測(cè)的強(qiáng)陰離子 交換色譜（SAX-PAD)、液相色譜（IX)、高效液相色譜（HPLC)、超高效液相色譜（UPLC)、薄 層色譜（TLC)、酰胺柱色譜、以及它們的組合。示例性質(zhì)譜（MS)包括但不限于：串聯(lián)MS、 LC-MS、LC-MS/MS、基質(zhì)輔助激光解吸電離質(zhì)譜（MALDI-MS)、傅里葉變換質(zhì)譜（FTMS)、離子 迀移率分離質(zhì)譜（H1S-MS)、電子轉(zhuǎn)移解離（ETD-MS)、以及它們的組合。示例性電泳法包括 但不限于：毛細(xì)管電泳法（CE)、CE-MS、凝膠電泳法、瓊脂糖凝膠電泳法、丙烯酰胺凝膠電泳 法、先SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法（SDS-PAGE)后蛋白質(zhì)印跡法（使用識(shí)別特異性聚糖結(jié) 構(gòu)的抗體）、以及它們的組合。示例性核磁共振（NMR)包括但不限于：一維NMR(ID-NMR)、 二維NMR(2D-NMR)、相關(guān)譜磁性角自旋NMR(C0SY-NMR)、全相關(guān)光譜NMR(T0CSY-NMR)、異 核單量子相干NMR(HSQC-NMR)、異核多級(jí)量子相干（HMQC-NMR)、旋轉(zhuǎn)核歐沃豪斯效應(yīng)譜 NMR(ROESY-NMR)、核歐沃豪斯效應(yīng)譜（N0ESY-NMR)、以及它們的組合。 在一些情況下，在此所述的技術(shù)可以與用于檢測(cè)、分析和/或分離聚糖或糖蛋白的一 種或多種其他技術(shù)組合。例如，在某些情況下，根據(jù)本披露使用一種或多種可用的方法來 分析聚糖（僅給出一些實(shí)例，參見阿努姆拉（Anumula)，分析生物化學(xué)（Anal.Biochem.)， 350(1):1，2006;克萊因（Klein)等人，分析生物化學(xué)，179:162，1989;和/或湯森德 (Townsend)，"R.R?碳水化合物分析（R.R.CarbohydrateAnalysis)"高效液相色譜和毛細(xì) 管電泳（HighPerformanceLiquidChromatographyandCapillaryElectrophoresis.), Z.El拉西（Z.ElRassi)編輯，第 181 頁至第 209 頁，1995 ;W0 2008/128216 ;W0 2008/128220；WO2008/128218；WO2008/130926；WO2008/128225；WO2008/130924；WO 2008/128221；WO2008/128228；WO2008/128227；WO2008/128230；WO2008/128219；WO 2008/128222;WO2010/071817;WO2010/071824;WO2010/085251;WO2011/069056;以及 TO2011/127322,這些文獻(xiàn)中的每一個(gè)通過引用以其全部?jī)?nèi)容結(jié)合在此）。例如，在一些情 況下，使用色譜法、電泳法、核磁共振法、以及它們的組合中的一種或多種對(duì)聚糖進(jìn)行表征。 在一些實(shí)施例中，通過用一種熒光染料標(biāo)記并且測(cè)量熒光水平來分析聚糖。 在一些情況下，用于評(píng)價(jià)例如一種糖蛋白制劑中的一個(gè)或多個(gè)靶蛋白特異性參數(shù)例如 在此披露的一個(gè)或多個(gè)參數(shù)的方法可以通過表1中所列方法中的一種或多種來進(jìn)行。 表1 :評(píng)價(jià)參數(shù)的示例性方法：

