一種大鼠急性應(yīng)激反應(yīng)的造模方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及醫(yī)學(xué)研究用動(dòng)物模型的造模方法，具體是一種大鼠急性應(yīng)激反應(yīng)的 造模方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 應(yīng)激是機(jī)體對(duì)有害刺激所做出的適應(yīng)性綜合反應(yīng)，是機(jī)體對(duì)抗有害刺激的適應(yīng) 性防御機(jī)制。近幾十年，全球地震、水災(zāi)等自然災(zāi)害頻繁發(fā)生，奧運(yùn)會(huì)等各種大型集會(huì)活動(dòng) 出現(xiàn)擁擠和踩踏事件，均造成大規(guī)模的人員創(chuàng)傷，受傷類型多為急性創(chuàng)傷所致的外傷。急性 外傷的發(fā)生不僅給傷者帶來劇烈的疼痛，而且會(huì)誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生一系列的強(qiáng)應(yīng)激反應(yīng)，還可 能由于應(yīng)激反應(yīng)過強(qiáng)產(chǎn)生創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙等嚴(yán)重并發(fā)癥。最新的研究顯示，急性應(yīng)激會(huì)改 變曬齒類動(dòng)物的認(rèn)知靈活度，甚至影響人類的味覺，更有學(xué)者證明急性應(yīng)激反應(yīng)對(duì)人類大 腦基因改變有一定影響。因此，有關(guān)急性應(yīng)激反應(yīng)的研究在國內(nèi)外均是熱點(diǎn)課題。進(jìn)行急 性應(yīng)激反應(yīng)的研究，首先要復(fù)制標(biāo)準(zhǔn)理想的急性應(yīng)激反應(yīng)動(dòng)物模型。理想的急性應(yīng)激反應(yīng) 動(dòng)物模型應(yīng)具備W下要求：1.臨床相似性：即制作的急性應(yīng)激反應(yīng)動(dòng)物模型應(yīng)與臨床相 近似，動(dòng)物模型能夠模擬人類發(fā)生急性應(yīng)激反應(yīng)的病理過程，盡量接近人類情況。II.可重 復(fù)性：即對(duì)急性應(yīng)激反應(yīng)動(dòng)物模型造模的關(guān)鍵步驟客觀化、定量化，造模動(dòng)物的存活率高。 III.可操作性：即模型操作技術(shù)簡(jiǎn)單，易于掌握，便于推廣。
[0003] 目前，急性應(yīng)激反應(yīng)模型造模的主要方法有手術(shù)腹腔探查或截肢、燒傷、胸部撞擊 等：1.對(duì)大鼠行腹腔探查：大鼠經(jīng)腹腔注射4%戊己比妥鋼（40ml/kg體重）麻醉后，分別 沿其背部中線、腹部中線做6cm及5cm縱行切口，并模擬腹部臟器探查，暴露腹部臟器1 -2minW檢查有無病灶及損傷，隨后進(jìn)行縫合，術(shù)后適當(dāng)保暖。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該種造模方式 有W下缺點(diǎn)：術(shù)者操作動(dòng)作不能完全統(tǒng)一，易造成不同大鼠的應(yīng)激程度不一致。
[0004] 2.行截肢術(shù)：按30mg/kg體重腹腔注射4%戊己比妥鋼麻醉后，于左下肢足面上 約0. 5cm處行截肢術(shù)，術(shù)后加壓縫合，無菌紗布包扎，出血量較多者舍棄。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該 種造模方式有W下缺點(diǎn)：術(shù)后大鼠易出血過多，導(dǎo)致休克，休克本身也會(huì)誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生應(yīng)激 反應(yīng)，影響大鼠實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的結(jié)果。此外，截肢影響大鼠的自由活動(dòng)，影響后續(xù)行為學(xué)評(píng)價(jià)。 [000引 3.行燒傷手術(shù)：備皮，肌注3%戊己比妥鋼（lOml/kg體重）麻醉后，將其背部朝下 固定于制好的木板（留有2. 1cm2的矩形開口），置于電子恒溫水浴鍋（60°C)內(nèi)40s后造成 30%總體表面積的III度燙傷。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該種造模方式有W下缺點(diǎn)：燒傷的面積和深度 難W把握，且燒傷后大鼠并發(fā)癥較多，易誘發(fā)感染性休克，影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
