一種巨核祖細胞制劑及其應(yīng)用、制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及干細胞制劑技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種巨核祖細胞制劑及其應(yīng)用、制備 方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 數(shù)量足夠且功能正常的血小板是止血過程中不可或缺的一環(huán)，血小板的 正常值約為150~450 X 103/mm3,因此廣義的說，少于15萬就可稱為血小板缺乏 (Thrombocytopenia)。國外曾直接從5600~9100位胎兒取用臍帶血來檢驗血小板數(shù)，發(fā) 現(xiàn)新生兒血小板缺乏的比例約為0.7~0.9% (Sola et al.，2000)。血小板缺乏癥也是新 生兒加護病房（NICU)中最常見的出血性疾病。如今，造血干細胞移植已廣泛應(yīng)用于臨床治 療惡性及非惡性血液病、實體瘤、遺傳代謝性疾病、自身免疫性疾病等。在造血干細胞移植 中，受者的造血系統(tǒng)經(jīng)預(yù)處理后嚴重受損，骨髓抑制，血小板減少，發(fā)生血小板缺乏癥，且其 恢復(fù)較慢，易導(dǎo)致出血乃至死亡。
[0003] 然而對于血小板缺乏癥的治療，主要是直接回輸血小板，把血小板收集濃縮起來， 然后配合生理鹽水，回輸至患者體內(nèi)，從而達到快速補充血小板數(shù)量的效果。但回輸血小板 價格昂貴，而且反復(fù)輸注血小板可能會面臨血小板輸注無效，此外，一些血小板生成刺激因 子如血小板生成素（TPO)，可能使患者出現(xiàn)骨髓纖維化和骨髓增生性紊亂等副作用。
[0004] 巨核細胞（Megakaryocyte)是骨髓中的一種從造血干細胞分化而來的細胞，是正 常骨髓中的一種能生成血小板的成熟細胞，前身為顆粒巨核細胞。該細胞體積巨大，成熟 的巨核細胞邊緣部分破裂脫落后形成血小板。每個巨核細胞平均能生成2000個（200~ 7700個）左右的血小板。巨核細胞雖然在骨髓的造血細胞中為數(shù)最少，僅占骨髓有核細胞 總數(shù)的0. 05%，但其產(chǎn)生的血小板卻對機體的止血功能極為重要。巨核細胞是從骨髓中的 造血干細胞分化發(fā)展來的。造血干細胞首先分化生成巨核祖細胞，也稱巨核系集落形成單 位（colony forming unit-megakaryocyte，CFU-Meg)。祖細胞階段的細胞核內(nèi)的染色體一 般是2-3倍體。當祖細胞是2倍體或4倍體時，細胞具有增殖能力，因此這是巨核細胞系增 加細胞數(shù)量的階段。當巨核祖細胞進一步分化為8-32倍體的巨核細胞時，胞質(zhì)開始分化， 內(nèi)膜系統(tǒng)逐漸完備。最后有一種膜性物質(zhì)把巨核細胞的胞質(zhì)分隔成許多小區(qū)。當每個小區(qū) 被完全隔開時即成為血小板，血小板通過靜脈竇竇壁內(nèi)皮間的空隙從巨核細胞脫落，進入 血流。
[0005] 有報道用臍帶血巨核系祖細胞和人血清白蛋白制備成巨核祖細胞注射液，能夠改 善放化療引起的血小板減少綜合癥。但該注射液的治療效果不理想，且易發(fā)不良反應(yīng)。因 此，臨床急需一種治療效果顯著且無不良反應(yīng)的巨核祖細胞制劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 有鑒于此，本發(fā)明提供了一種巨核祖細胞制劑及其應(yīng)用、制備方法。該巨核祖細 胞制劑對于血小板缺乏癥具有顯著的改善作用，輸注后的患者體內(nèi)血小板含量恢復(fù)正常水 平后，能在體內(nèi)維持較長一段時間，使用后無任何不良反應(yīng)，使用安全，且制備簡單，使用方 便。
[0007] 為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：
[0008] 本發(fā)明提供了一種巨核祖細胞制劑，包括巨核祖細胞、人血白蛋白、干細胞生長因 子、白細胞介素-2和紅花注射液。
[0009] 巨核祖細胞是造血干細胞經(jīng)過分化得到，也稱巨核系集落形成單位（colony forming unit-megakaryocyte，CFU-Meg)。祖細胞階段的細胞核內(nèi)的染色體一般是2-3倍 體。當祖細胞是2倍體或4倍體時，細胞具有增殖能力，因此這是巨核細胞系增加細胞數(shù)量 的階段。當巨核祖細胞進一步分化為8-32倍體的巨核細胞時，胞質(zhì)開始分化，內(nèi)膜系統(tǒng)逐 漸完備。最后有一種膜性物質(zhì)把巨核細胞的胞質(zhì)分隔成許多小區(qū)。當每個小區(qū)被完全隔開 時即成為血小板，血小板通過靜脈竇竇壁內(nèi)皮間的空隙從巨核細胞脫落，進入血流。
[0010] 人血白蛋白為人血液制品，原料來自人血，適應(yīng)癥包括：1.失血創(chuàng)傷、燒傷引起的 休克；2.腦水腫及損傷引起的煩壓升高；3.肝硬化及腎病引起的水腫或腹水；4.低蛋白血 癥的防治；5.新生兒高膽紅素血癥；6.用于心肺分流術(shù)、燒傷的輔助治療、血液透析的輔助 治療和成人呼吸窘迫綜合征。
