脂質(zhì)體制劑及制造
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種新穎的脂質(zhì)體制劑W及用于所述脂質(zhì)體制劑的制造方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 本領(lǐng)域已知的是，脂質(zhì)體用作載體將治療性試劑輸送至被祀向的細(xì)胞W治療各種 醫(yī)療病癥的載體。在一種應(yīng)用中，脂質(zhì)體可W被配制成包封能夠被巨隧細(xì)胞選擇性吞隧的 藥學(xué)試劑。一旦吞隧，所述脂質(zhì)體就在細(xì)胞內(nèi)釋放出所述試劑，從而抑制巨隧細(xì)胞的炎癥性 功能W及其他影響。
[0003] 現(xiàn)有技術(shù)描述了用于制備運(yùn)樣的脂質(zhì)體的若干種方法（參見(jiàn)例如M6nkk6nen, J.等，1994,J.DrugTarget, 2:299-308;.M6nkk6nen,J.等，1993, Tissue Int.,53:139-145；LasicDD.,LiposomesTechnologyInc. ,Elsevier, 1993, 63-105.(chapter3)!WinterhalterM,Lasic孤，QiemF*hysLipids, 1993 ;54 (1-3) :35-43)0在 一種運(yùn)樣的方法中，脂質(zhì)體被形成為多堆疊的液態(tài)晶體雙層，所述液態(tài)晶體雙層被水化成 經(jīng)水化的液態(tài)片材，在振動(dòng)的過(guò)程中該脂質(zhì)片材脫離并且自行閉合W形成大的多層囊泡 (MLV)，運(yùn)稱為脂質(zhì)薄膜水化技術(shù)。一旦形成運(yùn)些顆粒，運(yùn)些顆粒的尺寸取決于在該工藝的 隨后步驟中所使用的方法，例如聲能（聲波處理）或機(jī)械能（擠出）。聲波處理通常制得小 的單層囊泡（SUV)并且需要浴式和/或探頭末端式超聲儀。作為選擇，脂質(zhì)擠出（其在高壓 下（高達(dá)5(K)psi)迫使脂質(zhì)懸浮液通過(guò)一系列的聚碳酸醋過(guò)濾器（通常為0. 8ym、0. 4ym、 0. 2ym和0.Iym膜）），制得具有與所用的過(guò)濾器的孔隙尺寸近似的直徑的顆粒。運(yùn)些方 法限于小批量生產(chǎn)，主要用于研究目的。而且，高壓擠出技術(shù)與高操作成本和時(shí)間相關(guān)聯(lián)。 因此，本領(lǐng)域仍然需要可用于商業(yè)規(guī)模制造的脂質(zhì)體制造方法，該方法具有再現(xiàn)性并且解 決了包括脂質(zhì)體生產(chǎn)的質(zhì)量控制、穩(wěn)定性、規(guī)模化和無(wú)菌在內(nèi)的問(wèn)題。
[0004] 另外，本領(lǐng)域已知的是，脂質(zhì)體制劑在尺寸和形狀上基本是不均勻的，而運(yùn)一點(diǎn)是 提供無(wú)菌產(chǎn)品并且避免異常大的脂質(zhì)體的潛在毒副作用的藥物組合物的關(guān)鍵特征。目前， 難W制造具有均勻尺寸的脂質(zhì)體制劑。通過(guò)一系列的過(guò)濾器包括例如IOOnm聚碳酸醋過(guò)濾 器的多層囊泡的擠出工藝無(wú)法一致地生產(chǎn)出具有基本均勻的尺寸為IOOnm的脂質(zhì)體群的 制劑。實(shí)際上，根據(jù)脂質(zhì)體的物理特性，例如可壓縮性和/或穩(wěn)定性，擠出囊泡的平均囊泡 直徑可能相當(dāng)大程度上取決于所使用的過(guò)濾器的類型和尺寸。因此，需要能夠生產(chǎn)出尺寸 和形狀基本均勻的脂質(zhì)體的制造方法。
[0005] 而且，脂質(zhì)體制劑的很多物理特性影響對(duì)脂質(zhì)體的細(xì)胞反應(yīng)并且影響作為藥物組 合物的脂質(zhì)體的有效性。脂質(zhì)體制劑的物理特性在很多方面受到制造方法的影響。然而，現(xiàn) 有技術(shù)沒(méi)有解決如何在配制工藝中能夠控制脂質(zhì)體性能W控制制造效率和脂質(zhì)體穩(wěn)定性。 因此，需要一種大規(guī)模的制造工藝，該制造工藝具有成本效率，而且還能夠控制脂質(zhì)體制劑 的特性W生產(chǎn)出基本均勻并且適合于臨床使用的脂質(zhì)體。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明描述了包封治療性試劑的新穎脂質(zhì)體。本發(fā)明還設(shè)及具有高度尺寸均勻性 的脂質(zhì)體制劑，運(yùn)樣的尺寸均勻性導(dǎo)致副作用最小化并且增加了滅菌工藝的可信度。本發(fā) 明還描述了有效的并且具有成本效率的制造方法，該方法用于在低壓擠出條件下制備脂質(zhì) 體。通過(guò)運(yùn)種方法配制的脂質(zhì)體具有期望的特性和有效的治療性能。
