一種中藥提取物及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，尤其涉及一種中藥提取物及其制備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] f丐調(diào)磷酸酶（caleineurin，CaN)又稱蛋白磷酸酶2B(PP2B)，屬絲/蘇氨酸蛋白磷 酸酶家族成員，是迄今發(fā)現(xiàn)的唯一受Ca 2+/鈣調(diào)素（CaM)調(diào)節(jié)的絲/蘇氨酸蛋白磷酸酶。CaN 通過使底物脫磷酸發(fā)揮作用。在T細胞中，Ca2+內(nèi)流、細胞內(nèi)濃度Ca 2+增加，Ca2+同CaM與 CaN結(jié)合，激活CaN，活化的CaN使其底物NF-AT脫磷酸，入核，引起IL-2等一些列細胞因子 的表達。CaN-NF-AT通路在T細胞活化中起著調(diào)節(jié)樞紐的作用。
[0003] 鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶抑制劑目前是臨床上最有效的免疫抑制劑藥物。用于器官移植， 控制移植物排斥反應(yīng)、自身免疫性疾病的治療（RA，CD，銀肩?。⑻貏e是其近年來用于皮膚 過敏、皮膚炎癥的治療（如濕疹），并取得良好治療效果。鈣調(diào)磷酸酶抑制劑（CNIs)作為一 種免疫抑制劑，分為外源性抑制劑和內(nèi)源性蛋白質(zhì)抑制劑。外源性抑制劑主要有環(huán)孢素、他 克莫司等，內(nèi)源性蛋白質(zhì)抑制劑主要有Cain、FKBP38等。目前，臨床應(yīng)用最多的是子囊霉素 衍生物環(huán)孢素A、他克莫司和匹美克莫司，都具有相似的理化性質(zhì)、作用機制和作用效果，但 其毒副作用（如腎毒性，高血糖等）成為該類抑制劑應(yīng)用的重要障礙。因此，以CaN-NF-AT 通路為作用靶標尋找更加安全有效的抑制劑對研發(fā)新型皮膚炎癥藥物具有重要意義。
[0004] 中藥為我國的傳統(tǒng)用藥，在臨床上，中藥在濕疹等皮膚炎癥和自身免疫性疾病 的治療中具有較好的效果?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)某些中藥單體成分能直接與 CaN結(jié)合并抑制 其活性，如槲皮素、山奈酚、酚醛棉酚等；同時，某些中藥有效成分能在細胞水平有效抑制 CaN-NF-AT通路的活化，抑制Thl和Th2型細胞因子的表達，抑制T細胞的活化，如蟲草素、 杜鵑素、非瑟酮等。中藥具有來源廣、成本低和毒性低的特點，因此，應(yīng)當充分利用中藥資 源，通過中藥的合理的復(fù)方配伍，達到不亞于西藥療效的治療皮膚炎癥的效果，并將其用于 舒緩及抗過敏類化妝品中。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供一種中藥提取物及其制備方法與應(yīng) 用。本發(fā)明提供的中藥提取物能夠有效阻斷CaN-NF-AT通路，從而起到治療濕疹等皮膚炎 癥或自身免疫性疾病的作用。并且，本發(fā)明提供的中藥組合物的原料來源廣泛，制備方法簡 單，適合大規(guī)模生產(chǎn)。
[0006] 本發(fā)明提供的中藥提取物由青蒿和蜂膠制得。
[0007] 在本發(fā)明的實施例中，青蒿和蜂膠的質(zhì)量比為3:5~5:3。
[0008] 在一些實施例中，青蒿和蜂膠的質(zhì)量比為3:5。
[0009] 在一些實施例中，青蒿和蜂膠的質(zhì)量比為5:3。
[0010] 青蒿為菊科植物黃蒿Artemisia annua L.的干燥地上部分。青蒿含有青蒿素系 列化合物、黃酮類等多種活性物質(zhì)，具有清熱解暑，除蒸，截瘧的作用。用于暑邪發(fā)熱，陰虛 發(fā)熱，夜熱早涼，骨蒸勞熱，瘧疾寒熱，濕熱黃疸。
[0011] 蜂膠是蜜蜂科動物修補蜂巢所分泌的黃褐色或黑褐色的粘性物質(zhì)，可入藥。其性 平，味苦、辛、微甘。近年來研究表明，蜂膠中含有豐富的黃酮類、氨基酸、維生素和有機酸。 有潤膚生肌，消炎止痛的功效，可治療胃潰瘍、口腔潰瘍、燒燙傷、皮膚裂痛，防輻射。
