一種透明質(zhì)酸修飾的磁性中空介孔硫化銅的藥物組合物及其制備方法與應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥，特別是一種透明質(zhì)酸修飾的磁性中空介孔硫化銅的藥物組合物及其制備方法與應用。
【背景技術】
[0002]手術與放射治療、化學藥物治療是腫瘤治療的三大常用手段。然而，手術僅能切除肉眼可見的瘤體，對不可見的亞臨床病灶卻難以清除；傳統(tǒng)化療往往存在靶向性差和劑量限制毒性的問題；光熱治療是一種繼手術、放化療之后出現(xiàn)的新型治療方法。光熱治療技術是利用光熱轉(zhuǎn)換材料把近紅外光的能量轉(zhuǎn)化為熱能的一種微創(chuàng)技術，光熱療法在對癌癥的治療中可以實現(xiàn)局部升溫進而殺傷癌細胞，而對正常的細胞沒有損壞，是一種更加安全、高效的腫瘤治療手段。
[0003]作為一種半導體晶體材料，硫化銅納米粒子具有很強的近紅外吸收和較高的光熱轉(zhuǎn)換效率。與其他貴金屬納米材料相比，其在紅外區(qū)域的吸收波長受環(huán)境和尺寸的影響較小。另外最新報道發(fā)現(xiàn)硫化銅納米粒在近紅外光下可以產(chǎn)生活性氧(包括單線態(tài)氧、超氧負離子等)。這些活性氧為高度反應性的，可以表現(xiàn)出明顯的細胞毒性。硫化銅對生物體的毒性較小，能夠被生物體所降解，是一種比較安全的材料，因而其在腫瘤的光熱治療方面受到廣泛關注。
[0004]功能化的磁性中空介孔硫化銅內(nèi)部的孔洞結(jié)構使其擁有超高的藥物負荷量。其粒徑小，物理化學性質(zhì)穩(wěn)定，具有優(yōu)良的磁靶向性，通過在其表面修飾上水溶性基團如透明質(zhì)酸，可以顯著改善磁性中空介孔硫化銅在體內(nèi)的生物相容性和流動性，有利于在外加磁場的條件下將藥物直接轉(zhuǎn)運至病灶。由于四氧化三鐵在該載體中還兼具堵孔的作用，因此在交變磁場作用下發(fā)生旋轉(zhuǎn)和振動進而變形使孔洞打開，從而在磁場調(diào)控下達到藥物控釋的效果。
[0005]將化療藥物負載到具有光熱效應的納米載體內(nèi)，通過EPR效應靶向傳輸?shù)侥[瘤部位，從而進一步提高治療效果，減小對正常組織和細胞的毒副作用。該載體及其藥物組合物的合成方法簡單，并將硫化銅顯著的光熱效應、四氧化三鐵的磁靶向性及其在磁場作用下對藥物的控釋、透明質(zhì)酸良好的生物相容性等有機的整合于一體，加之可以物理負載具有抗腫瘤活性的化療藥物，與傳統(tǒng)化法相比具有高效、可控的優(yōu)勢，并且其光熱治療與化療技術的結(jié)合更體現(xiàn)癌癥綜合治療的理念。因此，研究一種靶向的合并光熱治療和化療于同一納米平臺的治療制劑具有重要的意義和價值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對上述情況，為克服現(xiàn)有技術之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種透明質(zhì)酸修飾的磁性中空介孔硫化銅的藥物組合物及其制備方法與應用，可有效解決生物相容性好、磁靶向性強、毒副作用小，以提高腫瘤治療效果的問題。
[0007]本發(fā)明解決的技術方案是，在中空介孔硫化銅納米粒子與巰基乙胺反應得到的氨基化的硫化銅上負載抗腫瘤藥物，硫化銅表面靜電吸附上四氧化三鐵納米粒，經(jīng)酰胺鍵反應在表面修飾上透明質(zhì)酸，成透明質(zhì)酸修飾的磁性中空介孔硫化銅的藥物組合物；所述的四氧化三鐵和硫化銅的質(zhì)量含量比為1~8: 1，磁性中空介孔硫化銅的粒徑為50~300nm，由以下步驟實現(xiàn):
(1)、將0.7-0.8g的CuSO4.5H20溶解于180_220ml水中，攪拌，加入5_7g聚乙烯吡咯烷酮，反應10~20min，加入1.1-1.3g氫氧化鈉，攪拌均勻，再滴加ll_13ml水合肼，攪拌5~10min，加入 1.2-1.4ml 硫酸銨，攪拌 lh，用超純水 12000-15000rpm (即 12000-15000r/min)離心5-10min水洗至中性，冷凍干燥48h，得中空介孔硫化銅納米顆粒；
(2)、將中空介孔硫化銅納米粒90-110mg超聲分散于90-110ml超純水中，超聲10~30min，攪拌下加入180_220mg巰基乙胺，攪拌24h，12000-15000rpm離心5_10min得沉淀，沉淀加超純水復溶，再在12000-1500()rpm離心5_10min得沉淀，沉淀加超純水復溶，如此重復2~3遍，直至為中性，冷凍干燥，得氨基化中空介孔硫化銅復合物(CuS-NH2);
(3)、合成四氧化三鐵納米粒:取0.8-0.9 g FeCljP 2.3-2.4 g FeCl 3攪拌下溶解于35-45ml水中，氮氣保護下加熱至80°C，緩慢滴加4_6ml氨水，油浴攪拌30min，加入質(zhì)量濃度0.5g.ml 1的檸檬酸1.8-2.2ml，升溫至95°C，反應90min，攪拌下冷卻至室溫，透析除去未反應物質(zhì)，冷凍干燥，即得水溶性四氧化三鐵納米粒；