上文引用的文獻(xiàn)通過引用以其全部?jī)?nèi)容結(jié)合在此，或者，在替代方案中，它們的結(jié)合程 度為它們涉及用于確定在此所述的參數(shù)的方法中的一種或多種。 藥物組合物和給藥 在此所述的一種糖蛋白可以并入（例如，配制）到一種藥物組合物中。這種藥物組合 物可用作用于預(yù)防和/或治療與一種相應(yīng)的參考糖蛋白相關(guān)的一種或多種疾病的一種替 代的和/或改進(jìn)的組合物。包含一種糖蛋白的藥物組合物可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的 方法來配制。該藥物組合物能夠以可注射配制品形式腸胃外給予，該可注射配制品包含在 水中或在另一種藥學(xué)上可接受的液體中的一種無菌溶液或懸浮液。例如，該藥物組合物可 以通過適當(dāng)?shù)貙⒃撎堑鞍着c藥學(xué)上可接受的媒介物或介質(zhì)組合，如無菌水和生理鹽水、植 物油、乳化劑、懸浮劑、表面活性劑、穩(wěn)定劑、調(diào)味賦形劑、稀釋劑、媒介物、防腐劑、粘合劑， 隨后在通?？山邮艿尼t(yī)學(xué)實(shí)踐所需的單位劑型中混合而進(jìn)行配制。藥物制劑中包括的活性 成分的量是提供在指定范圍中的這種適合的劑量。 一種用于注射的無菌組合物可以根據(jù)常規(guī)藥學(xué)實(shí)踐使用用于注射的蒸餾水作為一種 媒介物來配制。例如，生理鹽水或含有葡萄糖和其他補(bǔ)體如D-山梨糖醇、D-甘露糖、D-甘 露醇以及氯化鈉的等滲溶液可以用作用于注射的一種水溶液，任選地結(jié)合一種適合的增溶 劑，例如醇如乙醇和多元醇如丙二醇或聚乙二醇；以及一種非離子表面活性劑如聚山梨酯 80?、HC0-50 等等。 油狀液體的非限制性實(shí)例包括芝麻油和大豆油，并且該油狀液體可以與作為一種增 溶劑的苯甲酸芐酯或苯甲醇結(jié)合?？梢园ǖ钠渌锲肥且环N緩沖液如磷酸緩沖液、或乙 酸鈉緩沖液，一種安撫劑如普魯卡因鹽酸鹽，一種穩(wěn)定劑如苯甲醇或苯酚，以及一種抗氧化 劑。一種配制注射液可以被包裝在一個(gè)適合的安瓿瓶中。 在一些情況下，在此所述的一種或多種聚糖的水平可以與一個(gè)預(yù)先確定的水平（例 如，一個(gè)參考標(biāo)準(zhǔn)中的一個(gè)相應(yīng)水平）進(jìn)行比較，例如，以作出與該多肽制劑的組合物有關(guān) 的決定，例如，作出分類、選擇、接受或丟棄、釋放或留存、加工成一種藥物產(chǎn)品、以船運(yùn)送、 移動(dòng)到一個(gè)不同的位置、配制、貼標(biāo)簽、包裝、準(zhǔn)予進(jìn)入貿(mào)易、或銷售或許諾銷售該多肽（例 如，一種重組抗體）的決定。在其他情況下，該決定可以是接受、修改或拒絕用來制備該多 肽（例如，一種抗體）的一個(gè)或多個(gè)生產(chǎn)參數(shù)。具體而言，參考標(biāo)準(zhǔn)的非限制性實(shí)例包括一 個(gè)對(duì)照水平（例如，由一種不同的方法產(chǎn)生的一種多肽）或者在產(chǎn)品說明書中的一個(gè)范圍 或值（例如，F(xiàn)DA標(biāo)簽或醫(yī)囑）或者用于含有該多肽制劑的一種藥物制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 在一些情況下，方法（即，評(píng)價(jià)、鑒別以及生產(chǎn)方法）包括采取行動(dòng)（例如，身體活動(dòng)） 對(duì)在此披露的方法進(jìn)行響應(yīng)。