[0006] 4.行胸部撞擊手術(shù)：動(dòng)物經(jīng)水合氯醒300mg/kg腹腔注射麻醉，取平邸位固定于動(dòng) 物臺(tái)，右上肢上舉，W右蔽前線第5肋間為撞擊點(diǎn)，剪除撞擊區(qū)毛發(fā)。選擇直徑1cm的撞擊 頭，按設(shè)定能量從相應(yīng)高度落下，進(jìn)行致傷。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該種造模方式有W下缺點(diǎn)：撞擊 部位、力度難W把握，易造成肋骨骨折、肺挫傷，而且創(chuàng)傷后大鼠死亡率高。
[0007]國內(nèi)早有應(yīng)用斷尾作為外周神經(jīng)疼痛的模型，鑒于此，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)該種模型用于 模擬人類急性應(yīng)激反應(yīng)，能排除傳統(tǒng)方式中的復(fù)合應(yīng)激，避免在造成急性應(yīng)激反應(yīng)的同時(shí) 出現(xiàn)的失血性休克、感染性休克等引發(fā)的應(yīng)激反應(yīng)。該斷尾模型具有操作簡(jiǎn)潔，條件易于控 審IJ，致傷程度較一致，是最能反映急性應(yīng)激反應(yīng)的造模方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的是提供一種成模率高，死亡率低，操作簡(jiǎn)單，結(jié)果穩(wěn)定，宜于標(biāo)準(zhǔn)化 的大鼠急性應(yīng)激反應(yīng)的造模方法。
[0009] 實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案是：
[0010] 一種大鼠急性應(yīng)激反應(yīng)的造模方法，包括W下步驟：
[0011] (1)選擇體重280g-320g的健康雄性SD大鼠，實(shí)驗(yàn)前大鼠禁食12h，自由飲水； [001引似將選取的雄性SD大鼠按每lOOg體重4mg的劑量注射2%戊己比妥鋼溶液，大 鼠鎮(zhèn)靜后俯邸，四肢固定于動(dòng)物操作臺(tái)上，在靠近尾端的尾干處，具體為S3和S4脊髓神經(jīng) 之間，橫切斷尾，即切斷支配尾部的神經(jīng)纖維，模擬外周神經(jīng)急性損傷造成的應(yīng)激反應(yīng)。
[0013] 本發(fā)明的造模方法中所用材料都可W在市場(chǎng)上購買到。
[0014] 本發(fā)明與傳統(tǒng)造模方法相比較，具有W下有益效果：
[0015] 本發(fā)明根據(jù)急性應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制W及急性應(yīng)激反應(yīng)模型的特征性指標(biāo)，主要 為ACTH(a化enocorticotropichormone,促腎上腺素皮質(zhì)激素）、C0RT(^corticosterone，皮 質(zhì)醇激素）、c-fos蛋白，通過大量實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，模型組大鼠的外周血清ACTH值、C0RT值 與正常組大鼠相比明顯升高，斷尾應(yīng)激后，神經(jīng)元c-fos表達(dá)增加明顯，故急性應(yīng)激反應(yīng)動(dòng) 物模型造模成功，該模型可W很好的用于急性應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)病機(jī)制研究。
【附圖說明】
[0016] 圖1為實(shí)施例中正常組大鼠下丘腦室旁核c-fos表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)的變化（X400 箭頭顯示的C-化S陽性體征）；
[0017] 圖2為實(shí)施例中模型組大鼠下丘腦室旁核c-fos表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)的變化（X400 箭頭顯示的C-化S陽性體征）。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 下面通過具體實(shí)施例對(duì)本
【發(fā)明內(nèi)容】
作進(jìn)一步說明，但不是對(duì)本發(fā)明的限制。
[001引實(shí)施例
[0020] -種大鼠急性應(yīng)激反應(yīng)的造模方法，包括W下步驟：
[0021] (1)選擇體重280g-320g的健康雄性SD大鼠，隨機(jī)分成正常組和模型組，實(shí)驗(yàn)前大 鼠禁食12h，自由飲水；
