藥物組合的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本申請要求2013年3月15日提交的美國臨時專利申請第61/799, 177號的優(yōu)先 權(quán)，通過參考將其并入。
[0002] 本發(fā)明涉及一種新型的藥物組合，其在治療呼吸道疾病和炎癥疾病時具有令人驚 奇的治療功效。
【背景技術(shù)】
[0003] 對于治療諸如哮喘和慢性阻塞性肺?。–OPD)等呼吸道疾病存在許多不同的治療 途徑。例如，已知皮質(zhì)類留醇、β2-腎上腺素受體激動劑、磷酸二酯酶（PDE) 4抑制劑、PDE3 抑制劑、白三烯受體拮抗劑、表皮細(xì)胞生長因子受體（egfr)激酶抑制劑、ρ38激酶抑制劑、 NK 1激動劑和毒蕈堿受體拮抗劑都可用于治療呼吸道疾病。
[0004] RPL554 (9, 10-二甲氧基-2- (2, 4, 6-三甲基苯基亞氨基）-3- (Ν-氨甲酰基-2-氨 基乙基）-3, 4, 6, 7-四氫-2Η-嘧啶并[6, Ι-a]異喹啉-4-酮）是TOE3/PDE4雙重抑制劑， 并且描述于WO 00/58308。作為組合性TOE3/PDE4抑制劑，ARPL554兼具抗炎和支氣管擴(kuò)張 活性，并用于治療諸如哮喘和慢性阻塞性肺?。–OPD)等呼吸道疾病。
[0005] 已知不同種類的呼吸道藥物可以組合使用來治療呼吸道疾病。但是，幾乎觀察不 到此類組合的各成分之間的協(xié)同相互作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明令人驚奇的發(fā)現(xiàn)RPL554能夠增強(qiáng)毒蕈堿受體拮抗劑的活性。因此RPL554 和毒蕈堿受體拮抗劑的組合協(xié)同地相互作用來提供改善的治療效果。
[0007] 藥物之間的真正協(xié)同相互作用是罕見的。協(xié)同相互作用的存在可以通過例如 Berenbaum法、Bliss獨(dú)立（BI)標(biāo)準(zhǔn)和/或Loewe累加（LA)模型經(jīng)由曲線等效圖（參 見 Berenbaum, 1977 ;Greco 等，1995 ;Grabovsky 和 Tallarida, 2004 ;Tallarida, 2006 ; Goldoni 和 Johansson, 2007 ;Tallarida 和 Raffa, 2010)來確定。
[0008] 根據(jù)Berenbaum法，組合的協(xié)同通過下述步驟檢測：首先確定每種組成藥物作為 單治療劑的劑量-響應(yīng)曲線以鑒定各藥物的低劑量和高劑量。然后測定低劑量的各藥物的 組合的效果。如果低劑量的各藥物的組合產(chǎn)生的響應(yīng)大于作為單治療劑的單獨(dú)的各高劑 量，則兩種藥物之間存在真正協(xié)同。
[0009] 本發(fā)明人已經(jīng)令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)RPL554與毒蕈堿受體拮抗劑組合時產(chǎn)生 Berenbaum法意義上的真正協(xié)同效果。在使用低劑量的各組成藥物時獲得的增強(qiáng)治療效果 是臨床情況中高度期望的，并且例如減少患者經(jīng)歷的副作用。
[0010] 因此，本發(fā)明提供一種組合物，所述組合物包含（a) PDE3/TOE4抑制劑，其 是9, 10-二甲氧基-2-(2, 4, 6-三甲基苯基亞氨基）-3-(N-氨甲酰基-2-氨基乙 基）-3, 4, 6, 7-四氫-2H-嘧啶并[6, Ι-a]異喹啉-4-酮或其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽，和 (b)毒蕈堿受體拮抗劑。