[0007] 所述脂質(zhì)體制劑的特征在于脂質(zhì)體具有期望的組成和物理特性。所述脂質(zhì)體包含 包封治療性試劑的脂質(zhì)組分。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，所述脂質(zhì)組分包含優(yōu)選為摩爾比是 3:1:2值SPC:DSPG:膽固醇）的二硬脂酷憐脂酷膽堿值SPC)、二硬脂酷憐脂酷甘油值SPG) 和膽固醇。
[0008] 所述脂質(zhì)體由脂質(zhì)組分和治療性試劑組成，具有W重量計(jì)為約1:5至1:8優(yōu)選為 1:6至1:7的所述治療性試劑的質(zhì)量和所述脂質(zhì)組分的質(zhì)量的比率（稱為藥物：脂質(zhì)比）。 所述藥物：脂質(zhì)比增強(qiáng)了穩(wěn)定性和有效性，并且還影響藥物的釋放和脂質(zhì)體完整性。運(yùn)些和 其他結(jié)構(gòu)特性賦予本制劑預(yù)想不到的益處。
[0009] 本發(fā)明的脂質(zhì)體的尺寸范圍為30皿至500皿，優(yōu)選為70皿至120皿，100皿至 300皿，100皿至180皿、和70皿至150皿，運(yùn)取決于所使用的載體和治療性試劑的類型。在 一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)體的尺寸可W為80 +5nm。
[0010] 所述脂質(zhì)體組合物的其他物理特性也顯著地有助于其穩(wěn)定性和有效性。例如，所 述脂質(zhì)體的電導(dǎo)率可能會(huì)影響選擇性吸收到吞隧性細(xì)胞中。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述電導(dǎo) 率為13. 5ms/cm至17. 5ms/cm。類似地，所述制劑的外部和內(nèi)部滲透壓（osmolality)影響穩(wěn) 定性和有效性。優(yōu)選的是，外部滲透壓與人類身體的滲透壓相匹配，而內(nèi)部滲透壓低至足W 增強(qiáng)所述制劑的穩(wěn)定性。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述內(nèi)部滲透壓為340osmol/kg至440osmol/ kg。另一個(gè)有利的參數(shù)為所述脂質(zhì)體和/或所述脂質(zhì)體制劑的pH。例如，所述脂質(zhì)體制劑 的約6. 9的內(nèi)部抑對(duì)長(zhǎng)期穩(wěn)定性W及藥物滲漏速率和藥物包封能力具有有利的影響。
[0011] 本發(fā)明的所述脂質(zhì)體與現(xiàn)有技術(shù)的那些脂質(zhì)體相比相對(duì)剛性，運(yùn)是作為具有可壓 縮性較低的脂質(zhì)體膜的特征。本發(fā)明的脂質(zhì)體具有小于〇.7ml/g的可壓縮性。由于它們具 有較大的剛性，因此本發(fā)明的所述脂質(zhì)體具有改善的穩(wěn)定性和貨架壽命。
[0012] 所述脂質(zhì)體制劑還具有新穎且有用的特性。本發(fā)明的所述脂質(zhì)體制劑由尺寸和形 狀分布基本均勻同時(shí)相對(duì)剛性的脂質(zhì)體組成。所述制劑從一個(gè)脂質(zhì)體到另一個(gè)脂質(zhì)體尺寸 變化很小。所述脂質(zhì)體的根據(jù)多分散指數(shù)（PolyDiversityIndex,"PDI")測(cè)得的均勻性 小于0. 075,優(yōu)選為約0. 02至0. 05,說(shuō)明是具有高度均勻性的組合物。因此，本發(fā)明的所述 脂質(zhì)體制劑有益地降低了與大脂質(zhì)體相關(guān)聯(lián)的不利事件的發(fā)生率，并且允許有效地進(jìn)行除 菌過(guò)濾。