[002引 似將實(shí)驗(yàn)雄性SD大鼠按每lOOg體重4mg的劑量注射2%戊己比妥鋼溶液，SD大 鼠鎮(zhèn)靜后俯邸，四肢固定于動(dòng)物操作臺(tái)上，在靠近尾端的尾干處，具體為S3和S4脊髓神經(jīng) 之間，橫切斷尾，即切斷支配尾部的神經(jīng)纖維，模擬外周神經(jīng)急性損傷造成的應(yīng)激反應(yīng)。
[0023] (3)正常組大鼠不進(jìn)行任何操作。
[0024] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果；
[00巧]各組大鼠之間的體重比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p〉〇. 05);實(shí)驗(yàn)中取血時(shí)間控制在 12點(diǎn)左右，排除皮質(zhì)醇晝夜節(jié)律性的干擾。
[0026] 本實(shí)驗(yàn)分別對(duì)正常組和模型組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測(cè)，具體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表所 示：
[0027]
[0028] 由上表的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與正常組大鼠相比，模型組大鼠血清ACTH、C0RT水平明 顯升高（p<0. 01)，說明造模成功。
[0029] 本實(shí)驗(yàn)分別對(duì)正常組和模型組進(jìn)行下丘腦室旁核C-化S蛋白檢測(cè)，具體檢測(cè)實(shí) 驗(yàn)結(jié)果如圖1和圖2所示，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，胞漿中出現(xiàn)黃棟色顆粒的即為陽性細(xì)胞（光鏡 下X400,觀察10個(gè)高倍視野記平均值）。斷尾應(yīng)激后，神經(jīng)元c-fos表達(dá)增加明顯，說明 造模成功。
[0030] 通過對(duì)大鼠的ACTHX0RT，還有c-fos蛋白結(jié)果的觀察證實(shí)：可W通過斷尾來制作 大鼠的急性應(yīng)激反應(yīng)模型。本發(fā)明作為一種新型的急性應(yīng)激反應(yīng)大鼠模型造模方法具有并 發(fā)癥少、成模率高、重復(fù)性好等特點(diǎn)，且能排除其他的應(yīng)激反應(yīng)對(duì)機(jī)體的干擾，為系統(tǒng)的研 究急性應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)病機(jī)制提供了新的工具。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種大鼠急性應(yīng)激反應(yīng)的造模方法，其特征在于包括以下步驟： 1) 選擇體重280g-320g的健康雄性SD大鼠，實(shí)驗(yàn)前大鼠禁食12h，自由飲水； 2) 將選取的雄性SD大鼠按每100g體重4mg的劑量注射2%戊巴比妥鈉溶液，大鼠鎮(zhèn)靜 后俯臥，四肢固定于動(dòng)物操作臺(tái)上，在靠近尾端的尾干處，具體為S3和S4脊髓神經(jīng)之間，橫 切斷尾，即切斷支配尾部的神經(jīng)纖維，模擬外周神經(jīng)急性損傷造成的應(yīng)激反應(yīng)。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種大鼠急性應(yīng)激反應(yīng)的造模方法，包括以下步驟：選擇體重280g-320g的健康雄性SD大鼠，按每100g體重4mg的劑量注射2%戊巴比妥鈉溶液，大鼠鎮(zhèn)靜后俯臥，四肢固定于動(dòng)物操作臺(tái)上，在靠近尾端的尾干處，具體為S3和S4脊髓神經(jīng)之間，橫切斷尾，即切斷支配尾部的神經(jīng)纖維，模擬外周神經(jīng)急性損傷造成的應(yīng)激反應(yīng)。本發(fā)明造模方法，能避免造模的同時(shí)對(duì)大鼠造成額外的應(yīng)激反應(yīng)，是制作單純急性應(yīng)激反應(yīng)的最佳方式。該方法不影響其日常活動(dòng)，成模率高，致傷程度較一致，操作簡(jiǎn)單，結(jié)果穩(wěn)定，宜于標(biāo)準(zhǔn)化的急性應(yīng)激反應(yīng)模型。為急性應(yīng)激反應(yīng)的研究提供純粹、簡(jiǎn)便、可量化應(yīng)激程度的模型。
【IPC分類】A61D1/00
【公開號(hào)】CN105147410
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510364624
【發(fā)明人】蔣奕紅, 胡越
【申請(qǐng)人】桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院
【公開日】2015年12月16日
【申請(qǐng)日】2015年6月26日