用于預(yù)防或治療神經(jīng)精神疾病或衰老中的認(rèn)知功能障礙和情緒紊亂的低聚半乳糖組合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及用于預(yù)防或治療發(fā)生在人的神經(jīng)精神疾病或障礙中的或者衰老中的 認(rèn)知功能障礙和/或情緒紊亂的包含低聚半乳糖（G0S)混合物的組合物。還涉及通過向個 體口服施用有效量的包含低聚半乳糖混合物的組合物來預(yù)防或治療發(fā)生在神經(jīng)精神疾病 或障礙中的或者衰老中的認(rèn)知功能障礙和/或情緒紊亂的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 疾病的預(yù)防是指藥物組合物的能力，或者是指治療不僅預(yù)防疾病發(fā)生如風(fēng)險(xiǎn)因子 減低、而且還阻滯其進(jìn)展并減少其一旦建立的后果（Ref:adapted from Glossary of Terms used in Health for All Series. WHO, Geneva, 1984)〇
[0003] -級預(yù)防針對的是防止最初的發(fā)病，而二級和三級預(yù)防力圖阻滯或妨礙現(xiàn)有的疾 病并減少復(fù)發(fā)的出現(xiàn)和慢性疾病的建立。
[0004] 認(rèn)知功能障礙是指智力功能的損失，如思考、記憶和推理，嚴(yán)重程度足以干擾個體 的日?；顒?。這可見于衰老和癡呆患者，特別見于患有阿爾茨海默病的人群。認(rèn)知功能的 損傷可影響思考、集中、構(gòu)思、推理和記憶的能力。
[0005] 神經(jīng)精神疾病或障礙是指引起精神癥狀的生物體腦疾病或神經(jīng)系統(tǒng)疾病。它們包 括常見于老年患者的焦慮癥和抑郁癥。
[0006] Gryan, J F 和 Dinan, T G 的綜述（Nature Review/Neuroscience ：13：701~712 ； (2012))中記載了對無菌動物和暴露于病原菌感染、益生菌或抗生素藥物的動物的研究是 如何表明腸道菌群對調(diào)節(jié)焦慮、情緒、認(rèn)知和疼痛起作用的。
[0007] 益生菌定義為如果攝取則可為宿主賦予健康益處的活菌。
[0008] Bravo, J A等人論證了益生菌鼠李糖乳桿菌（Lactobacillus rhamnosus)被小 鼠攝取時的抗抑郁和抗焦慮樣特性（參見Proc Nath Acad Sci USA ;108;16050-16055; (2011))〇
[0009] Burnet, P W J建議，使用選擇性抗菌劑和益生元（prebiotics)來增加腸道固有的 乳桿菌和雙歧桿菌的菌株的進(jìn)一步研究可對動物和人的行為和神經(jīng)生理輸出起作用（參 見 Proc. Natl. Acad. Sci. USA ;E175 ; (2012))。
[0010] 益生元被定義為不易消化的食品成分，通過選擇性刺激結(jié)腸中的一種或有限數(shù)量 的細(xì)菌的生長和/或活性而有利地影響宿主，從而使宿主的健康得到改善。低聚半乳糖 (G0S)和低聚果糖（F0S)為抵抗哺乳動物胃腸消化酶、并由特殊的結(jié)腸細(xì)菌發(fā)酵的益生元 的實(shí)例。
[0011] 現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，向哺乳動物如人口服施用包含低聚半乳糖的混合物的組合物可導(dǎo)致與 位于胃腸道的神經(jīng)元的直接相互作用，反過來可導(dǎo)致N-甲基-D-天冬氨酸受體（NMDARs) 水平的意料之外的增長。具體地，在腦的皮質(zhì)和海馬部中均發(fā)現(xiàn)了 NMDAR NRI蛋白和/或 mRNA的水平升高，以及在海馬中發(fā)現(xiàn)了 NMDAR NR2A蛋白。這表明包含此類混合物的組合物 可有益于預(yù)防或治療發(fā)生在神經(jīng)精神疾病或障礙中的或者衰老中的認(rèn)知功能障礙和/或 情緒紊亂。
[0012] 還發(fā)現(xiàn)口服施用G0S組合物降低了皮質(zhì)醇的分泌。由于皮質(zhì)醇響應(yīng)應(yīng)激而釋放， 因此這表明該組合物可減少作為焦慮癥和抑郁癥癥狀的皮質(zhì)醇過度分泌。