[0013] 本發(fā)明的另一個(gè)方面是用于制造脂質(zhì)體制劑的方法。所述制造方法包括如下步 驟：（1)將治療性試劑和預(yù)選擇的脂質(zhì)混合W形成囊泡；(2)在單階段通過(guò)單尺寸設(shè)計(jì)過(guò)濾 器擠出所述囊泡；和（3)超濾。超濾后，產(chǎn)品可選地被標(biāo)準(zhǔn)化到期望的最終濃度。因?yàn)椴襟E 2的所述擠出作為在低壓下的單階段擠出進(jìn)行，所W本方法相對(duì)于使用多階段的高壓擠出 節(jié)約了操作成本和時(shí)間并且增加了產(chǎn)率。運(yùn)些制造步驟適合于大規(guī)模生產(chǎn)。
[0014] 在所述制造方法的一個(gè)實(shí)施方式中，所述制劑通過(guò)如下步驟制備：（1)將治療性 試劑與包含摩爾比為約3:1:2的DSPC、DSPG和膽固醇的脂質(zhì)混合W形成囊泡，使得所述治 療性試劑與脂質(zhì)的質(zhì)量比為約1:5至1:8;(2)在單階段通過(guò)具有約100皿的孔隙尺寸的過(guò) 濾器擠出所述囊泡；和（3)超濾。
[0015] 本發(fā)明的又一個(gè)方面是根據(jù)上文所述的制造步驟制得的脂質(zhì)體制劑。所述制劑包 含多個(gè)脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體由一定量的脂質(zhì)組分組成，所述脂質(zhì)組分包封治療性試劑。例 如，所述脂質(zhì)組分包含摩爾比為約3:1:2的DSPC、DSPG和膽固醇，并且所述治療性試劑與脂 質(zhì)組分的質(zhì)量比可W為約1:5至1:8。所述制劑通過(guò)如下步驟制造：（1)將治療性試劑和預(yù) 選擇的脂質(zhì)混合W形成囊泡；（2)在單階段通過(guò)單尺寸設(shè)計(jì)過(guò)濾器擠出所述囊泡；和（3)超 濾。超濾后，產(chǎn)品可W可選地被標(biāo)準(zhǔn)化到期望的最終濃度。優(yōu)選的是，根據(jù)本方法制得的所 述制劑具有小于0. 075的PDI，優(yōu)選具有0. 02至0. 05的PDI。本方法生產(chǎn)出具有新穎且有 用的特征的脂質(zhì)體制劑，所述特征包括例如所述脂質(zhì)組分的3:1:2的比率、藥物：脂質(zhì)比、 PDI、剛性、pH、滲透壓和電導(dǎo)率。
【附圖說(shuō)明】
[0016] 圖1是本發(fā)明的所述脂質(zhì)體制劑的制造方法的流程圖。
[0017] 圖2表示總結(jié)了根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面的用于IV輸注5mg/ml的劑量強(qiáng)度的1升 脂質(zhì)體阿倫麟酸鹽（alen化onate)的制造方法及其過(guò)程控制參數(shù)的流程圖。
[0018] 圖3是根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面的脂質(zhì)體阿倫麟酸鹽的TEM圖像。
[0019] 圖4是比較各種脂質(zhì)體制劑的比可壓縮性的圖。
[0020] 圖5A是本發(fā)明的所述脂質(zhì)體制劑的尺寸分布的圖。
[0021] 圖5B是現(xiàn)有技術(shù)的脂質(zhì)體制劑的尺寸分布的圖。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 本發(fā)明設(shè)及用于各種疾病的治療的一種新穎的脂質(zhì)體、制劑及其制造方法。所述 制劑包含多個(gè)包封治療性試劑或"被包封的試劑"的脂質(zhì)體。每個(gè)脂質(zhì)體的物理特性促進(jìn)了 所述脂質(zhì)體制劑的穩(wěn)定性和有效性。所述制劑的特征在于尺寸和形狀基本均勻的脂質(zhì)體。 而且，本發(fā)明還描述了的用于所述脂質(zhì)體制劑的有效且具有成本效率同時(shí)滿足大規(guī)模生產(chǎn) 的需要的制造方法。本發(fā)明還進(jìn)一步設(shè)及通過(guò)所述制造方法制得的具有新穎且有用的性能 的制劑。 陽(yáng)02引 A.脂質(zhì)體的組分
[0024] 本發(fā)明設(shè)及新穎且有用的脂質(zhì)體形式。不同的脂質(zhì)體組分可W被用來(lái)形成本發(fā) 明的所述脂質(zhì)體。優(yōu)選的是，所述脂質(zhì)組分是非毒性生物可相容性脂質(zhì)，例如，如由憐脂 酷-膽堿、憐脂酷甘油和/或膽堿制得的脂質(zhì)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)組分 包含二硬脂酷憐脂酷膽堿值SPC)、二硬脂酷憐脂酷甘油值SPG)和膽固醇，優(yōu)選的是它們的 摩爾比為約3:1:2值SPC:DSPG:Chol(膽固醇））。