[0011] 本發(fā)明還提供一種藥物組合物，其包含本發(fā)明的組合物和一種或多種藥學(xué)上可接 受的載體、稀釋劑或賦形劑。
[0012] 本發(fā)明還提供一種治療有需要的受試對象中的疾病或狀況的方法，所述疾病或狀 況基于⑴血管或支氣管的急性或慢性阻塞，或（ii)急性或慢性炎癥，所述方法包括對所 述受試對象施用（a)本文所定義的TOE3/PDE4抑制劑和（b)毒蕈堿受體拮抗劑。
[0013] 本發(fā)明還提供一種產(chǎn)品，所述產(chǎn)品包含（a)本文所定義的TOE3/PDE4抑制劑，和 (b)毒蕈堿受體拮抗劑，（a)和（b)同時、分開或依次用于治療本文所定義的疾病或狀況。
[0014] 本發(fā)明還提供（a)本文所定義的TOE3/PDE4抑制劑在制備藥物中的應(yīng)用，所述藥 物用于與（b)毒蕈堿受體拮抗劑同時、分開或依次使用以組合治療本文所定義的疾病或狀 況。
[0015] 本發(fā)明還提供（b)毒蕈堿受體拮抗劑在制備藥物中的應(yīng)用，，所述藥物用于與（a) 本文所定義的TOE3/PDE4抑制劑同時、分開或依次使用以組合治療本文所定義的疾病或狀 況。
[0016] 本發(fā)明還提供（a)本文所定義的TOE3/PDE4抑制劑，和（b)毒蕈堿受體拮抗劑在 制備用于治療本文所定義的疾病或狀況的藥物中的應(yīng)用。
[0017] 本發(fā)明還提供用于治療本文所定義的疾病或狀況的本發(fā)明的組合物。
[0018] 本發(fā)明還提供本文所定義的H)E3/PDE4抑制劑，其用于與毒蕈堿受體拮抗劑組合 治療本文所定義的疾病或狀況。
[0019] 本發(fā)明還提供毒蕈堿受體拮抗劑，其用于與本文所定義的H)E3/PDE4抑制劑組合 治療本文所定義的疾病或狀況。
【附圖說明】
[0020] 圖1:線狀圖表示用RPL554溫育50分鐘后對EFS引起的人分離支氣管制樣收縮的 抑制。顯示的點(diǎn)來自用η = 5的不同受試對象的樣品進(jìn)行的試驗(yàn)，將其表示為平均值土SEM ; ***P〈0. 001相對于對照。
[0021] 圖2:RPL554和阿托品對由乙酰膽堿導(dǎo)致的次大收縮引起的人支氣管舒張。顯 示的點(diǎn)來自用η = 5的不同受試對象的樣品進(jìn)行的試驗(yàn)，將其表示為平均值土SEM ; ***Ρ〈0. 001相對于阿托品。
[0022] 圖3:在被動致敏的人分離支氣管中增加劑量的RPL554對組胺的收縮效果的影 響。顯示的點(diǎn)來自用η = 5的不同受試對象的樣品進(jìn)行的試驗(yàn)，將其表示為平均值土SEM ; ***P〈0. 001相對于被動致敏的對照。
[0023] 圖4:阿托品和RPL554之間的低濃度相互作用（IOnM和IOOnM)。數(shù)據(jù)來自用η = 5的不同受試對象的樣品進(jìn)行的試驗(yàn)，將其表示為平均值土SEM。*ρ〈0. 05和**ρ〈0. 01。
[0024] 圖5:對于RPL554與阿托品組合的BI藥物相互作用模型進(jìn)行響應(yīng)表面分析獲得 的相互作用表面。水平軸表示化合物的濃度，垂直軸表示AE(舒張，％)。0平面表示BI 相互作用，而〇平面上的體積表示協(xié)同（正AE)相互作用。相互作用的量級與ΔΕ直接相 關(guān)，3D圖的不同色調(diào)表示協(xié)同的不同百分比帶（10% )。各個交叉點(diǎn)表示對來自不同受試對 象的樣品（η = 5)進(jìn)行的試驗(yàn)的平均值。
