黑線銀鮫提取物的制備方法及在酒精性肝損傷保護(hù)藥中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種黑線銀鮫提取物的制備方法及其在制備對酒精性肝損傷保護(hù)藥 中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前酒精中毒及成癮已成為全球性問題，長期大量飲酒可引起全身多器官的損 害，特別對肝的損害更明顯。慢性酒精中毒可導(dǎo)致酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝硬 化、纖維化等癥狀，嚴(yán)重者會發(fā)生癌變。目前，對于酒精性肝中毒的治療，多采用包括氨基酸 和葡萄糖輸注，多種維生素，維持水、電解質(zhì)及酸堿平衡等，近年來許多研究人員都力圖找 到一種能有效預(yù)防和保護(hù)肝臟以減輕酒精對肝臟損傷作用的藥物。
[0003] 黑線銀鮫（Chimaera phantasma Jordan et Snyder)，又名帶魚藍(lán)、兔子魚、海兔子 等是一種海產(chǎn)魚類，我國沿海尚屬習(xí)見，以春、冬兩季產(chǎn)量較多。分布于太平洋西部，我國產(chǎn) 于南海、東海和黃海，其內(nèi)骨骼全是軟骨，黑線銀鮫提取物的制備方法及其在制備酒精性肝 損傷保護(hù)藥物中的應(yīng)用研究至今未見有報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種黑線銀鮫提取物的制備方法及其在制備酒精性肝損傷 保護(hù)藥物中的應(yīng)用，以滿足現(xiàn)有技術(shù)的上述需求。一種黑線銀鮫提取物的制備方法，其特 征在于將新鮮黑線銀鮫蒸煮后剔除魚肉，將軟骨用清水沖洗、絞碎，按料液質(zhì)量比為I :1. 5 加入NaOH溶液，攪拌提取4 h，然后用HCl調(diào)節(jié)pH =6~7,過濾，濾液中加 NaOH調(diào)節(jié) pH=8. 5~9. 0,按料液與復(fù)合蛋白酶1000:1的質(zhì)量比加入復(fù)合蛋白酶水解4 h。將水解液 80°C加熱30 min，加入HCl調(diào)pH=3,靜置，上層溶液用浮石土抽濾，加入NaOH調(diào)pH=10. 5， 雙氧水脫色后過濾，濾液加入HCl調(diào)pH=7,濾液減壓濃縮至小體積，沉淀干燥后得黑線銀 鮫提取物。
[0005] 上述的黑線銀鮫提取物在制備酒精性肝損傷保護(hù)藥物中的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明采用大鼠酒精性肝損傷動物模型測試了制備的黑線銀鮫提取物對谷胱甘 肽過氧化物酶（GSH-PX)、超氧化物歧化酶（SOD )及丙二醛（MDA)的作用。實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明 黑線銀鮫提取物可使SOD、GSH-PX含量升高，MDA含量明顯降低，通過增強(qiáng)抗氧化酶的活 性，增強(qiáng)機(jī)體對過氧化反應(yīng)產(chǎn)物的清除能力，從而發(fā)揮對酒精性肝損傷保護(hù)作用，因此本發(fā) 明的黑線銀鮫提取物可用作酒精性肝損傷保護(hù)劑。
【具體實(shí)施方式】
[0007] 下面通過實(shí)施例和試驗(yàn)例進(jìn)一步闡述本發(fā)明黑線銀鮫提取物的制備，以及其在對 酒精性肝損傷保護(hù)應(yīng)用的有益效果。
[0008] 實(shí)施方案 第一步：黑線銀鮫提取物的制備 將新鮮黑線銀鮫蒸煮后剔除魚肉，將軟骨用清水沖洗、絞碎，按料液質(zhì)量比為I :1. 5加 入NaOH溶液，攪拌提取4 h，然用HCl調(diào)節(jié)pH=6~7,過濾，濾液中加 NaOH調(diào)節(jié)pH=8. 5~ 9. 0,按料液與復(fù)合蛋白酶1000:1的質(zhì)量比加入復(fù)合蛋白酶水解4h。將水解液80°C加熱 30 min，加入HCl調(diào)pH=3,靜置，上層溶液用浮石土抽濾，加入NaOH調(diào)pH=10. 5,雙氧水脫 色后過濾，濾液加入HCl調(diào)pH=7,濾液減壓濃縮至小體積，沉淀干燥后得黑線銀鮫提取物。
[0009] 第二步：制劑的制備 (1) 本發(fā)明黑線銀鮫提取物膠囊制劑的制備 分別稱取上述步驟制備的黑線銀鮫提取物l〇〇mg、淀粉395mg、硬脂酸鎂5mg，均勻混 合，填充成膠囊。
[0010] (2)本發(fā)明黑線銀鮫提取物片劑的制備 分別稱取上述步驟制備的黑線銀鮫提取物l〇〇mg、淀粉295mg、乳糖100mg，均勾混合， 用濕法制粒、干燥，整粒后與5mg硬脂酸鎂混合，壓成片劑。