[00巧]所述脂質(zhì)組分包封治療性試劑，其中兩種組分具有預(yù)選擇的質(zhì)量。本文使用的"藥 物脂質(zhì)比"（或藥物：脂質(zhì)比）是指W質(zhì)量計(jì)所述藥物與所述脂質(zhì)組分的相對(duì)量，其包括所 述脂質(zhì)體和/或所述制劑。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)體具有W重量計(jì)為約1:5 至1:8,優(yōu)選為1:6至1:7的藥物：脂質(zhì)比。
[0026]B.脂質(zhì)體的物理性能
[0027] 所述脂質(zhì)體的各種物理參數(shù)和特性可能影響所述制劑的均勻性、穩(wěn)定性和有效 性。所述物理特性包括（1)滲透壓（所述脂質(zhì)體的內(nèi)部和外部）、（2)電導(dǎo)率（所述脂質(zhì)體 的內(nèi)部和外部）、（3)藥物脂質(zhì)比、（4)抑（所述脂質(zhì)體的內(nèi)部和外部）和（5)所述組合物中 所使用的藥物和脂質(zhì)的類型。
[002引滲透壓是所述脂質(zhì)體制劑的溶質(zhì)的濃度的度量。本文使用的術(shù)語(yǔ)"滲透壓"是指 每千克溶劑的由溶質(zhì)摩爾數(shù)限定的W溶質(zhì)的滲摩（osmol)表示的溶質(zhì)濃度的量度（osmol/ kg)。內(nèi)部滲透壓是溶質(zhì)在所述脂質(zhì)體內(nèi)的濃度，而外部滲透壓是溶質(zhì)在所述脂質(zhì)體外部的 濃度。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)體具有低的內(nèi)部脂質(zhì)體滲透壓。內(nèi)部滲透壓 可W通過(guò)改變被包封在所述脂質(zhì)體內(nèi)的藥物的量來(lái)進(jìn)行調(diào)節(jié)?，F(xiàn)有技術(shù)描述了含有盡可能 多的藥物的脂質(zhì)體，導(dǎo)致脂質(zhì)體具有高的滲透壓（高包封比率）。然而，本發(fā)明公開(kāi)了具有 比現(xiàn)有技術(shù)的那些脂質(zhì)體低的滲透壓（或者低的包封比率）的脂質(zhì)體。如本文所公開(kāi)的較 低的滲透壓即約340osmol/kg至440osmol/kg的滲透壓改善了所述脂質(zhì)體的穩(wěn)定性和所述 脂質(zhì)體在所述制劑中的均勻性。實(shí)現(xiàn)低的內(nèi)部滲透壓的一個(gè)方式是降低被包封在所述脂質(zhì) 體制劑中的治療性試劑的量。另一種方式是降低內(nèi)部滲透壓，運(yùn)不需要改變藥物：脂質(zhì)比， 而是利用非帶電性的試劑例如某些本領(lǐng)域已知的多糖或者糖。
[0029] 外部滲透壓優(yōu)選與身體的滲透壓是等滲的，特別是對(duì)于可注射制劑，W與身體的 滲透壓等滲。因此，外部滲透壓優(yōu)選為相對(duì)恒定。本發(fā)明的所述內(nèi)部滲透壓和外部滲透壓 導(dǎo)致產(chǎn)品具有高的穩(wěn)定性、低的藥物滲漏速率和所述脂質(zhì)體的適當(dāng)?shù)乃幬锇饽芰Α?br>[0030] 本文使用的術(shù)語(yǔ)"電導(dǎo)率"是指所述脂質(zhì)體基于溶液的離子含量而導(dǎo)電的能力。電 導(dǎo)率與脂質(zhì)體的離子含量有關(guān)并且影響所述脂質(zhì)體制劑的穩(wěn)定性、藥物滲漏速率和藥物包 封能力。所述脂質(zhì)體的電導(dǎo)率為約13. 5ms/cm至17. 5ms/cm。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中， 被包封的藥物試劑帶有電荷。注意帶電荷的藥物在所述脂質(zhì)體的電導(dǎo)率和滲透壓之間具有 一對(duì)一的相關(guān)性。因此，改變準(zhǔn)備被包封的帶電荷的試劑的量會(huì)成比例地影響運(yùn)兩種性能。 在一個(gè)替代性的實(shí)施方式中，可W使用中性的（非帶電性的）藥物試劑。在使用例如中性 試劑如多糖來(lái)調(diào)節(jié)電導(dǎo)率的情況中，滲透壓獨(dú)立于藥物的濃度，因此可W獨(dú)立于所述試劑 的濃度進(jìn)行控制。
[0031] 本發(fā)明