[0011] 干細胞生長因子（Stem Cell Growth Factors)是一種具有刺激自體內(nèi)源性干細 胞生長的高效蛋白質(zhì)、酶組合，也是體外培養(yǎng)干細胞必不可少的各種細胞生長因子的組合， 富含表皮生長因子（EGF)、纖維細胞生長因子（FGF)、神經(jīng)生長因子（NGF)、肝細胞生長因 子（HGF)、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF)、血小板源性生長因子（PDGF)、血管內(nèi)皮生長因子 (VEGF)、轉(zhuǎn)化生長因子（TGF)等多重有效成分。動物實驗證明干細胞生長因子可以快速激 活休眠的干細胞并促使其生長，同時可以調(diào)節(jié)機體內(nèi)微環(huán)境，為干細胞提供有利的生長條 件。
[0012] 白細胞介素_2是趨化因子家族的一種細胞因子，它是由多細胞來源（主要由活化 T細胞產(chǎn)生），又具有多向性作用的細胞因子（主要促進淋巴細胞生長、增殖、分化）；對機 體的免疫應(yīng)答和抗病毒感染等有重要作用，能刺激已被特異性抗原或致絲裂因數(shù)啟動的T 細胞增殖；能活化T細胞，促進細胞因子產(chǎn)生；刺激NK細胞增殖，增強NK殺傷活性及產(chǎn)生細 胞因子，誘導(dǎo)LAK細胞產(chǎn)生；促進B細胞增殖和分泌抗體；激活巨噬細胞?？捎糜谂R床研究 和腫瘤治療。
[0013] 紅花注射液的主要成分是紅花，具有活血化瘀的功效，用于治療閉塞性腦血管疾 病，冠心病，脈管炎。它能夠很好的抗血小板聚集，提高血小板作用效果。
[0014] 本發(fā)明巨核祖細胞制劑將巨核祖細胞、人血白蛋白、干細胞生長因子、白細胞介 素-2和紅花注射液聯(lián)合應(yīng)用后，通過靜脈回輸?shù)襟w內(nèi)，循環(huán)于血液系統(tǒng)，分化成巨核細胞， 最終分化成血小板，進而對經(jīng)過放、化療或者其他原因造成的血小板缺乏癥發(fā)揮著重要作 用，效果明顯好于血小板制劑及市面上同類產(chǎn)品，而且無任何副作用。
[0015] 作為優(yōu)選，巨核祖細胞制劑中包括：
[0016] CN 105126083 A 說明書 3/12 頁
[0017] 優(yōu)選地，巨核祖細胞制劑中包括：
[0019] 在本發(fā)明提供的一些實施例中，巨核祖細胞制劑中包括：
[0021] 在本發(fā)明提供的另一些實施例中，巨核祖細胞制劑中包括：
[0023] 在本發(fā)明提供的另一些實施例中，巨核祖細胞制劑中包括：
[0024] CN 105126083 A I兄明"fb 4/12 頁
[0025] 作為優(yōu)選，巨核祖細胞制劑中還包括葡萄糖注射液。葡萄糖注射液的適應(yīng)癥為：補 充能量和體液；用于各種原因引起的進食不足或大量體液丟失（如嘔吐、腹瀉等），全靜脈 內(nèi)營養(yǎng)，饑餓性酮癥；低糖血癥；高鉀血癥；高滲溶液用作組織脫水劑；配制腹膜透析液；藥 物稀釋劑；靜脈法葡萄糖耐量試驗；供配制GIK (極化液）用。
[0026] 作為優(yōu)選，巨核祖細胞制劑中包括：
[0029] 優(yōu)選地，巨核祖細胞制劑中包括：
[0031] 在本發(fā)明提供的一些實施例中，巨核祖細胞制劑中包括：
[0032] CN 105126083 A I兄明"fb 5/12 頁
[0033] 在本發(fā)明提供的另一些實施例中，巨核祖細胞制劑中包括：
[0035] 在本發(fā)明提供的另一些實施例中，巨核祖細胞制劑中包括：
[0038] 本發(fā)明還提供了該巨核祖細胞制劑在制備治療血小板缺乏癥藥物中的應(yīng)用；該巨 核祖細胞制劑包括巨核祖細胞、人血白蛋白、干細胞生長因子、白細胞介素_2和紅花注射 液；作為優(yōu)選，巨核祖細胞制劑中包括：
[0040] 優(yōu)選地，巨核祖細胞制劑中包括：
[0042] 作為優(yōu)選，巨核祖細胞制劑中還包括葡萄糖注射液；
[0043] 作為優(yōu)選，巨核祖細胞制劑中包括：
[0045] 優(yōu)選地，巨核祖細胞制劑中包括：
[0048] 本發(fā)明還提供了一種巨核祖細胞制劑的制備方法，包括：
[0049] 將巨核祖細胞、人血白蛋白、干細胞生長因子、白細胞介素_2和紅花注射液混合， 獲得巨核祖細胞制劑。
[0050] 作為優(yōu)選，巨核祖細胞制劑中包括：
[0051] CN 105126083 A 說明書 7/12 頁
[0052] 優(yōu)選地，巨核祖細胞制劑中包括：
[0054] 本發(fā)明還提供了一種巨核祖細胞制劑的制備方法，包括：
[0055] 將巨核祖細胞、人血白蛋白、干細胞生長因子、白細胞介素_2、紅花注射液和葡萄 糖注射液混合，獲得巨核祖細胞制劑。
[0056] 作為優(yōu)選，巨核祖細胞制劑中包括：
[0058] 優(yōu)選地，巨核祖