[0013] 該低聚半乳糖的混合物含有二糖（Gal 0 1-3)-Glc ;Gal (0 1-3)-Gal ; Gal(01-6)-Gal;Gal(al-6)-Gal;三糖 Gal(01-6)-Gal(01-4)-Glc; Gal ( 0 1-3) -Gal ( 0 1-4) -Glc ;四糖 Gal ( 0 1-6) -Gal ( 0 1-6) -Gal ( 0 1-4) -Glc 和五糖 Gal ( 0 1-6)-Gal (0 1-6)-Gal (0 1-6)-Gal (0 1-4)-Glc。
[0014] 該低聚半乳糖的混合物公開于EP 1 644 482,記載了能夠產(chǎn)生半乳糖苷酶活性的 雙歧雙岐桿菌（Bifidobacterium bifidum)的新菌株，該酶活性將乳糖轉(zhuǎn)化為該低聚半乳 糖的新混合物。該新混合物已顯示出在腸道中具有益生元和抗炎性質(zhì)。
[0015] 該低聚半乳糖的混合物以名稱Bimuno (注冊商標(biāo)）商業(yè)銷售，并且可從Clasado Ltd (Milton Keynes, UK)獲得。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0016] 根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供一種包含如上所述的低聚半乳糖的混合物的組合 物，其用于預(yù)防或治療發(fā)生在神經(jīng)精神疾病或障礙中的或者衰老中的認(rèn)知功能障礙和/或 情緒紊亂。
[0017] 根據(jù)本發(fā)明的第二方面，提供如上所述的低聚半乳糖的混合物在制備用于預(yù)防或 治療發(fā)生在神經(jīng)精神疾病或障礙中的或者衰老中的認(rèn)知功能障礙和/或情緒紊亂的藥物 中的用途。
[0018] 認(rèn)知功能障礙可為由衰老、癡呆或精神分裂癥引起的認(rèn)知減退或損傷。神經(jīng)精神 疾病可為抑郁癥或焦慮癥。焦慮癥覆蓋了一類常見精神疾病的幾種不同形式，常見的精神 疾病的特征在于，基于真實(shí)或想象的事件對未來的不確定性的過度迷思（rumination)、擔(dān) 憂、不安、憂慮和恐懼，這可能影響生理和心理健康。
[0019] 還根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供一種預(yù)防或治療發(fā)生在神經(jīng)精神疾病或障礙中的 或者衰老中的認(rèn)知功能障礙和/或情緒紊亂的方法，所述方法包括向個體如人施用有效量 的包含如上所述的低聚半乳糖的混合物的組合物。有效量的低聚半乳糖組合物優(yōu)選每日以 單劑量施用或可選地以間隔幾小時如間隔4至12小時、優(yōu)選間隔6至10小時、最優(yōu)選間隔 8小時的兩次分開劑量施用。
[0020] 優(yōu)選地，低聚半乳糖的混合物的組合物每日以凍干的粉劑、片劑、膠囊劑、液體制 劑如糖漿劑或軟錠劑的形式口服施用。
[0021] 已知為Bimuno的產(chǎn)品包含至少49%的干物質(zhì)作為低聚半乳糖混合物。組合物的 其余部分可包含非活性組分例如葡萄糖、半乳糖、乳糖、阿拉伯膠、麥芽糖糊精和檸檬酸。
[0022] 粉劑組合物優(yōu)選在1. 65g至20g的粉劑組合物中包含1. 35g至9. 6g的低聚半乳 糖，優(yōu)選在2. 5g至10g的粉劑中包含1. 96g至4. 9g的低聚半乳糖，最優(yōu)選在3. 0g至5. 5g 的粉劑中包含2. 7g至2. 75g的低聚半乳糖?？蓪⒔M合物添加到飲料（優(yōu)選熱飲）中，或者 灑在食品上（例如灑在早餐谷類食品上）。組合物還可作為成分添加到各種食品和飲料中， 例如果汁、果汁飲料、7K、咖啡、酸奶、谷類食品、面包、蛋糕和餅干等。
[0023] 可選地，可以以糖漿劑或錠劑（脫水糖漿劑）提供低聚半乳糖，其中非活性組分可 包含葡萄糖、半乳糖、乳糖和檸檬酸。糖漿劑的日劑量可為在2. lg至25. 29g的糖漿劑組合 物中包含1. 35g至9. 6g的低聚半乳糖，優(yōu)選在3. 0g至12. 9g的糖衆(zhòng)劑中包含1. 96g至4. 9g 的低聚半乳糖，最優(yōu)選在4. lg至7. 25g的糖衆(zhòng)劑中包含2. 7g至2. 75g的低聚半乳糖。
