG蛋白的氨基酸序列經(jīng)過缺失、添加或替換后得到的片 段；制備或得到CREG蛋白活性片段的方法為本領(lǐng)域所公知，例如該活性片段為包含CREG蛋 白與配體或受體結(jié)合的部分的片段，或者經(jīng)過氨基酸的缺失、添加或替換后仍保留CREG蛋 白功能的片段。本領(lǐng)域技術(shù)人員公知，CREG蛋白上有一些關(guān)鍵的氨基酸和活性密切相關(guān)， 突變后會(huì)影響蛋白的活性，例如，CREG蛋白第136及137位賴氨酸突變?yōu)楸彼幔蛘逤REG 蛋白第141-144位氨基酸缺失突變后，都會(huì)影響蛋白的活性和功能（Sacher M，PNAS，2005; 102 (51) : 18326-18331)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)需要避開上述這些可能影響活性的位 點(diǎn)，對(duì)其它位點(diǎn)進(jìn)行缺失、添加或替換等改造，使得改造后的CREG蛋白仍具有CREG蛋白的 活性或功能。
[0041] 在本發(fā)明的實(shí)施方案中，所述CREG蛋白或其活性片段為糖基化蛋白或非糖基化 蛋白。
[0042] 在本發(fā)明中，所述糖基化CREG蛋白是指CREG蛋白的第160、193和216位氨基酸 存在糖基化修飾。
[0043] 在本發(fā)明中，所述非糖基化CREG蛋白是指CREG蛋白的氨基酸位點(diǎn)沒有糖基化修 飾。
[0044] 本領(lǐng)域技術(shù)人員公知，蛋白在真核細(xì)胞（例如酵母細(xì)胞、哺乳動(dòng)物細(xì)胞）中表達(dá)時(shí) 可能發(fā)生糖基化修飾，在原核細(xì)胞中表達(dá)時(shí)通常不會(huì)發(fā)生糖基化修飾。糖基化CREG蛋白和 非糖基化CREG