[0011] 試驗(yàn)例1 :黑線銀鮫提取物治療酒精性肝損傷作用的藥效學(xué)研究 1、 試驗(yàn)材料 (1) 黑線銀鮫 (2) 超氧化物歧化酶（SOD)試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX)試劑盒及丙二醛 (MDA)試劑盒均購自南京建成生物工程研究所 (3)雄性Wistar大鼠，華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物學(xué)部提供 2、 試驗(yàn)方法： 雄性Wistar大鼠40只，按體重隨機(jī)分為4組，A組為空白對照組，B組為酒精模型 組，C、D組分別為本發(fā)明黑線銀鮫提取物低、高劑量干預(yù)組，分別給予50、100 Hig^kg1M1灌胃，除空白組外，其余實(shí)驗(yàn)動物給予50%乙醇8 ml · kg 1 · d 1灌胃，持續(xù)2周；第3周把 乙醇劑量遞增為12 ml · kg 1 · d \持續(xù)灌胃6周，末次灌胃后禁食不禁水12h，給予戊巴比 妥納麻醉，腹主動脈取血，分離血清，在冰臺上取出肝組織，按照試劑盒提供的操作步驟進(jìn) 行測定 SOD、GSH-PX 及 MDA。
[0012] 3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 (1)本發(fā)明黑線銀鮫提取物對酒精中毒大鼠血清中GSH-PX、SOD及MDA含量影響 與空白對照組比較，酒精模型組血清中GSH-PX、SOD含量降低MDA含量升高；與酒精 模型組比較，本發(fā)明黑線銀鮫提取物低、高劑量組均能抑制GSH-PX、SOD的降低及MDA含 量的升高。
[0013] 表1本發(fā)明黑線銀鮫提取物對酒精中毒大鼠血清中GSH-PX、SOD及MDA含量影 響
(2) 本發(fā)明黑線銀鮫提取物對酒精中毒大鼠肝組織中GSH-PX、S0D、MDA含量影響 與空白對照組比較，酒精模型組肝組織中GSH-PX、SOD含量降低MDA含量升高；與 酒精模型組比較，本發(fā)明黑線銀鮫提取物低、高劑量組均能抑制GSH-PX、SOD的降低及MDA 含量的升高。
[0014] 表2本發(fā)明黑線銀鮫提取物對酒精中毒大鼠肝組織中GSH-PX、S0D、MDA含量影 響
試驗(yàn)例2:本發(fā)明黑線銀鮫提取物的急性毒性試驗(yàn) 1、 試驗(yàn)動物： 昆明種小鼠，體重20±2g，由青島市藥檢所實(shí)驗(yàn)動物中心提供 2、 藥物： 本發(fā)明的黑線銀鮫提取物 3、 試驗(yàn)方法： 根據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局頒布修訂的"中藥新藥研究技術(shù)要求"，對本發(fā)明的黑線銀 鮫提取物進(jìn)行急性毒性實(shí)驗(yàn)。因受藥物濃度及體積限制，無法測定LD50，故進(jìn)行最大給藥 量實(shí)驗(yàn)。取昆明種小鼠30只，雌性各半，ig，給予膠囊劑中藥物lg/mL，每只0.8 mL，SP小 鼠的最大灌胃體積，用藥后觀察小鼠活動狀態(tài)、飲食、糞便、呼吸、體重及死亡情況，連續(xù)觀 察 14d. 4、試驗(yàn)結(jié)果： 各組小鼠灌胃給藥后生長良好，體重增加，行為正常，均未見死亡及明顯反應(yīng)。將動物 處死后，肉眼觀察各主要臟器無異?，F(xiàn)象。
[0015] 結(jié)果表明，本發(fā)明的黑線銀鮫提取物最大劑量口服應(yīng)用，對動物無明顯損害，未發(fā) 現(xiàn)對機(jī)體產(chǎn)生的毒性反應(yīng)，是一種安全可靠的藥物。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種黑線銀鮫提取物的制備方法，其特征在于將新鮮黑線銀鮫蒸煮后剔除魚肉，將 軟骨用清水沖洗、絞碎，按料液質(zhì)量比為1 :1.5加入NaOH溶液，攪拌提取4 h，然后用HCl 調(diào)節(jié)pH=6~7,過濾，濾液中加NaOH調(diào)節(jié)pH=8. 5~9. 0,按料液與復(fù)合蛋白酶1000:1的 質(zhì)量比加入復(fù)合蛋白酶水解4 h，將水解液80°C加熱30 min，加入HCl調(diào)pH =3,靜置，上 層溶液用浮石土抽濾，加入NaOH調(diào)pH = 10. 5,雙氧水脫色后過濾，濾液加入HCl調(diào)pH=7， 濾液減壓濃縮至小體積，沉淀干燥后得黑線銀鮫提取物。2. 權(quán)利要求1所述的黑線銀鮫提取物在制備酒精性肝損傷保護(hù)藥中的應(yīng)用。
【專利摘要】一種黑線銀鮫提取物的制備方法及在制備對酒精性肝損傷保護(hù)藥中的應(yīng)用，其特征在于將新鮮黑線銀鮫蒸煮后剔除魚肉，將軟骨用清水沖洗、絞碎，按料液質(zhì)量比為1:1～1.5加入NaOH溶液，攪拌提取4h，然后用HCl調(diào)節(jié)pH=6～7，過濾，濾液中加NaOH調(diào)節(jié)pH=8.5～9.0，按料液與復(fù)合蛋白酶1000:1的質(zhì)量比加入復(fù)合蛋白酶水解4h。將水解液80℃加熱30min，加入HCl調(diào)pH=2，靜置，上層溶液用硅藻土抽濾，加入NaOH調(diào)pH=10.5，雙氧水脫色后過濾，濾液加入HCl調(diào)pH=7，濾液減壓濃縮至小體積，沉淀干燥后得黑線銀鮫提取物。本發(fā)明黑線銀鮫提取物通過增強(qiáng)抗氧化酶的活性，增強(qiáng)機(jī)體對過氧化反應(yīng)產(chǎn)物的清除能力，可用作酒精性肝損傷保護(hù)劑。
【IPC分類】A61P1/16, A61K35/60
【公開號】CN105125584
【申請?zhí)枴緾N201510607245
【發(fā)明人】石振艷, 高建軍, 楊俊杰, 劉坤, 高華, 劉小紅
【申請人】青島大學(xué)
【公開日】2015年12月9日
【申請日】2015年9月22日