葛根素注射液及質(zhì)控方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種葛根素注射液，還涉及該葛根素注射液的質(zhì) 控方法，本發(fā)明方法可以有利地控制葛根素注射液。
【背景技術(shù)】
[0002] 葛為多年生豆科纏繞藤本植物，側(cè)蔓和須根多，但塊根深生，呈紡錘形或長(zhǎng)棒形， 表皮為淡黃色，有皺裙，是主要食用和藥用部分。葛根為野葛Pueraria Lobata(Willd) Ohwi或粉葛P.thomsomi Benth的干燥根。葛根作為常用中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為 中品，歷代以來本草均有記載，味甘、辛、性平，具有解肌退熱、生津、透疹、溫陽止瀉、提高機(jī) 體免疫力等功能。目前，葛根廣泛用于改善心腦血管、治療感冒、糖尿病、腹瀉等中藥復(fù)方 制劑中，用量極大，是制劑的重要成分。葛根含有異黃酮類、三萜類、芳香類等活性成分。其 中異黃酮類化合物是葛根的主要化學(xué)成分，而葛根素（Puerarin)是葛屬植物的特有成分， 亦為主要有效成分。葛根素的藥理作用十分廣泛，具有降血脂，抗炎，抗心律失常、對(duì)心肌缺 血的保護(hù)作用、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈血管、腎保護(hù)、抗氧化、抗缺血再灌注損傷、抗肝缺血再灌注損 傷、抗酒精中樞抑制、調(diào)控骨代謝、降血糖、利尿、降低血壓、防治高血壓頭暈、頭痛、頸項(xiàng)疼 痛等作用。葛根素的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下式所示：
[0004] 隨著葛根素的藥理作用的研究深入，葛根素的分離純化也越來越受到人們的重 視。目前葛根素純化方法主要有：大孔吸附樹脂法、柱層析、酸水解有機(jī)溶劑萃取法及金屬 尚子絡(luò)合法等。
[0005] 現(xiàn)有的葛根素注射液多用丙二醇作為助溶劑，以期獲得物理、化學(xué)穩(wěn)定性滿足臨 床要求的制劑產(chǎn)品。然而，在進(jìn)行葛根素注射液質(zhì)量控制時(shí)，不明原因引發(fā)的檢測(cè)結(jié)果波動(dòng) 仍然需要克服。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種葛根素注射液，以及提供一種葛根素注射 液的質(zhì)控方法，期待這種方法能夠有效地進(jìn)行葛根素的質(zhì)量控制。
[0007] 因此，本發(fā)明的第一方面，提供了一種葛根素注射液，其中包括葛根素、丙二醇和 注射用水。
[0008] 根據(jù)本發(fā)明第一方面的葛根素注射液，其每1ml中包含：葛根素10-100mg、丙二醇 400~600mg、和加至平衡體積的注射用水。
[0009] 根據(jù)本發(fā)明第一方面的葛根素注射液，其每1ml中包含：葛根素25-75mg、丙二醇 450~550mg、和加至平衡體積的注射用水。
[0010] 根據(jù)本發(fā)明第一方面的葛根素注射液，其每1ml中包含：葛根素25-50mg、丙二醇 450~550mg、和加至平衡體積的注射用水。
[0011] 根據(jù)本發(fā)明第一方面的葛根素注射液，其中還任選地包括藥用輔料。
[0012] 根據(jù)本發(fā)明第一方面的葛根素注射液，其中所述藥用輔料是選自下列的一種或多 種：增溶劑、抗氧劑、酸堿調(diào)節(jié)劑、溶劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑等。當(dāng)添加它們時(shí)，這些藥用輔料通常 地以其常規(guī)添加濃度加入注射液中。
[0013] 根據(jù)本發(fā)明第一方面的葛根素注射液，其中所述藥用輔料是選自下列的一種或多 種：亞硫酸氫鈉（例如其在注射液中的濃度為〇-2mg/ml，例如0· l-2mg/ml)、氯化鈉（例如 其在注射液中的濃度為〇-15mg/ml，例如5-15mg/ml)、碳酸鈉（例如其在注射液中的濃度為 0-10mg/ml，例如5-10mg/ml)、吐溫（例如吐溫80，例如其在注射液中的濃度為0-5mg/ml， 例如l-5mg/ml)、乙醇（例如其在注射液中的濃度為0-200mg/ml，例如50-150mg/ml)、氨基 酸（例如精氨酸、賴氨酸、谷氨酸，例如其在注射液中的濃度為〇_2mg/ml，例如0. 1-lmg/ml) 等。
[0014] 根據(jù)本發(fā)明第一方面的葛根素注射液，其pH在3. 0~6. 0范圍內(nèi)，優(yōu)選其pH在 3. 5~5. 5范圍內(nèi)。
[0015] 進(jìn)一步地，本發(fā)明第二方面提供了檢測(cè)葛根素注射液例如本發(fā)明第一方面任一實(shí) 施方案所述葛根素注射液的方法，特別是提供了使用HPLC法檢測(cè)葛根素注射液中有關(guān)物 質(zhì)的方法，該方法包括以下步驟：
[0016] (1)取注射液適量，用溶劑[甲醇-0· 1 %有機(jī)酸溶液（25 :75)]稀釋制成每1ml中 約含葛根素〇. 5mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，用溶劑定量稀釋制成每1ml中 約含葛根素5ug的溶液，作為對(duì)照溶液；另取葛根素和咖啡因?qū)φ掌犯鬟m量，加溶劑溶解并 稀釋制成每1ml中分別含葛根素50ug和咖啡因150ug的混合溶液，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶 液；