例如，一種多肽制劑根據(jù)預(yù)選擇的值或目標(biāo)值是否達(dá)到而被 分類、選擇、接受或丟棄、釋放或留存、加工成一種藥物產(chǎn)品、以船運(yùn)送、移動(dòng)到一個(gè)不同的 位置、配制、貼標(biāo)簽、包裝、準(zhǔn)予進(jìn)入貿(mào)易、或銷售或許諾銷售。在一些情況下，加工可以包括 將該多肽制劑的至少一部分進(jìn)行配制（例如，與藥物賦形劑組合）、包裝（例如，以注射器或 小瓶包裝）、貼標(biāo)簽、或以船運(yùn)送。在一些情況下，加工包括將作為在此所述的一種藥物產(chǎn)品 的制劑的至少一部分進(jìn)行配制（例如，與藥物賦形劑組合）、包裝（例如，以注射器或小瓶包 裝）、以及貼標(biāo)簽。加工可以包括指導(dǎo)和/或聯(lián)系另一方按照在此所述進(jìn)行加工。 在一些情況下，評(píng)定一種多肽制劑（例如，一種抗體制劑）的生物活性。該制劑的生 物活性可以通過任何已知方法來分析。在一些實(shí)施例中，評(píng)定一種多肽的結(jié)合活性（例 如，結(jié)合至一個(gè)受體）。在一些實(shí)施例中，評(píng)定一種多肽的治療活性（例如，在減少疾病或 病狀的嚴(yán)重性或癥狀方面的一種多肽的活性，或者在延遲疾病或病狀的癥狀的出現(xiàn)方面 的一種多肽的活性）。在一些實(shí)施例中，評(píng)定一種多肽的藥理學(xué)活性（例如，生物利用率、 藥物代謝動(dòng)力學(xué)、藥效動(dòng)力學(xué)）。分析糖蛋白治療劑的生物利用率、藥物代謝動(dòng)力學(xué)以及 藥效動(dòng)力學(xué)的方法可參見例如，韋納（Weiner)等人，生物醫(yī)學(xué)藥物分析雜志（J.Pharm. 13：[〇1116(1.厶11&1.)15(5):571-9，1997;斯里尼瓦桑（31'；[11；[￥&8)等人，藥物科學(xué)雜志（工？11&；?!. Sci.)85(l) : 1-4,1996 ;以及斯里尼瓦桑等人，藥物研究（Pharm.Res.) 14(7) :911-6,1997。 可以測(cè)試的特定的生物活性或治療活性將根據(jù)特定多肽（例如，抗體）而變化?？梢?通過任何可用的方法來分析多肽制劑的潛在的不利活性或毒性（例如，導(dǎo)致高血壓、過敏 反應(yīng)、血栓形成事件、癲癇，或其他不良事件的傾向）。在一些實(shí)施例中，一種多肽制劑的免 疫原性例如通過確定該制劑在受試者體內(nèi)是否引發(fā)一個(gè)抗體反應(yīng)來評(píng)定。 給藥途徑可以是腸胃外的，例如，通過注射給藥、經(jīng)鼻給藥、經(jīng)肺給藥或經(jīng)皮給藥。給藥 可以是全身或局部進(jìn)行靜脈內(nèi)注射、肌內(nèi)注射、腹腔內(nèi)注射、皮下注射的。 一種適合的給藥方式可以根據(jù)患者的年齡和病狀來選擇。含有一種修飾的糖蛋白的單 一劑量的藥物組合物可以從〇. 001至l〇〇〇mg/kg的體重的范圍選擇。另一方面，一種劑量 可以在0. 001至lOOOOOmg/體重的范圍內(nèi)選擇，但是本披露并不限于此類范圍。給藥的劑 量和方法根據(jù)患者的體重、年齡、病狀等等而變化，并且可以適當(dāng)?shù)赜杀绢I(lǐng)域技術(shù)人員按需 選擇。 所有出版物、專利申請(qǐng)、專利以及在此提及的其他參考文獻(xiàn)都通過引用以其全部?jī)?nèi)容 結(jié)合。此外，材料、方法和實(shí)例僅是說明性的而并不意圖具有限制性。除非另外定義，在此所 用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常所理解的相同的含義。 雖然在本發(fā)明的實(shí)踐或測(cè)試中可以使用與在此所述的那些相似或等效的方法和材料，但是 在此描述了適合的方法和材料。 