一種含蒺藜皂苷的刺蒺藜提取物的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種刺蒺藜提取物的制備方法，屬于天然植物提取物領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 刺漠藜（Tribulus terrestris L.)為漠藜科漠藜屬植物，為一年生蔓本植物，又 稱白蒺藜、刺蒺藜。近年來，隨著對刺蒺藜的研究不斷深入，已從該植物中分離得到黃酮、生 物堿、有機(jī)酸、多糖及留體皂苷等化學(xué)成分，其中以留體皂苷類成分的研究較多。
[0003] 留體皂苷是刺蒺藜的主要有效成分，研究表明刺蒺藜皂苷類成分能夠刺激人體垂 體促黃體生成素的分泌，促進(jìn)睪酮的分泌，提高體內(nèi)血睪酮水平，增加肌肉力量，促進(jìn)體力 恢復(fù)，廣泛地為健美增肌運(yùn)動(dòng)員和其他競技類體育項(xiàng)目的運(yùn)動(dòng)員在訓(xùn)練中使用。此外，近年 來研究還發(fā)現(xiàn)刺蒺藜皂苷具有降血糖、抗衰老、調(diào)節(jié)血脂、抗菌、抗癌等作用，并且其所含的 過氧化分解酶還具有明顯的抗衰老、抗氧化、減輕疲勞的作用，非常適合用作日常生活保健 產(chǎn)品。
[0004] 目前，從刺蒺藜中提取蒺藜皂苷通常采用高濃度乙醇水溶液提取再經(jīng)大孔樹脂純 化精制而成，也有人提出了采用酶解后甲醇提取氧化鋁柱精制的方法，甚至有研究人員提 出先提取出刺蒺藜自身含有的蒺藜皂苷分解酶，再用該分解酶酶解提取蒺藜皂苷的自身酶 解法。但是，上述各種方法都存在各種缺點(diǎn)，如乙醇水溶液提取難以獲得尚純度的漠藜阜 苷，酶解后甲醇提取使用了有毒溶劑，自身酶解法存在提前獲取分解酶的繁雜步驟，且分解 酶難以高效率地獲得，等等。因此，本申請的發(fā)明人通過潛心研究，結(jié)合大量實(shí)驗(yàn)，提出一種 以蒺藜皂苷為主要成分的刺蒺藜提取物的制備方法，該方法成本低、收率高，不采用有毒試 劑，易于產(chǎn)業(yè)化。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種以蒺藜皂苷為主要成分的刺蒺藜提取物的 制備方法，包括如下步驟： (1) 取刺蒺藜原料，隔水蒸煮〇. 5-2小時(shí)，水中加入食醋，蒸煮后堆埋1-4小時(shí)，自然冷 卻； (2) 向浸潤后的原料中加入5-8倍乙酸乙酯，提取1-2小時(shí)，過濾，得提取液； (3) 取提取液，調(diào)pH至中性，減壓濃縮，通過聚酰胺層析柱分離，上樣量與聚酰胺比 為1 : 5-1 : 25,樹脂柱徑高比為1 : 4-1 : 15,分別用1-10倍柱體積水、5-10倍柱 體積20 % -40 %乙醇溶液洗脫除雜，再用4-12倍柱體積40 % -90 %乙醇溶液洗脫，收集 40% -90%乙醇的洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮； (4) 調(diào)pH至4. 0-6. 0,用溶液1-8倍量的叔丁基甲基醚，分2-6次萃取，分離有機(jī)層，減 壓回收叔丁基甲基醚，加入1-3倍量硅膠，攪拌，揮干； (5) 把攪拌樣硅膠加到已裝好的5-20倍量的干硅膠柱上，硅膠柱徑高比為 1 : 4-1 : 15,以50%乙醇-叔丁基甲基醚為洗脫劑，梯度洗脫，收集50%乙醇-叔丁基甲 基醚（4 : 6)至（6 : 4)段的洗脫液； (6) 減壓回收洗脫液中的洗脫劑，得粗產(chǎn)物； (7) 加入5-20倍50%乙醇水溶液溶解，微波真空干燥，得產(chǎn)品。
[0006] 其中，步驟（1)中，食醋的加入量優(yōu)選為水的重量的3-lOwt%，更優(yōu)選6-8% ; 其中，步驟（7)中，微波真空干燥溫度：40-60°C，回差溫度2-4°C，真空度_0.07Mpa以 上，微波功率10-80KW，干燥30-80分鐘。
