一種紫杉醇膠束制劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種紫杉醇膠束制劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 紫杉醇分子式為：C47H51NO14，分子量853. 9,熔點(diǎn)213~216°C，具有高度親脂性，不 溶于水，是最先從紅豆杉屬植物中分離得到的一種高效、低毒、廣譜的天然抗癌藥物。它是 紅豆杉屬植物中的一種復(fù)雜的天然次生代謝物，分子結(jié)構(gòu)見下式。
[0003]
[0004] 紫杉醇是一種微管特異性的具有較高抗癌活性的藥物，銷量常年名列抗腫瘤新藥 的榜首，并以20 %的速度遞增。
[0005] 1977年，HorwitZ發(fā)現(xiàn)紫杉醇抗癌機(jī)理在于能夠與微管蛋白結(jié)合，促進(jìn)微管蛋白 聚合裝配成微管二聚體，從而抑制細(xì)胞中微管的正常生理解聚，使細(xì)胞有絲分裂停止在G2 期及M期，阻止了癌細(xì)胞的快速繁殖。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)紫杉醇能夠激活巨噬細(xì)胞，導(dǎo)致腫瘤 壞死因子受體的減少及其釋放，殺傷或抑制腫瘤細(xì)胞；紫杉醇可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，引起細(xì)胞 程序性死亡；紫杉醇還能抑制腫瘤細(xì)胞的遷移。臨床研究表明，紫杉醇具有廣譜而高效的抗 癌活性，對于治療卵巢癌、乳腺癌、子宮癌、胃癌等等療效突出，近來的研究發(fā)現(xiàn)它對類風(fēng)濕 性關(guān)節(jié)炎、老年癡呆癥等亦有一定療效。
[0006] 由于紫杉醇難溶于水，在目前的臨床應(yīng)用中通常把紫杉醇溶于聚氧乙烯蓖麻油 (cremophorEL)與無水乙醇混合溶媒中以增加其水溶性。但乙醇具有一定的細(xì)胞毒性，而 聚氧乙烯蓖麻油在體內(nèi)降解時(shí)釋放組胺，導(dǎo)致不同程度的過敏反應(yīng)，亦可引起神經(jīng)細(xì)胞內(nèi) 顆粒釋放及脫髓鞘改變而加重紫杉醇的外周神經(jīng)毒性。
[0007]為降低紫杉醇制劑的毒性提高其療效，近年來臨床上陸續(xù)開發(fā)了紫杉醇的新劑 型。其中不含聚氧乙烯蓖麻油注射紫杉醇白蛋白納米混懸液（ABI-007)已在國內(nèi)外上 市。具有不用抗過敏預(yù)處理、療效較好、毒性較低等特點(diǎn)；現(xiàn)正在國內(nèi)進(jìn)行臨床研究我 國研發(fā)的紫杉醇脂質(zhì)體已開始在臨床應(yīng)用而紫杉醇的前體藥物（DHA-PTX)和聚合物劑型 genexol-PM及xyotax也正在臨床前和臨床I-III期研究中，顯示了良好的前景。
[0008]但近期的研究發(fā)現(xiàn)，無論是由高分子量聚合物形成的粒徑較大的聚合物膠束，還 是由低分子量聚合物形成的粒徑較小的聚合物膠束，具有血液穩(wěn)定性較差的缺點(diǎn)，膠束在 進(jìn)入血液后幾乎馬上解體并釋放攜帶的藥物，最終兩種膠束攜帶的藥物在體內(nèi)的分布幾 乎沒有區(qū)別，沒有展示出ERP效應(yīng)。SavicR等人的研究發(fā)現(xiàn)，紫杉醇膠束進(jìn)入血液后通 常在5分鐘內(nèi)就有超過90%的藥物釋放并往組織擴(kuò)散（見Langmuir2006, 22:3570-8. ((Assessment of the integrity of poly (caprolactone) -b-poly (ethylene oxide) micelles under biological conditions:a fI uorogenic-based approach.〉〉）。
[0009] 這一結(jié)果與設(shè)想由膠束粒子攜帶藥物，到達(dá)腫瘤部位再通過EPR效應(yīng)釋放藥物的 理想狀態(tài)相去甚遠(yuǎn)，即非成熟釋放（Prematurerelease)。導(dǎo)至非成熟釋放的原因一方面由 于膠束經(jīng)過血液稀釋后的濃度低于其臨界膠束濃度（CMC濃度）導(dǎo)致膠束解體，另一方面血 液中大量存在的蛋白質(zhì)會(huì)和膠束發(fā)生作用導(dǎo)致其團(tuán)聚并釋放藥物。因此，在設(shè)計(jì)靜脈注射 腫瘤靶向納米載體時(shí)必須首先考慮其血液穩(wěn)定性，只有在提高血液穩(wěn)定性的前提下才有望 利用EPR效應(yīng)提高藥物的靶向性。