[0012] 本發(fā)明將蜂膠和青蒿復(fù)配，經(jīng)提取所得提取物能夠具有良好的抑制CaN-NF-AT通 路的作用，其效果顯著優(yōu)于單獨使用青蒿或蜂膠的效果。并且，實驗表明，本發(fā)明提供的提 取物對細胞的相對毒性較低。
[0013] 本發(fā)明提供的中藥提取物的制備方法為：將青蒿和蜂膠經(jīng)提取制得。
[0014] 在本發(fā)明的實施例中，提取的提取液為醇類、烷烴、氯仿、丙酮、水或乙酸乙酯中的 一種或兩者以上的混合物。
[0015] 在一些實施例中，醇類為乙醇、甲醇、甘油、丁二醇、丙二醇、戊二醇或己二醇中一 種或兩者以上的混合物。
[0016] 在一些實施例中，烷烴為甲烷、乙烷或石油醚。
[0017] 在一些實施例中，提取液為乙醇水溶液。
[0018] 在一些實施例中，提取液為乙醇體積分數(shù)為95 %的乙醇水溶液。
[0019] 在本發(fā)明的實施例中，提取的方法為滲漉法、浸漬法、煎煮法、回流提取法、連續(xù)提 取法、超臨界萃取法或超聲波提取。
[0020] 在本發(fā)明的實施例中，提取的溫度為常溫、高溫或智能溫控；提取壓力為真空、高 壓或常壓。
[0021] 在本發(fā)明的實施例中，本發(fā)明提供的中藥提取物的制備方法包括：將青蒿和蜂膠 以乙醇水溶液為提取劑經(jīng)滲漉法提取后濃縮濾液。
[0022] 在一些實施例中，以滲漉法提取，乙醇水溶液中乙醇的體積分數(shù)為95 %。
[0023] 在一些實施例中，以滲漉法提取，乙醇水溶液的質(zhì)量為青蒿和蜂膠質(zhì)量之和的20 倍~30倍。
[0024] 在一些實施例中，以滲漉法提取，乙醇水溶液的質(zhì)量為青蒿和蜂膠質(zhì)量之和的20 倍、25倍或30倍。
[0025] 在一些實施例中，滲漉法提取的時間為40h~60h。
[0026] 在一些實施例中，滲漉法提取的時間為48h。
[0027] 在一些實施例中，以滲漉法提取，濃縮采用低溫減壓濃縮。
[0028] 在一些實施例中，以滲漉法提取，濃縮至濾液的質(zhì)量與青蒿和蜂膠質(zhì)量之和相等。
[0029] 在本發(fā)明的實施例中，本發(fā)明提供的中藥提取物的制備方法包括：將青蒿和蜂膠 以甲醇為提取劑經(jīng)浸漉法提取后濃縮濾液。
[0030] 在一些實施例中，以浸漉法提取，甲醇的質(zhì)量為青蒿和蜂膠質(zhì)量之和的30倍。
[0031] 在一些實施例中，浸漉法提取的時間為48h。
[0032] 在一些實施例中，以滲漉法提取，濃縮至濾液的質(zhì)量與青蒿和蜂膠質(zhì)量之和相等。
[0033] 在本發(fā)明的實施例中，本發(fā)明提供的中藥提取物的制備方法包括：將青蒿和蜂膠 以氯仿為提取劑連續(xù)回流提取后濃縮濾液。
[0034] 在一些實施例中，以連續(xù)回流提取，氯仿的質(zhì)量為青蒿和蜂膠質(zhì)量之和的10倍。
[0035] 在一些實施例中，連續(xù)回流提取法提取的時間為24h。
[0036] 在一些實施例中，以連續(xù)回流提取，濃縮至濾液的質(zhì)量與青蒿和蜂膠質(zhì)量之和相 等。
[0037] 在本發(fā)明的實施例中，本發(fā)明提供的中藥提取物的制備方法包括：將青蒿和蜂膠 以乙酸乙酯為提取劑回流提取后濃縮濾液。
[0038] 在一些實施例中，以回流提取，乙酸乙酯的質(zhì)量為青蒿和蜂膠質(zhì)量之和的10倍。
[0039] 在一些實施例中，回流提取法提取的時間為36h。
[0040] 在一些實施例中，以回流提取，濃縮至濾液的質(zhì)量與青蒿和蜂膠質(zhì)量之和相等。
[0041] 在本發(fā)明的實施例中，本發(fā)明提供的中藥提取物的制備方法包括：將青蒿和蜂膠 以丁二醇或丙酮為溶劑經(jīng)超聲波提取后獲得提取液。
[0042] 在一些實施例中，以超聲波提取，溶劑的質(zhì)量與青蒿和蜂膠質(zhì)量之和相等。
[0043] 在一些實施例中，超聲波提取法提取的溫度為18°C~50°C，時間為Ih~3h。
[0044] 在一些實施例中，以超聲波提取，提取液以溶劑定容至質(zhì)量與青蒿和蜂膠質(zhì)量之 和相等。
[0045] 在本發(fā)明的實施例中，本發(fā)明提供的中藥提取物的制備方法包括：將青蒿和蜂膠 以石油醚為提取劑浸漬法提取后濃縮濾液。
[0046] 在一些實施例中，以浸漬法提取，石油醚的質(zhì)量為青蒿和蜂膠質(zhì)量之和的30倍。