本披露通過以下實(shí)例進(jìn)行進(jìn)一步說明。僅僅提供了用于說明性目的實(shí)例。不應(yīng)解釋為 以任何方式限制本披露的范圍或內(nèi)容。 實(shí)例 DMS0對(duì)糖基化的影響 方法 分析了DMS0對(duì)由CH0細(xì)胞產(chǎn)生的一種模型抗體的抗體糖形的影響。CH0細(xì)胞最初在 含有大豆水解物、LonzaPowerFeedA以及另外的補(bǔ)體的基礎(chǔ)培養(yǎng)基（PowerCH02,目錄號(hào) #BE15_771，龍沙有限公司（LonzaInc.)，艾倫代爾，新澤西）中生長。在第3天，用Lonza PowerFeedA和大豆水解物喂養(yǎng)這些細(xì)胞。在第6天，用LonzaPowerFeedA培養(yǎng)基和具 有2.5%DMS0(最終濃度）或不具有DMS0的另外的補(bǔ)體喂養(yǎng)這些細(xì)胞。當(dāng)葡萄糖濃度下降 到2g/L以下時(shí)，用2g/L的葡萄糖喂養(yǎng)細(xì)胞。在第10天、第12天或第14天收獲細(xì)胞，并且 評(píng)價(jià)所產(chǎn)生的抗體的滴度和聚糖組成。 對(duì)使用N-糖酰胺酶F從抗體酶促釋放并且用熒光團(tuán)2-氨基苯甲酰胺標(biāo)記的聚糖進(jìn)行 每種糖形的相對(duì)量化。相對(duì)數(shù)量是基于相關(guān)物質(zhì)的熒光強(qiáng)度對(duì)比色譜圖中的總熒光強(qiáng)度。 在相同保留時(shí)間洗脫出來的所有糖形被一起考慮。 結(jié)果 培養(yǎng)基中DMS0的存在或缺乏對(duì)滴度或最大VCD的影響最小。在DMS0存在下的細(xì)胞生 長具有8. 0X106個(gè)細(xì)胞/mL的平均最大VCD，以及1. 02g/L的滴度，而在DMS0不存在下的 細(xì)胞生長具有8. 1X106個(gè)細(xì)胞/mL的平均最大V⑶以及0. 92g/L的滴度。 如圖2A中所示，在DMS0存在下生長的抗體的G0F的水平降低（在第14天降低約7 % )。 出人意料的是，如圖2B中所示，DMSO的存在僅略微影響到G1F和G2F的水平（影響約1% 或更?。?。這指示DMS0的存在并未通過改變半乳糖基化水平來改變G0F/G1F/G2F分布。相 反，這一發(fā)現(xiàn)表明G0F已轉(zhuǎn)移到其他物質(zhì)。3, 3, 1，0, 0聚糖（結(jié)構(gòu)示出于圖6 ;數(shù)據(jù)未示出） 中觀察到了伴隨增加。由于3, 3, 1，0, 0通過GnTII會(huì)轉(zhuǎn)化為G0F，在無意受限于理論的情況 下，DMS0可以至少部分地通過由GnTII改變3, 3, 1，0, 0到G0F的轉(zhuǎn)化來起作用。另外，如 圖2A中所示，DMS0的存在對(duì)G0F水平具有短時(shí)間的影響，該G0F水平在第10天、第12天 和第14天出現(xiàn)下降。 圖3A和圖3B中示出了DMS0對(duì)高甘露糖聚糖的影響。如圖3A中所示，與無DMS0相比 較，DMS0提高了高甘露糖聚糖的總水平。另外，DMS0引起高甘露糖6聚糖、高甘露糖3聚糖 以及高甘露糖5聚糖的水平的提高（參見圖3B)。 DMS0還影響巖藻糖基化聚糖的水平，導(dǎo)致巖藻糖基化聚糖水平的降低（圖4A)，以及 巖藻糖基化聚糖水平的提高（圖4B)。另外，DMS0導(dǎo)致唾液酸化聚糖的提高（圖5A)，以及 3, 5, 1，1，0唾液酸化聚糖（圖5B;結(jié)構(gòu)示出于圖6)水平的明確提高。 