[0024] 本發(fā)明的低聚半乳糖組合物具有抗焦慮性、減少下丘腦_垂體軸的活性（應(yīng)激激 素分泌）并減少腦中的炎癥反應(yīng)。因此，Bimuno G0S可有益于焦慮癥（如擔(dān)心、失眠），抑 郁癥，由細(xì)菌腦膜炎、單純性皰疹腦炎引起的或發(fā)生在阿爾茨海默病中的腦部炎癥的治療 或預(yù)防。Bimuno G0S還可改善衰老、癡呆和精神分裂癥的認(rèn)知損傷。此外，G0S組合物可有 益于母體感染對發(fā)育中的胎兒腦的有害影響。
[0025] 將參考下列實(shí)施例和附圖進(jìn)一步描述本發(fā)明。
【附圖說明】
[0026] 圖1A示出大鼠額葉皮質(zhì)和海馬提取物中F0S和G0S對BDNF蛋白水平的作用。
[0027] 圖1B示出大鼠額葉皮質(zhì)和海馬提取物中F0S和G0S對NRI亞單位（subunit)水 平的作用。示出蛋白提取物中NRI和肌動蛋白免疫反應(yīng)性的免疫印跡圖像。
[0028] 圖2A示出大鼠額葉皮質(zhì)和海馬提取物中F0S和G0S對NR2A亞單位水平的作用。 示出蛋白提取物中NR2A亞單位和0 -肌動蛋白免疫反應(yīng)性的免疫印跡圖像。
[0029] 圖2B示出大鼠額葉皮質(zhì)和海馬提取物中F0S和G0S對NR2B亞單位水平的作用。 示出蛋白提取物中NR2B和0 -肌動蛋白免疫反應(yīng)性的免疫印跡圖像。
[0030] 圖3A至3D為口服施用水（A, B)、F0S(C，D)或G0S(E，F(xiàn))之后大鼠海馬中BDNF(A、 C、E)和NRI亞單位（B、D、F)mRNA表達(dá)的代表性自動放射照片。箭頭描繪了表達(dá)增加，箭頭 的頭（arrow head)表示降低的表達(dá)。DG =齒狀回，CA1和CA3 =海馬的阿蒙氏角（cornu ammons)分區(qū)（subfield)。比例尺=200 y M0
[0031] 圖4A至4D示出齒狀回（DG)以及海馬的CA1和CA3(阿蒙氏角）分區(qū)中F0S和 G0S 對 BDNF、NRI、NR2A 和 NR2B mRNA 水平的作用。
[0032] 圖5示出攝取F0S (A組）、G0S (C組）和安慰劑（B組）之后對健康成人的皮質(zhì)醇 分泌的作用。
[0033] 圖6A示出脂多糖（LPS)注射后對喂水小鼠的運(yùn)動（locomotor)活動的作用。
[0034] 圖6B示出G0S如何摧毀LPS對運(yùn)動活動的作用。
[0035] 圖7示出如埋珠試驗(yàn)（marble burying test)所示，對LPS處理后的小鼠的自然 挖掘和掩埋行為的作用。
[0036] 圖8示出對LPS處理后對小鼠焦慮行為的作用。延遲（A)=從暗部（應(yīng)激少）向 亮部（應(yīng)激多）區(qū)移動所花費(fèi)的時間。延遲越長=應(yīng)激越多/探究行為越少。光下時間 (B)=在亮區(qū)花費(fèi)的時間。時間越長=焦慮越少。
[0037] 圖9示出LPS注射24后小時對小鼠額葉皮質(zhì)中細(xì)胞因子水平的作用。
[0038] 圖10示出LPS注射24后小時對小鼠血漿中細(xì)胞因子水平的作用。
[0039] 圖11示出BG0S對健康大鼠認(rèn)知表現(xiàn)的作用。
【具體實(shí)施方式】
[0040]實(shí)施例1
[0041] 將凍干粉劑組合物包裝在'粘貼包（stick-pack) '中并且每5. 5g成品包含：
[0042]
[0043]
[0044]實(shí)施例2
[0045]每7. 25g成品糖漿劑組合物包含：
[0046]
[0047]實(shí)施例3
[0048] 供給益牛元對中樞腦源件神經(jīng)營養(yǎng)閔子（BDNF)和N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA) 夸體亞單位的作用的體內(nèi)研究。
[0049] 材料和方法
[0050] 益生元施用
[0051] 所有大鼠實(shí)驗(yàn)根據(jù)英國內(nèi)政部準(zhǔn)則（