[0010] 現(xiàn)有的紫杉醇膠束的另一個(gè)不足之處在于工藝條件較復(fù)雜，給大規(guī)模工業(yè)化增加 了難度。例如，蘭州大學(xué)劉偉生等人發(fā)明的紫杉醇-聚合物載藥膠束制備工藝（專利申請 號(hào)201110255867. 8)需要采用恒溫振蕩的工藝條件；北京大學(xué)呂萬良等人發(fā)明的一種紫 杉醇納米膠束及其應(yīng)用（【申請?zhí)枴?01110044677. 1)在制備過程中需要使用緩沖液保持反 應(yīng)環(huán)境的PH值穩(wěn)定。還有的紫杉醇膠束中含有一定量的乙醇，依然具有一定的細(xì)胞毒性。 例如山東大學(xué)的李凌冰等人發(fā)明了一種紫杉醇混合膠束制劑及其制備方法（專利申請?zhí)?201110139712. 8)，但是在其混合膠束中依然含有乙醇。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011] 本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種以mPEG-PLA-賴氨酸為膠 束載體形成的紫杉醇膠束制劑。本發(fā)明得到的紫杉醇膠束含微量乙醇，其穩(wěn)定性、平均粒徑 等主要指標(biāo)全面優(yōu)于現(xiàn)有的紫杉醇膠束。
[0012] 本發(fā)明提供的一種紫杉醇膠束制劑，采用新型表面活性劑mPEG-PLA-賴氨酸為膠 束載體。mPEG-PLA-賴氨酸分子結(jié)構(gòu)式如下：
[0014]其中，a= 11-455,b= 3-300。
[0015] 本發(fā)明中，所述mPEG-PLA-賴氨酸中，聚乙二醇甲醚嵌段的分子量優(yōu)選為1000~ 3000 ;聚丙交酯嵌段的分子量優(yōu)選為500~5000。
[0016] 本發(fā)明中，所述紫杉醇膠束制劑中殘留的乙醇或乙腈含量少于10ppm。
[0017] 本發(fā)明中，紫杉醇膠束的平均粒徑為20~40nm。
[0018] 本發(fā)明中，紫杉醇膠束可通過直接溶解法、透析法或者薄膜水化法制備得到。
[0019] 本發(fā)明中，mPEG-PLA-賴氨酸無明顯的致癌性，無生殖毒性，無致畸、致突變性，在 體內(nèi)可降解為乳酸、PEG、賴氨酸，均可直接排出體外。對小鼠進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)，小鼠的 LD50>2. 00g/kg;長毒試驗(yàn)中，I. 00g/kg劑量，1次/天，每周連續(xù)給藥2天，停藥5天，連續(xù) 給藥13周后，恢復(fù)4周后觀察，未見明顯毒副作用。
[0020] 細(xì)胞毒性測試表明，聚乙二醇甲醚-聚丙交酯-賴氨酸的細(xì)胞毒性比目前公認(rèn)無 毒的嵌段共聚物Mpeg-PLA更低（見下表1)。
[0021 ] 表I:MTT法肝細(xì)胞毒性測試結(jié)果
[0022]
[0023] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：
[0024] 1.采用毒性更低的聚乙二醇甲醚-聚丙交酯_賴氨酸為膠束載體，且膠束制劑中 無需添加其他輔料，安全性更高。
[0025] 2.體外穩(wěn)定性較高，紫杉醇膠束在室溫下保持穩(wěn)定的時(shí)間超過12小時(shí)，低溫下穩(wěn) 性超過168小時(shí)。
[0026] 3.血液穩(wěn)定性較高，粒徑較小，更易發(fā)揮ERP效應(yīng)。
【具體實(shí)施方式】
[0027] 下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明做詳細(xì)的說明，本實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下 進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的 實(shí)施例。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0028]實(shí)施例（1-7)
[0029] -種紫杉醇膠束制劑，可以采用直接溶解法、透析法或者薄膜水化法得到。優(yōu)選 的，采用薄膜水化法得到，其包括下列步驟。
[0030] ①按照紫杉醇與mPEG-PLA-賴氨酸不同的投料比（見表1)稱取原料。其中，原料 紫杉醇（CAS33069-62-4)由西安瑞林生物科技有限公司生產(chǎn)，純度大于95 %，mPEG-PLA-賴 氨酸，由發(fā)明人按照專利號(hào)PCT-CN-2013000453所述的工藝自行制備；
[0031] ②將上述原料投入容器中，加入乙醇或乙腈等有機(jī)溶劑至完全溶解。30-50°C旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)2h至有機(jī)溶劑蒸干為止，10-60°C下真空干燥> 12h去除殘留的有機(jī)溶劑，得到含紫杉 醇的聚合物混合膜。
