一種含刺五加的植物組合物提取方法和應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥制劑技術領域，具體涉及一種含刺五加的植物組合物提取方法及 應用。
【背景技術】
[0002] 含刺五加的植物組合物由刺五加100份，狹眼鳳尾蕨50份、兩棲寥60份、伴蛇蓮 40份作為原料藥制成，目前的提取方法是加水煎煮二次，每次2-3小時，合并煎液，濾過，濃 縮成稠膏，制粒，干燥，包糖衣，即得。
[0003] 現(xiàn)有技術中，尚未有含刺五加的植物組合物在提取制備方面采用微波技術的報 道，而采用水煎煮的方法，工藝粗糙、落后，雜質多，導致患者用量過大，不方便服用，嚴重影 響了本品在臨床上應用。

【發(fā)明內容】

[0004] 發(fā)明目的：為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種含刺五加的植物組合 物提取方法。
[0005] 本發(fā)明的另一個目的在于提供一種含刺五加的植物組合物在制備抑制大鼠肺泡 巨噬NR8383細胞增殖藥物中的應用。
[0006] 技術方案：本發(fā)明的目的是通過如下的方案實現(xiàn)的：
[0007] -種含刺五加的植物組合物提取方法，植物組合物由刺五加100份，狹眼鳳尾蕨 50份、兩棲寥60份、伴蛇蓮40份作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成：取上述原料 藥，粉碎，加入2L的70 %乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W， 萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50 %乙醇洗脫， 收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成 片劑、膠囊或顆粒劑。
[0008] 上述一種含刺五加的植物組合物提取方法，制備方法中微波萃取功率為500W，每 次萃取6分鐘。
[0009] -種含刺五加的植物組合物在制備抑制大鼠肺泡巨噬NR8383細胞增殖藥物中的 應用，含刺五加的植物組合物由刺五加100份，狹眼鳳尾蕨50份、兩棲寥60份、伴蛇蓮40 份作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成：取上述原料藥，粉碎，加入2L的70%乙醇， 投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃 取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回 收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。
[0010] 上述一種含刺五加的植物組合物在制備抑制大鼠肺泡巨噬NR8383細胞增殖藥物 中的應用，制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
[0011] 現(xiàn)有技術中，含刺五加的植物組合物每片0.4g，每次4片，一日3次，采用本發(fā)明 制備成的含刺五加的植物組合物每片〇. 4g，但含有的藥材量是原來的2倍，因此每次僅需2 片，一日服用3次，在具有更多活性成分的條件下大大減少了服用量。
【具體實施方式】
[0012] 以下通過實施例形式，對本發(fā)明的上述內容再作進一步的詳細說明，但不應將此 理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例，凡基于本發(fā)明上述內容所實現(xiàn)的技術均 屬于本發(fā)明的范圍。
[0013] 實施例1
[0014] 取刺五加100份，狹眼鳳尾蕨50份、兩棲寥60份、伴蛇蓮40份，粉碎，加入2L的 70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分 鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫 液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑，每片〇. 4g。
[0015] 實施例2
[0016] 取刺五加100份，狹眼鳳尾蕨50份、兩棲寥60份、伴蛇蓮40份，粉碎，加入2L的 70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分 鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫 液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成膠囊。
[0017] 實施例3
[0018] 取刺五加100份，狹眼鳳尾蕨50份、兩棲寥60份、伴蛇蓮40份，粉碎，加入2L的 70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分 鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫 液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成顆粒劑。
[0019] 狹眼鳳尾蕨為鳳尾蕨科植物狹眼鳳尾蕨的全草。拉丁名：PterisbiauritaL.，止 痢；收斂止血。主治泄瀉；痢疾；外傷出血。
[0020] 兩棲寥為寥科寥屬植物兩棲寥Polygonum amphibium L.，以全草入藥。夏秋米收， 曬干。清熱利濕。用于痢疾；外用治疔瘡。
[0021] 伴蛇蓮，拉丁文名：Hemsleya sphaerocarpa Kuang et A. M. Lu，是屬于萌蘆科雪膽 屬，多年生宿根草本，高可達1米，本發(fā)明以全草入藥。
[0022] 實施例4 :含刺五加的植物組合物抑制大鼠肺泡巨噬NR8383細胞增殖的實驗研究 資料
[0023] 1實驗材料
[0024] I. 1實驗用細胞株
[0025] 大鼠肺泡巨噬NR8383細胞，南京醫(yī)科大學實驗動物中心實驗室細胞庫， DMEM+10% FBS常規(guī)培養(yǎng)。
[0026] 1. 2實驗藥物
[0027] 研究藥物：本發(fā)明含刺五加的植物組合物：按實施例1方法制備。
[0028] 藥液儲液：稱取IOOmg含刺五加的植物組合物，溶于5ml無水乙醇中，0. 2 y m濾器 過濾，500 y I doff管分裝，-20°C存儲，同時0. 2 y m濾器過濾無水乙醇以備對照組之用。
[0029] 1. 3實驗試劑
[0030] DMEM (GIBC0 公司 Cat. No. 12100-061 Lot. No. 758137);胎牛血清（浙江天杭生物 科技有限公司Lot. No. 100419) ;NaHC03(上海久億化學試劑有限公司Cat. No. 11810-033 Lot. No. 1088387) Jrypsin (AMRESC0 公司批號：2010/04) ;EDTA(AMRESCO 公司批號： 2009/10) !Penicillin G Sodium Salt(AMRESCO公司批號：2010242) !Streptomycin Sulfate (AMRESC0公司批號：2010382);無水乙醇（南京化學試劑有限公司批號： 080310182) ;MTT(Biosharp 批號：0793) ;PBS(實驗室自配）；