這個(gè)實(shí)例證實(shí)在DMS0中培養(yǎng)細(xì)胞可以用來產(chǎn)生由細(xì)胞表達(dá)的具有特定聚糖水平的多 肽。 等效物 應(yīng)理解，雖然已經(jīng)結(jié)合其詳細(xì)說明描述了本披露，但上述說明意圖說明而不是限制本 發(fā)明的由隨附權(quán)利要求書的范圍限定的范圍。其他方面、優(yōu)點(diǎn)和修改屬于以下權(quán)利要求書 的范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種產(chǎn)生具有目標(biāo)值的高甘露糖聚糖和巖藻糖基化聚糖中的一種或多種的重組蛋 白制劑的方法，該方法包括： (a) 提供基因工程化來表達(dá)一種重組蛋白的一種細(xì)胞； (b) 在包含DMSO的一種培養(yǎng)基中，在該細(xì)胞表達(dá)該重組蛋白的條件下培養(yǎng)該細(xì)胞；并 且 (c) 收獲由該細(xì)胞產(chǎn)生的該重組蛋白的一種制劑，其中該制劑具有該目標(biāo)值的高甘露 糖聚糖和巖藻糖基化聚糖中的一種或多種。2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中該重組蛋白是一種重組治療性蛋白。3. 如權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的方法，其中該重組蛋白是一種重組治療性抗體。4. 如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其中該目標(biāo)值是一種參考治療性產(chǎn)品中的高 甘露糖聚糖和巖藻糖基化聚糖中的一種或多種的一個(gè)水平。5. 如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其中該目標(biāo)值是一種參考治療性抗體產(chǎn)品中 的高甘露糖聚糖和巖藻糖基化聚糖中的一種或多種的一個(gè)水平。6. 如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的方法，其中該目標(biāo)值是一個(gè)預(yù)先確定的藥物產(chǎn)品規(guī) 格。7. 如權(quán)利要求4所述的方法，其中該參考治療性產(chǎn)品選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成： 阿巴西普、阿昔單抗、阿達(dá)木單抗、阿柏西普、阿法賽特、阿侖單抗、巴利昔單抗、貝伐單抗、 貝拉西普、賽妥珠單抗、西妥昔單抗、達(dá)利珠單抗、依庫珠單抗、依法珠單抗、依那西普、吉姆 單抗、替依莫單抗、英利昔單抗、莫羅單抗-CD3、那他珠單抗、奧馬佐單抗、帕利珠單抗；帕 木單抗、雷珠單抗、利洛西普、利妥昔單抗、托西莫單抗、以及群司珠單抗。8. 如權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的方法，進(jìn)一步包括評(píng)價(jià)該重組蛋白制劑中的高甘露 糖聚糖和巖藻糖基化聚糖中的一種或多種的水平。9. 如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的方法，其中該目標(biāo)值是以下各項(xiàng)中的一個(gè)或多個(gè)： (a) 0. 1 %至20%的高甘露糖聚糖，以及 (b) 70 %至100 %的巖藻糖基化聚糖。10. 如權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的方法，其中高甘露糖聚糖和巖藻糖基化聚糖中的 一種或多種的目標(biāo)值高于通過在不包含DMSO的培養(yǎng)基中培養(yǎng)該細(xì)胞產(chǎn)生的一種制劑中的 一個(gè)相應(yīng)水平。