[0032] ③混合膜于40_60°C水浴至透明狀，加入相同溫度預(yù)熱的超純水或生理鹽水、磷酸 鹽緩沖液，充分振搖水化，得透明的載藥膠束溶液。
[0033] ④將所述載藥膠束溶液用0.45 微孔濾膜過濾，即德本發(fā)明的紫杉醇膠束制 劑。
[0034] 實(shí)施例1-7分別選擇不同的投料比，以及分別選用不同嵌段分子量的 mPEG-PLA-賴氨酸，按照上述步驟制得紫杉醇膠束制劑。用高效液相色譜法測定載藥量。用 動(dòng)態(tài)光散射測定粒徑，測得粒徑分布在IO-IOOnm之間，平均粒徑在20-40nm之間（見表2)。
[0035] 表2 :不同實(shí)施例的載藥量以及粒徑
[0036]
[0037]載體=mPEG-PLA-賴氨酸
[0038] 膠束溶液穩(wěn)定性的測定方法是，將載藥膠束溶液用無菌水稀釋，得到紫杉醇濃度 約為3mg/ml的溶液，在無菌環(huán)境下轉(zhuǎn)移到安瓿瓶內(nèi)并密封。分別于4°C、15°C、25°C，正常室 內(nèi)光照條件下，每隔2h肉眼觀察安瓿瓶內(nèi)的溶液是否有沉淀或渾濁產(chǎn)生。如果有沉淀或者 渾濁產(chǎn)生，則說明溶液結(jié)束了穩(wěn)定狀態(tài)。結(jié)果見表3。
[0039] 紫杉醇注射液極不穩(wěn)定，滴注過程中所用裝置需帶有過濾功能，防止藥物析出，而 紫杉醇膠束穩(wěn)定性較高，滴注不需過濾裝置。
[0040] 表3 :穩(wěn)定性測試結(jié)果
[0041]
[0042] 對比本發(fā)明和mpeg-pla紫杉醇膠束的血液穩(wěn)定性。將本發(fā)明稀釋至紫杉醇含量 為3mg/ml后加入50wt%的血楽；對照組采用同等紫杉醇濃度的mpeg-pla紫杉醇膠束，同 樣加入50wt%的血漿。每隔1小時(shí)用動(dòng)態(tài)光散射測定粒徑分布系數(shù)（TOI)是否>0.3,結(jié)果 如表4。該時(shí)間越短說明其在血漿中的穩(wěn)定性越差，說明本發(fā)明的血液穩(wěn)定時(shí)間顯著高于 mpeg-pla紫杉醇膠束。
[0043] 表4 :血液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
[0044]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種紫杉醇膠束制劑，其特征在于，采用mPEG-PLA-賴氨酸三嵌段共聚物為膠束載 體。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫杉醇膠束制劑，其特征在于：所述的mPEG-PLA-賴氨酸中， 聚乙二醇甲醚嵌段的分子量為1000~3000。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫杉醇膠束制劑，其特征在于：所述的mPEG-PLA-賴氨酸中， 聚丙交酯嵌段的分子量為500~5000。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫杉醇膠束制劑，其特征在于：所述紫杉醇膠束制劑中殘留 的乙醇或乙腈含量少于lOppm。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫杉醇膠束制劑，其特征在于：紫杉醇膠束的平均粒徑為 20 ~40nm。6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5之一所述的紫杉醇膠束制劑，其特征在于：通過直接溶解法、透析 法或者薄膜水化法制備得到。
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種紫杉醇膠束制劑。其采用mPEG-PLA-賴氨酸三嵌段共聚物為膠束載體。紫杉醇膠束的平均粒徑為20～40nm。通過直接溶解法、透析法或者薄膜水化法制備得到。本發(fā)明的有益效果在于：采用毒性更低的聚乙二醇甲醚-聚丙交酯-賴氨酸為膠束載體，且膠束制劑中無需添加其他輔料，安全性更高；體外穩(wěn)定性較高，紫杉醇膠束在室溫下保持穩(wěn)定的時(shí)間超過12小時(shí)，低溫下穩(wěn)性超過168小時(shí)；血液穩(wěn)定性較高，粒徑較小，更易發(fā)揮ERP效應(yīng)。
【IPC分類】A61K31/337, A61P35/00, A61K47/34, A61K9/107
【公開號(hào)】CN105078886
【申請?zhí)枴緾N201410198670
【發(fā)明人】顧曉軍, 滕鑫
【申請人】上海珀理玫化學(xué)科技有限公司
【公開日】2015年11月25日
【申請日】2014年5月10日