[0025] 圖6:條形圖表示對阿托品（空心柱；阿托品，nM)、RPL554 (實(shí)心柱；ηΜ)的舒張響 應(yīng)，對各劑量組合的累加響應(yīng)（斑點(diǎn)柱；累加）和對各劑量組合的觀察到的舒張響應(yīng)（深 色斑點(diǎn)柱；組合1:1)。各激動劑的濃度在X軸上示出。各條表示平均值，垂直線表示標(biāo)準(zhǔn) 偏差（N = 5)。在累加響應(yīng)的情況下，使用Tallarida和Raffa(2010)的方法估算平均值。 *P〈0. 05 (經(jīng)調(diào)整），參照累加響應(yīng)（使用單樣品t檢驗(yàn)）。
[0026] 圖7:在靜脈內(nèi)施用RPL554單獨(dú)（·）或與2 μ g/kg阿托品的組合（▲)之后氣 道阻塞（由靜脈內(nèi)（iv.)施用蛙皮素（2μg/ml ;5ml/hr)導(dǎo)致）的降低。
[0027] 圖8:在靜脈內(nèi)施用RPL554單獨(dú)（·）或與2 μ g/kg阿托品的組合（▲)之后平 均動脈血壓的降低。
[0028] 圖9:在靜脈內(nèi)施用阿托品之后氣道阻塞（由靜脈內(nèi)（iv.)施用蛙皮素（2 μ g/ml ; 5ml/hr))導(dǎo)致）的降低。
[0029] 圖10:靜脈內(nèi)施用阿托品后平均動脈血壓的降低。
[0030] 圖11:在不同電場刺激（EFS)頻率下支氣管張力（bronchial tone)對格隆銨的 濃度響應(yīng)曲線（CRC)。
[0031] 圖12:在不同濃度的格隆銨下支氣管張力對格隆銨的頻率響應(yīng)曲線以及曲線 (AUC)圖下面積。
[0032] 圖13:在不同電場刺激（EFS)頻率下支氣管張力對于RPL554的濃度響應(yīng)曲線 (CRC)〇
[0033] 圖14:支氣管張力對于不同濃度的RPL554的頻率響應(yīng)曲線。
[0034] 圖15:在（A) 3Hz、（B) IOHz和（C) 25Hz的EFS下人分離支氣管對RPL554、格隆銨 以及RPL554和格隆銨的組合的收縮響應(yīng)，以及各頻率下的AUC比較。
[0035] 圖16:對RPL554、格隆銨的舒張響應(yīng)、對RPL554和格隆銨的組合的預(yù)期響應(yīng)，以及 對RPL554和格隆銨的組合的觀察到的響應(yīng)。
[0036] 圖17:在誘導(dǎo)次大收縮的卡巴膽堿（CCh)下人分離支氣管對RPL554和格隆銨的 濃度響應(yīng)曲線。
[0037] 圖18:對人類小支氣管（〈1mm的直徑）由RPL554和格隆銨的組合引起的預(yù)期的 和觀察到的舒張響應(yīng)。
[0038] 圖19:由RPL554和格隆銨的組合引起的觀察到和預(yù)期的舒張響應(yīng)之間的Δ效 應(yīng)。
【具體實(shí)施方式】
[0039] 本文使用以下縮略語：
[0040] RPL554 :9, 10-二甲氧基-2-(2, 4, 6-三甲基苯基亞氨基）-3-(N-氨甲酰基-2-氨 基乙基）-3, 4, 6, 7-四氫-2H-嘧啶并[6, Ι-a]異喹啉-4-酮；ANOVA :方差分析；BI =Bliss 獨(dú)立；COX:環(huán)氧合酶；EC30 :引起30 %最大效應(yīng)所需的濃度；EC50 :引起50%最大效應(yīng) 所需的濃度；EC70 :引起70%最大效應(yīng)所需的濃度；EFS :電場刺激；Emax :最大效應(yīng)；KH : Krebs-Henseleit 緩沖液；LA :Loewe 累加；和]3DE :磷酸二酯酶。