[0017] (2)照中國(guó)藥典2010年版二部附錄VD所載高效液相色譜法的規(guī)范試驗(yàn)，用十八烷 基硅烷鍵合硅膠為填充劑，色譜柱規(guī)格為250mm X 4. 6mm X 5um ;檢測(cè)波長(zhǎng)為250mn ;
[0018] (3)以0.1 %有機(jī)酸溶液為流動(dòng)相A，以甲醇為流動(dòng)相B，按下表進(jìn)行梯度洗脫；取 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液l〇ul，注入液相色譜儀，葛根素峰的保留時(shí)間約為14分鐘，葛根素峰 與咖啡因峰的分離度應(yīng)大于4. 0,理論板數(shù)按葛根素峰計(jì)算不低于5000 ;
[0020] (4)取葛根素對(duì)照品20mg，置20ml頂空瓶中，加水10ml，水浴加熱使溶解，密封， 于121°C高壓蒸汽破壞20分鐘，放冷，量取5ml，置20ml量瓶中，用溶劑稀釋至刻度，搖勻， 取10ul，注入液相色譜儀，在主峰后應(yīng)有兩個(gè)明顯的色譜峰，相對(duì)于葛根素峰的相對(duì)保留時(shí) 間分別約為2. 0和2. 2,二者分別記為雜質(zhì)I和雜質(zhì)II ;
[0021] (5)取對(duì)照溶液10ul，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高 為滿量程的20 %;再精密量取供試品溶液與對(duì)照溶液各IOul，分別注入液相色譜儀，記錄色 譜圖；按下式計(jì)算供試品溶液色譜圖中單個(gè)雜質(zhì)色譜峰含量：
[0023] 在相對(duì)保留時(shí)間分別約為2. 0和2. 2處的雜質(zhì)I和雜質(zhì)II色譜峰的色譜含量亦 按上式計(jì)算。
[0024] 根據(jù)本發(fā)明第二方面的方法，其中用于配制溶劑和流動(dòng)相的所述有機(jī)酸選自枸櫞 酸、酒石酸、蘋果酸、馬來酸，優(yōu)選的有機(jī)酸是酒石酸。
[0025] 根據(jù)本發(fā)明第二方面的方法，其中雜質(zhì)I和雜質(zhì)II二者的分離度大于1. 5,優(yōu)選的 分離度大于1. 8,優(yōu)選的分離度大于2. 0。眾所周知，分離度，以R表示，是指相鄰兩峰的保 留時(shí)間之差與平均峰寬的比值，也叫分辨率，表示相鄰兩峰的分離程度，R越大，表明相鄰兩 組分分離越好。一般說當(dāng)R< 1時(shí)，兩峰有部分重疊；當(dāng)R = 1.0時(shí)，分離度可達(dá)98% ;當(dāng) R = 1. 5時(shí)，分離度可達(dá)99. 7%。通常用R = 1. 5作為相鄰兩組分已完全分離的標(biāo)志。當(dāng) R=I時(shí)，稱為4σ分離，兩峰基本分離，裸露峰面積為95.4%，內(nèi)側(cè)峰基重疊約2%。R = 1. 5時(shí)，稱為6 σ分離，裸露峰面積為99. 7%。R ^ 1. 5稱為完全分離?！吨袊?guó)藥典》對(duì)于一 般的品種均規(guī)定R應(yīng)大于1. 5甚至應(yīng)大于2,但是對(duì)于難以分離的情形可能會(huì)適當(dāng)降低標(biāo) 準(zhǔn)。
[0026] 雜質(zhì)I和雜質(zhì)II是葛根素的兩種明顯且重要雜質(zhì)，并且隨著注射液貯藏時(shí)間的延 長(zhǎng)它們會(huì)有不同程度的增加。對(duì)它們進(jìn)行監(jiān)控是極其有必要的。然而由于兩種物質(zhì)在色譜 圖中的分離度較小，這常常會(huì)為產(chǎn)品的質(zhì)量監(jiān)控帶來不利影響。在本發(fā)明中，已經(jīng)出人意料 地發(fā)現(xiàn)，使用特殊的有機(jī)酸可以獲得雜質(zhì)I和雜質(zhì)II色譜峰優(yōu)異分離效果，具體地說：使 用下文實(shí)施例7的方法測(cè)定實(shí)施例1-6所得全部注射液以及葛根素原料藥中雜質(zhì)I和雜 質(zhì)II含量，并以雜質(zhì)I和雜質(zhì)II之間的分離度R作為分析方法的評(píng)價(jià)指標(biāo)；實(shí)施例7步驟 (1)和（3)所述有機(jī)酸為酒石酸時(shí)，測(cè)得實(shí)施例1-6全部注射液和葛根素原料藥的R值均 在2. 1~2. 6范圍內(nèi)；實(shí)施例7步驟（1)和（3)所述有機(jī)酸為枸櫞酸時(shí)，測(cè)得實(shí)施例1-5全 部注射液的R值均在1. 2~1. 4范圍內(nèi)，實(shí)施例6全部注射液和葛根素原料藥的R值均在 1. 7~2. 0范圍內(nèi)；實(shí)施例7步驟（1)和（3)所述有機(jī)酸為蘋果酸或馬來酸時(shí)，測(cè)得實(shí)施例 1-5全部注射液的R值均在I. 1~1. 4范圍內(nèi)，實(shí)施例6全部注射液和葛根素原料藥的R值 均在1. 7~1. 9范圍內(nèi)；這表明，當(dāng)使用枸櫞酸或蘋果