[0007] 本發(fā)明還提供了由上述制備方法制得的刺蒺藜提取物，包含濃度大于95 wt. %的 蒺藜皂苷。
[0008] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，在藥材的提取加工前增加了前處理步驟，用含食醋的水 蒸煮原料并給予足夠的堆埋時(shí)間；根據(jù)蒺藜皂苷的溶解特性，選擇乙酸乙酯作為提取溶劑， 進(jìn)行提取步驟；并經(jīng)過系統(tǒng)的篩選和優(yōu)化，確定了聚酰胺樹脂柱結(jié)合干硅膠柱的精制純化 步驟，分離效果極佳，并經(jīng)微波干燥，最終得到的刺蒺藜提取物中，蒺藜皂苷濃度大于95 wt. %，優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)中已有的各種制備方法。整個(gè)方法所用材料均為常規(guī)材料，成本低且收 率高、且溶劑可循環(huán)利用，能降低環(huán)境污染，易于產(chǎn)業(yè)化。
[0009] 本申請的發(fā)明人進(jìn)行了大量試驗(yàn)，因需要考慮的因素太多，以及篩選過程反復(fù)，下 文僅提供部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果。其中，測定蒺藜皂苷的方法為本領(lǐng)域公知的方法，可以采用UV法、 HPLC法等，具體參數(shù)不再詳列。
[0010] 1、藥材前處理工藝 實(shí)驗(yàn)材料：刺蒺藜、乙酸乙酯、食醋、水、食鹽 實(shí)驗(yàn)方法：取刺蒺藜，分為等量的7組，分別為對照組(不經(jīng)任何前處理)、水蒸組1 (隔 水蒸lh)、食醋水蒸組1 (隔水蒸lh)、食鹽水蒸組1 (隔水蒸lh)、水蒸組2 (隔水蒸Ih后堆 埋2小時(shí))、食醋水蒸組2 (隔水蒸Ih后堆埋2小時(shí))、食鹽水蒸組2 (隔水蒸Ih后堆埋2小 時(shí))，自然冷卻后，分別用6倍量乙酸乙酯提取，測定溶液中蒺藜皂苷的含量。
[0011] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表一 表一前處理工藝的篩選
由此可見，食醋水蒸煮后并進(jìn)行堆埋處理的原料在溶劑提取階段對于蒺藜皂苷的溶出 非常有利。其原因未明，但發(fā)明人猜測是刺蒺藜原料含有的酶發(fā)生了一定作用，使得蒺藜皂 苷更易于溶出。
[0012] 2、精制步驟的篩選聚酰胺柱層析純化 現(xiàn)有技術(shù)中廣泛使用大孔樹脂DlOl進(jìn)行蒺藜皂苷的分離純化，本發(fā)明人對此也進(jìn)行 了細(xì)致的研究。
[0013] 實(shí)驗(yàn)方法：取本發(fā)明步驟（2)得到的提取液，濃縮后，分別考察了多種樹脂，包括 D101、D311、AB-8、聚酰胺、LH-20、干硅膠柱等，并根據(jù)初次分離的狀況，進(jìn)行了樹脂柱的組 合使用，包括大孔樹脂聯(lián)用聚酰胺，大孔樹脂聯(lián)用干硅膠柱，聚酰胺聯(lián)用干硅膠柱等，進(jìn)一 步對適用的洗脫劑進(jìn)行優(yōu)選。最終結(jié)果表明，聚酰胺柱聯(lián)用干硅膠柱，并采用本發(fā)明所記載 的洗脫劑，能夠得到最優(yōu)的蒺藜皂苷的分離效率。
[0014] 3、干燥方法研究 實(shí)驗(yàn)方法：取本發(fā)明方法步驟（6)得的粗產(chǎn)物，加入8倍50%乙醇水溶液溶解后，分別 采用真空干燥、冷凍真空干燥、噴霧干燥、微波真空干燥，得到產(chǎn)品，測定產(chǎn)品中的蒺藜皂苷 含量，結(jié)果見下表。
[0015] 表三干燥方法研究結(jié)果
結(jié)果表明：富含蒺藜皂苷的刺蒺藜提取物優(yōu)選采用微波真空干燥工藝，效果最好，處理 量大，干燥溫度低，時(shí)間短，所得產(chǎn)品指標(biāo)良好。
[0016] 實(shí)施例1 一種刺蒺藜提取物的制備方法，包括如下步驟： (1) 取刺蒺藜原料，隔水蒸煮