(4)、取將步驟(2)得到的氨基化中空介孔硫化銅復合物(CuS-NH2)4.5-5.5mg，分散于PH7-9的磷酸鹽緩沖液4.5-5.5ml中，冰浴下超聲10~30 min，與含有抗腫瘤藥物的磷酸鹽緩沖液混合，每3ml磷酸鹽緩沖液中含有9g抗腫瘤藥物，室溫攪拌24h，離心用水洗滌3次，探頭超聲分散于水中，冷凍干燥即得負載抗腫瘤藥物的氨基化硫化銅；
(5)、將負載抗腫瘤藥物的氨基化硫化銅分散于18-22ml水中，攪拌下加入四氧化三鐵納米粒，室溫攪拌6-48h，12000-15000rpm離心5_10min得沉淀，冷凍干燥，即得負載抗腫瘤藥物的磁性中空介孔硫化銅；
(6)、將上述負載藥物的磁性中空介孔硫化銅超聲分散于18-22ml水中，加入用水溶液的透明質(zhì)酸180-220mg，攪拌反應6_48h，即成透明質(zhì)酸修飾的磁性中空介孔硫化銅的藥物組合物。
[0008]本發(fā)明操作方便，方法穩(wěn)定可靠，所制得的硫化銅及其藥物組合物具有生物相容性好、磁靶向性強、毒副作用小等優(yōu)點，在腫瘤治療方面可發(fā)揮熱療、腫瘤診斷、磁場緩控釋藥等作用，是腫瘤治療藥物上的創(chuàng)新，經(jīng)濟和社會效益巨大。
【具體實施方式】
[0009]以下結(jié)合具體情況和實施例對本發(fā)明的【具體實施方式】作詳細說明。
[0010]實施例1
本發(fā)明在具體實施中，該透明質(zhì)酸修飾的磁性中空介孔硫化銅的藥物組合物的制備方法由以下方法實現(xiàn):
(1)、將0.75g的CuSO4.5H20溶解于200ml水中，攪拌，加入6.0g聚乙烯吡咯烷酮，反應10~20min，加入1.2g氫氧化鈉，攪拌均勻后，用注射器滴加12ml水合肼，攪拌5~10min，最后加入1.29ml硫酸錢，攪拌lh，用超純水15000rpm離心5_10min水洗至中性，冷凍干燥48h，得到中空介孔硫化銅納米顆粒；
(2)、將中空介孔硫化銅納米粒10mg探頭超聲分散于10ml超純水中，超聲10~30min，攪拌條件下加入200mg巰基乙胺，攪拌24h，15000rpm離心5_10min得沉淀，加超純水復溶，再離心，如此重復2~3遍，直至為中性，冷凍干燥，得到氨基化中空介孔硫化銅復合物(CuS-NH2)；
(3)、合成四氧化三鐵納米粒:取0.86 g FeCljP 2.35 g FeCl 3攪拌下溶解于40ml水中，氮氣保護下加熱至80°C，用注射器緩慢滴加5ml氨水，油浴攪拌30min，之后加入質(zhì)量濃度0.5g.ml 1的梓檬酸2ml，升溫至95°C，反應90min，攪拌下冷卻至室溫，透析除去未反應物質(zhì)，冷凍干燥，即得水溶性四氧化三鐵納米粒；
(4)、取氨基化中空介孔硫化銅復合物5mg，分散于5ml磷酸鹽緩沖液中，冰浴下探頭超聲10~30 min,與含有抗腫瘤藥物的磷酸鹽緩沖液混合，每3ml磷酸鹽緩沖液中含有9g抗腫瘤藥物，室溫攪拌24h，15000rpm離心5_10min用水洗滌3次，探頭超聲分散于水中，冷凍干燥即得負載抗腫瘤藥物的氨基化硫化銅；
(5)、將負載抗腫瘤藥物的氨基化硫化銅分散于20ml水中，攪拌條件下加入分散于水中的四氧化三鐵，室溫攪拌24h，離心得沉淀，冷凍干燥，即得負載抗腫瘤藥物的磁性中空介孔硫化銅；
(6)、將負載藥物的磁性中空介孔硫化銅探頭超聲分散于20ml水中，加入200mg透明質(zhì)酸水溶液，攪拌反應24h，即得透明質(zhì)酸修飾的磁性中空介孔硫化銅的藥物組合物。
[0011]實施例2
本發(fā)明在具體實施中，該透明質(zhì)酸修飾的磁性中空介孔硫化銅的藥物組合物的制備方法由以下方法實現(xiàn):
(1)、將0.7g的CuSO4.5H20溶解于180ml水中，攪拌，加入5g聚乙烯吡咯烷酮，反應10~20min，加入1.1g氫氧化鈉，攪拌均勾，再滴加Ilml水合肼，攪拌5~10min，加入1.2ml硫酸銨，攪拌lh，用超純水12000rpm離心1min水洗至中性，冷凍干燥48h，得中空介孔硫化銅納米顆粒；
(2)、將中空介孔硫化銅納米粒90mg超聲分散于90ml超純水中，超聲10~30min，攪拌下加入180mg巰基乙胺，攪拌24h，12000rpm離心1min得沉淀，沉淀加超純水復溶，再在12000rpm離心1min得沉淀，沉淀加超純水復溶，如此重復2~3遍，直至為中性，冷凍干燥，得氨基化中空介孔硫化銅復合物(CuS-NH2);
(3)、合成四氧化三鐵納米粒:取0.8 g FeCljP 2.3 g FeCl 3攪拌下溶解于35ml水中，氮氣保護下加熱至80°C，緩慢滴加4-6ml氨水，油浴攪拌30min，加入質(zhì)量濃度0.5g.ml 1的檸檬酸1.8ml，升溫至95°C，反應90min，攪拌下冷卻至室溫，透