[0041] 術(shù)語"藥學(xué)上可接受的"是指不是生物學(xué)上或在其他方面不合需要的材料。例如， 術(shù)語"藥學(xué)上可接受的載體"是指可以引入組合物并施用至受試對象/患者且不引起不合 需要的生物效應(yīng)或以與組合物的其它成分以無害方式相互作用的材料。此類藥學(xué)上可接受 的材料通常滿足毒理學(xué)和制造測試的所需標(biāo)準(zhǔn)，并且包括由美國食品藥品管理局鑒定為合 適的無活性成分的那些材料。
[0042] 術(shù)語"藥學(xué)上可接受的酸加成鹽"是指不是生物學(xué)上或在其他方面不合需要的材 料藥學(xué)的酸加成鹽。此類藥學(xué)上可接受的酸加成鹽對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是已知的。
[0043] 術(shù)語"治療有效量"是指當(dāng)施用至需要治療的受試對象時足以實(shí)現(xiàn)治療的量。具體 而言，"有效"量是指獲得所需結(jié)果需要的量，"治療有效"量是獲得所需治療結(jié)果需要的量。 例如，為了拮抗毒蕈堿受體，"有效量"是毒蕈堿受體的拮抗量。類似地，對于治療慢性阻塞 性肺病（COPD)的治療有效量是實(shí)現(xiàn)所需治療結(jié)果的量，所需治療結(jié)果可以是疾病預(yù)防、改 善、抑制或減輕。
[0044] 本文使用的"治療"是指治療諸如哺乳動物（特別是人）等受試對象中的疾病或 醫(yī)學(xué)狀況（例如C0PD)，其包括：(a)預(yù)防疾病或醫(yī)學(xué)狀況的發(fā)生，即對受試對象進(jìn)行預(yù)防性 治療；(b)改善疾病或醫(yī)學(xué)狀況，即，消除受試對象中的疾病或醫(yī)學(xué)狀況或引起受試對象中 的疾病或醫(yī)學(xué)狀況消退；（c)抑制受試對象中的疾病或醫(yī)學(xué)狀況，即減慢或阻滯受試對象 中的疾病或醫(yī)學(xué)狀況的發(fā)展；或（d)減輕受試對象中的疾病或醫(yī)學(xué)狀況的癥狀。例如，術(shù)語 "治療C0PD"會包括預(yù)防COPD發(fā)作、改善C0PD、抑制COPD或減輕COPD的癥狀。術(shù)語"受試 對象"旨在包括需要治療或疾病預(yù)防的那些動物（其目前正在接受治療以用于疾病預(yù)防或 治療特定疾病或醫(yī)學(xué)狀況），例如人類，以及在檢驗(yàn)（例如動物模型）中正在進(jìn)行本發(fā)明組 合物評價或使用的測試受試對象。
[0045] PDEVPDE4 抑制劑
[0046] 本發(fā)明中使用的PDE3/TOE4抑制劑是9, 10-二甲氧基-2-(2, 4, 6-三甲基苯基亞 氨基）-3-(N-氨甲酰基-2-氨基乙基）-3,4,6,7_四氫-2H-嘧啶并[6, Ι-a]異喹啉-4-酮 (也稱為RPL554)或其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽。
[0047] 通常而言，PDE3/PDE4抑制劑是9, 10-二甲氧基-2-(2,4,6-三甲基苯基亞氨 基）-3-(N-氨甲?；?2-氨基乙基）-3, 4, 6, 7-四氫-2H-嘧啶并[6, Ι-a]異喹啉-4-酮。 因此優(yōu)選9, 10-二甲氧基-2- (2, 4, 6-三甲基苯基亞氨基）-3- (N-氨甲?；?2-氨基乙 基）-3, 4, 6, 7-四氫-2H-嘧啶并[6, Ι-a]異喹啉-4-酮的游離堿。
[0048] 毒蕈堿受體拮抗劑
[0049] 毒蕈堿受體拮抗劑（MRA)是阻斷毒蕈堿乙酰膽堿受體的活性的化合物。本領(lǐng)域技 術(shù)人員能夠使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的檢驗(yàn)毫不費(fèi)力地確定給定的化合物是否阻斷毒蕈 堿乙酰膽堿受體。
