一種含綠茶的植物組合物提取方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及中藥制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種含綠茶的植物組合物提取方法及應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 含綠茶的植物組合物由綠茶lOOg，龍牙草根60g、杜莖山70g、通?；?0g作為原料 藥制成，目前的提取方法是加水煎煮二次，每次2-3小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濃縮成稠膏，制 粒，干燥，壓制成1000片，包糖衣，即得，能清熱解毒。
[0003] 現(xiàn)有技術(shù)中，尚未有含綠茶的植物組合物在提取制備方面采用微波技術(shù)的報(bào)道， 而采用水煎煮的方法，工藝粗糖、落后，雜質(zhì)多，導(dǎo)致患者用量過(guò)大，不方便服用，嚴(yán)重影響 了本品在臨床上應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 發(fā)明目的：為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種含綠茶的植物組合物 提取方法。
[0005]本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種含綠茶的植物組合物在制備抑制大鼠膠質(zhì)瘤 C6細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
[0006] 技術(shù)方案：本發(fā)明的目的是通過(guò)如下的方案實(shí)現(xiàn)的：
[0007] -種含綠茶的植物組合物提取方法，植物組合物由綠茶lOOg，龍牙草根60g、杜莖 山70g、通?；?0g作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成：取上述原料藥，粉碎，加入 化的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次 4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到D101大孔吸附樹(shù)脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體 積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆粒 劑。
[0008] 上述一種含綠茶的植物組合物提取方法，制備方法中微波萃取功率為500W，每次 萃取6分鐘。
[0009] -種含綠茶的植物組合物在制備抑制大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，含 綠茶的植物組合物由綠茶lOOg，龍牙草根60g、杜莖山70g、通?；?0g作為原料藥制成，審U 備方法由下列步驟組成：取上述原料藥，粉碎，加入化的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn) 行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到D101 大孔吸附樹(shù)脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥， 得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。
[0010] 上述一種含綠茶的植物組合物在制備抑制大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng) 用，制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
[0011] 現(xiàn)有技術(shù)中，含綠茶的植物組合物每片〇.4g，每次4片，一日3次，采用本發(fā)明制備 成的含綠茶的植物組合物每片0. 4g，但含有的藥材量是原來(lái)的2倍，因此每次僅需2片，一 日服用3次，在具有更多活性成分的條件下大大減少了服用量。
【具體實(shí)施方式】
[0012] W下通過(guò)實(shí)施例形式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但不應(yīng)將此 理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于W下的實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均 屬于本發(fā)明的范圍。
[001引實(shí)施例1
[0014]取綠茶lOOg，龍牙草根60g、杜莖山70g、通?；?0g，粉碎，加入化的70 %乙醇，投 入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取 液，濃縮，加到D101大孔吸附樹(shù)脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收 乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑，每片0. 4g。
[001引 實(shí)施例2
[0016] 取綠茶lOOg，龍牙草根60g、杜莖山70g、通?；?0g，粉碎，加入化的70%乙醇，投 入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取 液，濃縮，加到D101大孔吸附樹(shù)脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收 乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成膠囊。
[0017] 實(shí)施例3
[0018] 取綠茶lOOg，龍牙草根60g、杜莖山70g、通梗花90g，粉碎，加入化的70%乙醇，投 入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取 液，濃縮，加到D101大孔吸附樹(shù)脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收 乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成顆粒劑。
[0019] 龍牙草根為菩薇科植物龍芽草的根。秋后采收，洗凈，除去蘆頭。味辛澀，溫，無(wú)毒。 治赤白頻疾，婦女經(jīng)閉，腫毒，驅(qū)緣蟲(chóng)。
[0020] 杜莖山為紫金?？贫徘o山屬植物杜莖山MaesajaponicaCrhunb. )Mo;ritzi，W根、 葉入藥。全年可采，洗凈曬干。桂風(fēng)利尿，止血，消腫。根：頭痛，腰痛，水腫，腹水；葉：外用 治創(chuàng)傷出血。本發(fā)明W根入藥。
[0021] 通?；?，拉下名為Abeliaengle;riana(Graebn. )Rehd.，六道木屬，科中文名：忍冬 科，根：理氣止痛，清熱燥濕。用于牙痛，高熱，火眼。果實(shí)或花：桂風(fēng)濕，解熱毒。用于風(fēng)濕 筋骨疼痛，外用于痛瘡紅腫。本發(fā)明W根入藥。
[0022] 實(shí)施例4 :含綠茶的植物組合物抑制大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究資料
[002引 1實(shí)驗(yàn)材料
[0024] 1. 1實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株
[00巧]大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞，南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中屯、實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞庫(kù)，DMEM+10%FBS常 規(guī)培養(yǎng)。
[0026] 1. 2實(shí)驗(yàn)藥物
[0027] 研究藥物：本發(fā)明含綠茶的植物組合物：按實(shí)施例1方法制備。
[0028]藥液儲(chǔ)液：稱取lOOmg含綠茶的植物組合物，溶于5ml無(wú)水乙醇中，0. 2ym濾器過(guò) 濾，500y1doff管分裝，-20°C存儲(chǔ)，同時(shí)0. 2ym濾器過(guò)濾無(wú)水乙醇W備對(duì)照組之用。
[002引 1. 3實(shí)驗(yàn)試劑
[0030] DMEM(GIBC0公司Cat.No. 12100-061Lot.No. 758137);胎牛血清（浙江天 杭生物科技有限公司Lot.No. 100419) ;NaHC03(上海久億化學(xué)試劑有限公司化t. No.11810-033Lot.No. 1088387) ;T巧psin(AMRESC0公司批號(hào)：2010/04);邸TA(AMRESC0 公司批號(hào)：2009/10);PenicillinGSodiumSalt(AMRESC0公司批號(hào)：2010242); Str巧tomycinSul化te(AMRESC0公司批號(hào)：2010382);無(wú)水乙醇（南京化學(xué)試劑有限公司 批號(hào)：080310182);MTT度iosha巧批號(hào)：0793);PBS(實(shí)驗(yàn)室自配）；