[0031] 1.4實驗器材
[0032] 萊卡倒置顯微鏡（德國Leica型號：DMlL);可見-紫外光微孔板檢測儀（美國MD 公司型號：SPECTRA MAX 190) ;C02培養(yǎng)箱（FORMA型號：3111);超凈臺（蘇凈集團安泰公 司制造型號：SW-CJ-ZFD);純水儀（美國Spring公司型號：S/N 020579);精密移液器（法 國吉爾森公司型號：P2);電子天平（德國賽多利斯有限公司型號：BT323S);全自動高壓滅 菌鍋（日本SANYO公司型號：MLS-3020);臺式電熱鼓風干燥箱（上海精密實驗設備公司型 號：DHG9123A);冰箱（西門子公司型號：KG18V21TI);液氮罐（CBS型號：2001);低速離心 機（上海安亭科學儀器廠型號：KA-1000) ;0? 2ym濾器（MILLIP0RE型號：SLGP033RB) ;10cm 培養(yǎng)皿（NEST公司）、96孔培養(yǎng)板（NEST公司）；細胞計數板；離心管、移液管、Tips若干。
[0033] 2實驗方法
[0034] 1)大鼠肺泡巨噬NR8383細胞用DMEM+10% FBS于37°C、5% C02進行常規(guī)培養(yǎng) (10cm培養(yǎng)皿），當細胞生長至對數期時，收集細胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml 0.25%胰蛋白酶-0.04%￡0了六，37°(：消化2111111后，向其中加入51111完全培養(yǎng)基中和反應，吹 打細胞后將其轉入離心管中，1000 rpm離心5min，調整細胞懸液濃度3X IO4個/ml。
[0035]2)將細胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細胞懸液180 y 1，培養(yǎng)板放入細胞培養(yǎng)箱 中（37°C，5% C02)常規(guī)培養(yǎng)。
[0036] 3)根據細胞生長情況，一般長至50 % -70 %，加入含刺五加的植物組合物溶液，繼 續(xù)培養(yǎng)24h。
[0037]4) 24h 后加入 20 y I MTT 溶液（5mg/ml，即 0? 5 % MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。
[0038] 5)4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 y 1二甲基亞砜，置搖 床上低速振蕩l〇min，使結晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。
[0039] 6)同時設置本底（不加細胞，只加培養(yǎng)液），對照孔（細胞、相同濃度的藥物溶解 介質、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜），每組設定6個復孔。
[0040] 7)結果以藥物對細胞的抑制率表示：
[0041] 細胞增值抑制率（％ )=(對照孔OD值-給藥孔OD值）/對照孔OD值X 100 %。 實驗重復3次。
[0042] 3統(tǒng)計處理
[0043] 采用Microsoft Excel 2003軟件中的相關分析和Student t檢驗，數據以 mean iS. D.表不。
[0044] 4實驗結果
[0045] MTT法實驗后統(tǒng)計結果顯示，與對照組比較，當劑量達到5mg/ml時，對大鼠肺泡巨 噬NR8383細胞增殖抑制有差異（P〈0. 05)，劑量在lOmg/ml時該差異具有顯著性（P〈0. 01)， 當劑量達到15_20mg/ml時有極顯著性差異（P〈0. 001)。
[0046] 表1含刺五加的植物組合物對大鼠肺泡巨噬NR8383細胞增殖抑制影響研究 (X土SD)
[0047]
[0048] 注：與對照組比較，*P〈0. 01 ;#P〈0. 001
[0049] 5實驗結論
[0050] 含刺五加的植物組合物可以抑制大鼠肺泡巨噬NR8383細胞增殖，減少大鼠肺泡 巨噬NR8383細胞的細胞生長數目，該作用呈劑量依賴性。
【主權項】
1. 一種含刺五加的植物組合物提取方法，其特征在于植物組合物由刺五加100份，狹 眼鳳尾蕨50份、兩棲寥60份、伴蛇蓮40份作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成：取 上述原料藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為 400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50 % 乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔 料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。2. 根據權利要求1所述一種含刺五加的植物組合物提取方法，其特征在于制備方法中 微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。3. -種含刺五加的植物組合物在抑制大鼠肺泡巨噬NR8383細胞增殖藥物中的應用， 其特征在于含刺五加的植物組合物由刺五加100份，狹眼鳳尾蕨50份、兩棲寥60份、伴蛇 蓮40份作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成：取上述原料藥，粉碎，加入2L的70% 乙醇，投入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘， 合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液， 減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。4. 根據權利要求3所述一種含刺五加的植物組合物在抑制大鼠肺泡巨噬NR8383細胞 增殖藥物中的應用，其特征在于制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種含刺五加的植物組合物提取方法，由刺五加100份，狹眼鳳尾蕨50份、兩棲蓼60份、伴蛇蓮40份作為原料藥制成，采用微波提取方法制備而成，使得含量有很大提高，用量減少，本發(fā)明還提供了含刺五加的植物組合物在制備抑制大鼠肺泡巨噬NR8383細胞增殖藥物中的應用。
【IPC分類】A61K36/254, A61K36/704, A61P35/00
【公開號】CN105079128
【申請?zhí)枴緾N201510560534
【發(fā)明人】趙明亮
【申請人】南京正亮醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2015年11月25日
【申請日】2015年9月6日