[0050] 本發(fā)明的發(fā)現(xiàn)是RPL554能夠增強(qiáng)兩種結(jié)構(gòu)不同的毒蕈堿受體拮抗劑（即阿托品 和格隆銨）的活性?；谑褂脙煞N結(jié)構(gòu)不同的毒蕈堿受體拮抗劑的該發(fā)現(xiàn)，可得出下述結(jié) 論：利用RPL554觀察到的協(xié)同相互作用歸因于這些化合物作為毒蕈堿受體拮抗劑的活性， 而不是歸因于這些化合物的特定結(jié)構(gòu)。因此可得出下述結(jié)論：對于具有毒蕈堿受體拮抗劑 活性的所有化合物，可以預(yù)期與RPL554具有協(xié)同作用。
[0051] 通常而言，毒蕈堿受體拮抗劑是阿托品、甲基阿托品、后馬托品、莨菪堿、東莨 菪堿、異丙托銨（ipratropium)、氧托銨（oxitropium)、噻托銨（tiotropium)、甲胺太 林（methantheline)、丙胺太林（propantheline)、辛托品、克利銨（clidinium)、甘羅溴 銨（copyrrolate)(Robinul)、異丙酰胺（isopropamide)、甲哌佐酯（mepenzolate)、三乙 已苯銨（tridihexethyl)、己環(huán)銨、環(huán)噴托酯、托吡卡胺、三己芬迪、哌侖西平、替侖西平、 AF-DX116和美索曲明等。例如，毒蕈堿受體拮抗劑是阿托品、硫酸阿托品、阿托品氧化物、甲 基阿托品硝酸酯、氫溴后馬托品、氫溴莨菪堿（d，1)、氫溴東莨菪堿、異丙托溴銨、氧托溴銨、 噻托溴銨、甲胺太林、溴丙胺太林、溴甲辛托品、克利溴銨、甘羅溴銨、碘化異丙酰胺、溴化甲 哌佐酯、氯化三乙已苯銨（Pathilone)、甲硫己環(huán)銨、環(huán)噴托酯鹽酸鹽、托吡卡胺、三己芬迪 鹽酸鹽、哌侖西平、替侖西平、AF-DX116和美索曲明等。毒蕈堿受體拮抗劑的其它代表性實(shí) 例包括阿地銨（例如阿地溴銨）和蕪地銨（例如蕪地溴銨）。
[0052] 通常而言，毒蕈堿受體拮抗劑是阿托品、東莨菪堿、格隆銨（glycopyrrolate，或 glycopyrronium)、異丙托銨、噻托銨、氧托銨、哌侖西平、替侖西平、阿地銨（acI idinium) 或蕪地銨（umeclidinium)。優(yōu)選的是，毒蕈堿受體拮抗劑可以是阿托品、東莨菪堿、格隆銨、 異丙托溴銨、噻托溴銨、氧托溴銨、哌侖西平、替侖西平、阿地銨或蕪地銨。作為選擇，毒蕈堿 受體拮抗劑可以是阿托品、東莨菪堿、格隆溴銨、異丙托溴銨、噻托溴銨、氧托溴銨、哌侖西 平或替侖西平。
[0053] 更優(yōu)選的是，毒蕈堿受體拮抗劑是阿托品、異丙托溴銨或噻托銨。
[0054] 最優(yōu)選的是，毒蕈堿受體激動劑是阿托品或格隆銨。
[0055] 毒蕈堿受體拮抗劑可選地是其消旋體、其對映異構(gòu)體、其非對映異構(gòu)體和其混合 物的形式，并且可選地是其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽的形式。用于形成毒蕈堿受體拮抗劑 的加成鹽的合適酸的典型實(shí)例是鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙酸、富馬酸、琥珀酸、 馬來酸和三氟乙酸。此外，可以使用上述鹽的混合物。
[0056] 組合物、組劑（combination)、藥物組合物和制劑
[0057] 本發(fā)明的組合物包含（a)PDE3/TOE4抑制劑，其是9, 10-二甲氧基-2-(2,4,6-三 甲基苯基亞氨基）-3-(N-氨甲?；?2-氨基乙基）-3,4,6,7_四氫-2H-嘧啶并[6, Ι-a]異 喹啉-4-酮或其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽，和（