[0031] 1.4實(shí)驗(yàn)器材
[00礎(chǔ)萊卡倒置顯微鏡（德國(guó)Leica型號(hào)：DM1L);可見(jiàn)-紫外光微孔板檢測(cè)儀（美國(guó)MD公司型號(hào)：S陽(yáng)CTRAMAX190) ;C02培養(yǎng)箱（FORMA型號(hào)：3111);超凈臺(tái)（蘇凈集團(tuán)安泰公 司制造型號(hào)：SW-CJ-Z抑）；純水儀（美國(guó)Spring公司型號(hào)：S/N020579);精密移液器（法 國(guó)吉爾森公司型號(hào)：P2);電子天平（德國(guó)賽多利斯有限公司型號(hào)：BT323巧；全自動(dòng)高壓滅 菌鍋（日本SANYO公司型號(hào)：MLS-3020);臺(tái)式電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司型 號(hào)：畑G9123A);冰箱（西口子公司型號(hào)：KG18V2m);液氮罐仰S型號(hào)：2001);低速離屯、 機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠型號(hào)：KA-1000) ;0.濾器（MILLIP0RE型號(hào)：SLGP033RB);10cm 培養(yǎng)皿（肥ST公司）、96孔培養(yǎng)板（肥ST公司）；細(xì)胞計(jì)數(shù)板；離屯、管、移液管、Tips若干。 [003引 2實(shí)驗(yàn)方法
[0034] 1)大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞用DMEM+10%FBS于37°C、5%C02進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)（10cm培 養(yǎng)皿），當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期時(shí)，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml0. 25%膜 蛋白酶-0. 04%邸TA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞后 將其轉(zhuǎn)入離屯、管中，100化pm離屯、5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3X104個(gè)/ml。
[003引。將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180y1，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱 中（37°C，5%C02)常規(guī)培養(yǎng)。
[0036] 3)根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，一般長(zhǎng)至50% -70%，加入含綠茶的植物組合物溶液，繼續(xù) 培養(yǎng)2地。
[0037]4) 2地后加入20y1MTT溶液巧mg/ml，即0. 5 %MTT)，繼續(xù)培養(yǎng)地。
[003引 W4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200y1二甲基亞諷，置搖 床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀490nm處測(cè)量各孔的吸光值。 [003引 6)同時(shí)設(shè)置本底（不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液），對(duì)照孔（細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解 介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞諷），每組設(shè)定6個(gè)復(fù)孔。
[0040] 7)結(jié)果W藥物對(duì)細(xì)胞的抑制率表示：
[0041] 細(xì)胞增值抑制率（％ )=(對(duì)照孔0D值-給藥孔0D值）/對(duì)照孔0D值X100 %。 實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
[004引 3統(tǒng)計(jì)處理
[0043] 采用MicrosoftExcel2003軟件中的相關(guān)分析和Studentt檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)W mean+S.D.表不。
[0044] 4實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[004引 MTT法實(shí)驗(yàn)后統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時(shí)，對(duì)大鼠膠質(zhì)瘤 C6細(xì)胞增殖抑制有差異（P<0. 05)，劑量在lOmg/ml時(shí)該差異具有顯著性（P<0. 01)，當(dāng)劑量 達(dá)到15-20mg/ml時(shí)有極顯著性差異（P<0. 001)。
[0046] 表1含綠茶的植物組合物對(duì)大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖抑制影響研究
[0047] 犀±如）
[0048]
[0049] 注：與對(duì)照組比較，沖<0. 01 ;*沖<0. 001
[0050] 5實(shí)驗(yàn)結(jié)論
[0051] 含綠茶的植物組合物可W抑制大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖，減少大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞 的細(xì)胞生長(zhǎng)數(shù)目，該作用呈劑量依賴性。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種含綠茶的植物組合物提取方法，其特征在于植物組合物由綠茶l〇〇g，龍牙草根 60g、杜莖山70g、通梗花90g作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成：取上述原料藥，粉 碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2 次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹(shù)脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5 倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠 囊或顆粒劑。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種含綠茶的植物組合物提取方法，其特征在于制備方法中微 波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。3. -種含綠茶的植物組合物在抑制大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在 于含綠茶的植物組合物由綠茶l〇〇g，龍牙草根60g、杜莖山70g、通?；?0g作為原料藥制 成，制備方法由下列步驟組成：取上述原料藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝 置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加 到DlOl大孔吸附樹(shù)脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮 并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述一種含綠茶的植物組合物在抑制大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖藥物 中的應(yīng)用，其特征在于制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種含綠茶的植物組合物提取方法，由綠茶100g，龍牙草根60g、杜莖山70g、通?；?0g作為原料藥制成，采用微波提取方法制備而成，使得含量有很大提高，用量減少，本發(fā)明還提供了含綠茶的植物組合物在制備抑制大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
【IPC分類】A61K36/82, A61P35/00
【公開(kāi)號(hào)】CN105147869
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510641893
【發(fā)明人】陳愛(ài)華
【申請(qǐng)人】陳愛(ài)華
【公開(kāi)日】2015年12月16日
【申請(qǐng)日】2015年10月3日