[0047] 在一些實施例中，浸漬法提取法提取的時間為48h。
[0048] 在一些實施例中，以浸漬法提取，濃縮至濾液的質(zhì)量與青蒿和蜂膠質(zhì)量之和相等。
[0049] 在本發(fā)明的實施例中，本發(fā)明提供的中藥提取物的制備方法包括：將青蒿和蜂膠 以水煎煮后濃縮濾液。
[0050] 在一些實施例中，煎煮所用水的質(zhì)量為青蒿和蜂膠質(zhì)量之和的30倍。
[0051] 在一些實施例中，煎煮的時間為48h，溫度為98°C~105°C。
[0052] 在一些實施例中，濃縮至濾液的質(zhì)量與青蒿和蜂膠質(zhì)量之和相等。
[0053] 在本發(fā)明的實施例中，本發(fā)明提供的中藥提取物的制備方法包括：將青蒿和蜂膠 以乙醇為夾帶劑超臨界萃取后濃縮濾液。
[0054] 在一些實施例中，夾帶劑的質(zhì)量為青蒿和蜂膠質(zhì)量之和的30倍。
[0055] 在一些實施例中，萃取的壓力為33~35Mpa、萃取的溫度為50°C，時間為48h，CO2 流量為15L/h~25L/h。
[0056] 在一些實施例中，濾液濃縮至提取液的質(zhì)量與青蒿和蜂膠質(zhì)量之和相等。
[0057] 以本發(fā)明提供的制備方法制備中藥提取物。方法簡單、容易操作，不需要復(fù)雜的儀 器，適用于大規(guī)模生產(chǎn)。
[0058] 本發(fā)明提供的中藥提取物在制備CaN-NF-AT通路阻斷劑中的應(yīng)用。
[0059] 本發(fā)明以PM和A23187對K562細胞進行誘導(dǎo)，激活其中NF-AT基因作為實驗 對象。以本發(fā)明提供的中藥提取物作為受試樣品，結(jié)果表明，本發(fā)明提供的中藥提取物能 夠有效抑制CaN-NF-AT通路的激活，抑制率可達69. 43 %，顯著優(yōu)于單獨使用蜂膠或青蒿。 由于本發(fā)明提供的中藥組合物能夠顯著抑制CaN-NF-AT通路，因此，該提取物能夠治療以 CaN-NF-AT通路為靶標的疾病。
[0060] 本發(fā)明提供的中藥提取物在制備治療皮膚炎癥或自身免疫性疾病的藥物中的應(yīng) 用。
[0061] 作為優(yōu)選，皮膚炎癥為濕疹。
[0062] 作為優(yōu)選，自身免疫性疾病為RA、⑶或銀肩病。
[0063] 本發(fā)明提供了一種治療皮膚炎癥或自身免疫性疾病的藥物，包括本發(fā)明提供的中 藥提取物。
[0064] 本發(fā)明提供的治療皮膚炎癥或自身免疫性疾病的藥物的劑型為乳膏。
[0065] 本發(fā)明提供的中藥提取物在制備舒緩或抗過敏的化妝品中的應(yīng)用。
[0066] 本發(fā)明還提供了一種舒緩或抗過敏的化妝品，包括本發(fā)明提供的中藥提取物。
[0067] 本發(fā)明提供了以青蒿和蜂膠為原料制得的提取物，該提取物能夠具有良好的抑制 CaN-NF-AT通路的作用，效果顯著優(yōu)于單獨使用青蒿或蜂膠的效果。并且，實驗表明，本發(fā)明 提供的提取物對細胞的相對毒性較低。本發(fā)明提供提取物的制備方法簡單，容易操作，不需 要復(fù)雜的儀器，適用于大規(guī)模生產(chǎn)。
【具體實施方式】
[0068] 本發(fā)明提供了一種中藥提取物及其制備方法與應(yīng)用，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本 文內(nèi)容，適當改進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù) 人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過較佳 實施例進行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對本文的方法和 應(yīng)用進行改動或適當變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0069] 本發(fā)明采用的儀器、試劑皆為普通市售品，皆可于市場購得。
[0070] 下面結(jié)合實施例，進一步闡述本發(fā)明：
[0071] 實施例1 :
[0072] 將30g青蒿和50g蜂膠加入20倍質(zhì)量的