11. 如權(quán)利要求10所述的方法，其中該目標(biāo)值比該相應(yīng)水平高該相應(yīng)水平的至少 10%〇12. 如權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述的方法，其中該培養(yǎng)基包含0. 5%至5%的DMS0。13. 如權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的方法，其中該培養(yǎng)基進(jìn)一步包括葡糖胺、賴氨酸、 銨、銅、腐胺、葡萄糖、生長因子、維生素、脂質(zhì)、以及胨中的一種或多種。14. 一種產(chǎn)生重組蛋白制劑的方法，該方法包括： (a) 提供一個(gè)目標(biāo)值的高甘露糖聚糖和巖藻糖基化聚糖中的一種或多種； (b) 提供基因工程化來表達(dá)一種重組蛋白的一種細(xì)胞； (c) 在包含DMSO的一種培養(yǎng)基中，在該細(xì)胞表達(dá)該重組蛋白的條件下培養(yǎng)該細(xì)胞； (d) 收獲由該細(xì)胞產(chǎn)生的該重組蛋白的一種制劑；并且 (e) 如果該制劑滿足高甘露糖聚糖和巖藻糖基化聚糖中的一種或多種的目標(biāo)值，將該 制劑處理成一種藥物產(chǎn)品。15. 如權(quán)利要求14所述的方法，進(jìn)一步包括評(píng)價(jià)該重組蛋白制劑中的高甘露糖聚糖和 巖藻糖基化聚糖中的一種或多種的水平。16. 如權(quán)利要求14或權(quán)利要求15所述的方法，其中該培養(yǎng)基進(jìn)一步包括葡糖胺、賴氨 酸、銨、銅、腐胺、葡萄糖、生長因子、維生素、脂質(zhì)、以及胨中的一種或多種。17. -種提高重組蛋白制劑中的高甘露糖聚糖、唾液酸化聚糖以及3, 3, 1，0, O聚糖中 的一種或多種的水平的方法，該方法包括： (a) 提供基因工程化來表達(dá)一種重組蛋白的一種細(xì)胞； (b) 在包含DMSO的一種培養(yǎng)基中，在該細(xì)胞表達(dá)該重組蛋白的條件下培養(yǎng)該細(xì)胞；并 且 (c) 收獲由該細(xì)胞產(chǎn)生的該重組蛋白的一種制劑，其中該制劑具有相對(duì)于通過在不包 含DMSO的培養(yǎng)基中培養(yǎng)該細(xì)胞產(chǎn)生的該重組蛋白的一種制劑中的一個(gè)相應(yīng)水平而言提高 的水平的高甘露糖聚糖、唾液酸化聚糖以及3, 3, 1，0, 0聚糖中的一種或多種。18. 如權(quán)利要求17所述的方法，進(jìn)一步包括測(cè)量高甘露糖聚糖、唾液酸化聚糖以及 3, 3, 1，0, 0聚糖中的一種或多種的一個(gè)水平。19. 如權(quán)利要求17或權(quán)利要求18所述的方法，其中高甘露糖聚糖、唾液酸化聚糖以及 3, 3, 1，0, 0聚糖中的一種或多種的該提高的水平比該相應(yīng)水平高該相應(yīng)水平的至少10%。20. 如權(quán)利要求17-19中任一項(xiàng)所述的方法，其中該培養(yǎng)基進(jìn)一步包括葡糖胺、賴氨 酸、銨、銅、腐胺、葡萄糖、生長因子、維生素、脂質(zhì)、以及胨中的一種或多種。21. -種降低重組蛋白制劑中的一種或多種巖藻糖基化聚糖的水平的方法，該方法包 括： (a) 提供基因工程化來表達(dá)一種重組蛋白的一種細(xì)胞； (b) 在包含DMSO的一種培養(yǎng)基中，在該細(xì)胞表達(dá)該重組蛋白的條件下培養(yǎng)該細(xì)胞；并 且 (c) 收獲由該細(xì)胞產(chǎn)生的該重組蛋白的一種制劑，其中該制劑具有相對(duì)于通過在不包 含DMSO的培養(yǎng)基中培養(yǎng)該細(xì)胞產(chǎn)生的該重組蛋白的一種制劑中的一個(gè)相應(yīng)水平而言降低 的水平的一種或多種巖藻糖基化聚糖。22. 如權(quán)利要求21所述的方法，其中該一種或多種巖藻糖基化聚糖包括GOF聚糖。23. 如權(quán)利要求21或權(quán)利要求22所述的方法，進(jìn)一步包括測(cè)量一種或多種巖藻糖基化 聚糖的水平。24. 如權(quán)利要求21-23中任一項(xiàng)所述的方法，其中該一種或多種巖藻糖基化聚糖的該 降低的水平比該相應(yīng)水平低該相應(yīng)水平的至少10%。25. 如權(quán)利要求21-24中任一項(xiàng)所述的方法，其中該培養(yǎng)基進(jìn)一步包括葡糖胺、賴氨 酸、銨、銅、腐胺、葡萄糖、生長因子、維生素、脂質(zhì)、以及胨中的一種或多種。26. 如權(quán)利要求1-25中任一項(xiàng)所述的方法，其中該培養(yǎng)步驟包括一個(gè)第一階段和一個(gè) 第二階段。27. 如權(quán)利要求26所述的方法，其中該第一階段包括在包含一個(gè)第一水平的DMSO的培 養(yǎng)基中培養(yǎng)該細(xì)胞，并且該第二階段包括在包含一個(gè)第二水平的DMSO的培養(yǎng)基中培養(yǎng)該 細(xì)胞。28. 如權(quán)利要求27所述的方法，其中該第一水水平的DMSO是無DMSO,并且該第二水平 的 DMSO 是 1 % 至 5 % 的 DMS0。29. 如權(quán)利要求27所述的方法，其中該第一階段包括在該第一水平的DMSO下將該細(xì)胞 培養(yǎng)1至8天。30. 如權(quán)利要求29所述的方法，其中該第二階段包括在該第二水平的DMSO下將該細(xì)胞 培養(yǎng)1至12天。31. 如權(quán)利要求1-30中任一項(xiàng)所述的方法，其中該細(xì)胞是一種CHO細(xì)胞。32. 如權(quán)利要求1-25中任一項(xiàng)所述的方法，其中該培養(yǎng)基包含0. 5%至1. 5%的DMS0。33. 如權(quán)利要求1-25中任一項(xiàng)所述的方法，其中該培養(yǎng)基包含1 %的DMS0。34. 如權(quán)利要求28所述的方法，其中該第二水平的DMSO是0. 5%至1. 5%的DMS0。35. 如權(quán)利要求28所述的方法，其中該第二水平的DMSO是1 %的DMS0。
【專利摘要】在此描述了具有目標(biāo)水平聚糖的多肽制劑以及使用DMSO產(chǎn)生此類多肽制劑的方法。本發(fā)明總體上涉及細(xì)胞培養(yǎng)方法。治療性多肽是一類重要的治療性生物技術(shù)產(chǎn)品，并且治療性抗體(包括鼠抗體、嵌合抗體、人源化抗體和人抗體以及它們的片段)占據(jù)了治療性生物產(chǎn)品的大多數(shù)。
【IPC分類】A61K39/395
【公開號(hào)】CN105073134
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201480009232
【發(fā)明人】H·普仁泰斯, R·體佳妮, B·畢龍貴
【申請(qǐng)人】動(dòng)量制藥公司
【公開日】2015年11月18日
【申請(qǐng)日】2014年3月12日
【公告號(hào)】US8956830, US20140273057, US20150240281, WO2014150655A1