巖白菜提取物及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于化妝品和醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從一種納西族傳統(tǒng)藥用植物巖白菜 中提取天然活性物質(zhì)一巖白菜提取物，以其為活性成分的化妝品或藥物，以及巖白菜提取 物在制備保濕、嫩膚、抗皺、防曬、美白等多種皮膚化妝品中的應(yīng)用，還有在制備治療或預(yù)防 皮膚病的藥物中的應(yīng)用 技術(shù)背景
[0002] 巖白菜（Bergenia purpurascens (Hook. f. et Thoms. ) Engl.)，又名呆白菜、矮白 菜，為虎耳草科巖白菜屬植物，根莖粗，多節(jié)，生肉質(zhì)須根。葉基生，膜質(zhì)，葉片倒卵形肉質(zhì)， 總狀花序，花白色或粉紅色。巖白菜主要分布海拔3700米以上，喜溫暖濕潤(rùn)和半陰環(huán)境，耐 寒性強(qiáng)，怕高溫和強(qiáng)光，不耐干旱。
[0003] 巖白菜的利用方式常見(jiàn)為藥用，是納西族傳統(tǒng)的外傷止血藥物。巖白菜具有止血、 消炎、止咳等多種藥用功能，《四川中藥志》中記載"巖白菜：補(bǔ)強(qiáng)壯，止血，止咳。治肝脾虛 弱，勞傷吐血，內(nèi)傷咯血，肺病咳喘"。此外，由于巖白菜自身的花葉倶美的生理形態(tài)，也被廣 泛的用作觀賞植物。本發(fā)明通過(guò)實(shí)驗(yàn)提取巖白菜根狀莖中的有效成分，并進(jìn)行了細(xì)胞毒性 及皮膚化妝品活性實(shí)驗(yàn)，明確了巖白菜提取物不僅擁有良好的安全性還表現(xiàn)出優(yōu)秀的雙重 皮膚化妝品活性即良好的DPPH自由基清除效果和良好的酪氨酸酶活性抑制效果，使之成 為了良好的天然護(hù)膚品原材料來(lái)源，為巖白菜的開(kāi)發(fā)和利用提供了更好、更佳的途徑，對(duì)于 巖白菜未來(lái)的可持續(xù)利用具有重大意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明目的在于提供巖白菜提取物，以其為活性成分的化妝品，它們的制備方法， 及其在制備化妝品中的應(yīng)用。本發(fā)明明確了巖白菜提取物具有良好的護(hù)膚效果和安全性， 使其成為很好的天然護(hù)膚化妝品原材料。
[0005] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：
[0006] 巖白菜提取物，由下述方法制備而得：取巖白菜根狀莖，研成粉末，用巖白菜的 15-30倍量的85% -95%乙醇，冷浸18-28h，然后用布氏漏斗收集濾液，重復(fù)2-5次，將濾液 減壓蒸餾，濃縮濾液，低溫干燥，得粗提物，將粗提物經(jīng)大孔樹(shù)脂吸附脫色，80-95 %乙醇洗 脫后，將洗脫液濃縮蒸干，低溫冷凍干燥，得巖白菜提取物。
[0007] 化妝品，由所述的巖白菜提取物和化妝品常用載體組成，所述的載體選自一種或 多種含水體系，甘油、C1-4醇、脂肪醇、多元醇、脂肪醚、脂肪酯、乙二醇、丙二醇、植物油、礦 物油、脂質(zhì)體、層狀類(lèi)脂材料、硅油、水，或者它們的組合。
[0008] 所述的巖白菜提取物在制備化妝品中的應(yīng)用。
[0009] 所述的巖白菜提取物在制備保濕或嫩膚或抗皺或防曬或美白或抗氧化的化妝品 中的應(yīng)用，以及在制備改善皮膚代謝功能或皮障功能的化妝品中的應(yīng)用。
[0010] 所述的巖白菜提取物在制備麻醉劑、抗真菌劑、抗炎劑、防腐劑、螯合劑、著色劑、 脫色劑、軟化劑、乳化劑、脫落劑、成膜劑、芳香劑、濕潤(rùn)劑、驅(qū)蟲(chóng)劑、潤(rùn)滑劑、增濕劑、藥劑、光 穩(wěn)定劑、防腐劑、皮膚保護(hù)劑、皮膚滲透增強(qiáng)劑、防曬劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑、增稠劑、粘度 調(diào)節(jié)劑、維生素中的應(yīng)用。
[0011] 所述的巖白菜提取物在制備酪氨酸酶活性抑制劑以及在制備抗氧化劑中的應(yīng)用。
[0012] 本發(fā)明同時(shí)提供預(yù)防或治療皮膚病的藥物組合物，由所述的巖白菜提取物和藥物 常用載體組成。
[0013] 以及，所述的巖白菜提取物在制備預(yù)防或治療皮膚病的藥物中的應(yīng)用。
[0014] 本發(fā)明還提供了巖白菜提取物的制備方法，該方法包括下述步驟：取巖白菜根狀 莖，研成粉末，用巖白菜的15-30倍量的85 % -95 %乙醇，冷浸18-28h，然后用布氏漏斗收集 濾液，重復(fù)2-5次，將濾液減壓蒸餾，濃縮濾液，低溫干燥，得粗提物，將粗提物經(jīng)大孔樹(shù)脂 吸附脫色，80-95%乙醇洗脫后，將洗脫液濃縮蒸干，低溫冷凍干燥，得巖白菜提取物。
[0015] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具備了如下的優(yōu)益性：本發(fā)明通過(guò)對(duì)巖白菜植物進(jìn)行濃 縮提取得到巖白菜提取物，對(duì)巖白菜提取物進(jìn)行了細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)和皮膚化妝品活性實(shí)驗(yàn)， 證明了目標(biāo)提取物的安全性，明確了目標(biāo)提取物優(yōu)良的化妝品活性。本發(fā)明提供了巖白菜 的一種新的更佳的利用類(lèi)型，同時(shí)拓展了天然護(hù)膚品植物原料的來(lái)源。
【附圖說(shuō)明】：
[0016] 圖1 :巖白菜對(duì)DPPH自由基的清除活性；
[0017] 圖2 :巖白菜提取物對(duì)酪氨酸酶的抑制作用；
[0018] 圖3 :巖白菜提取物的制備工藝流程圖。
【具體實(shí)施方式】：
[0019] 以下結(jié)合附圖，用本發(fā)明的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)敘述，但并不限制本發(fā)明 的范圍。
[0020] 實(shí)施例1 :
[0021] 巖白菜提取物的制備：
[0022] 稱(chēng)取巖白菜樣品（Bergeniapurpurascens(Hook.f.etThoms. )Engl.)(根狀 莖）168，將樣品研成粉末狀，用85%乙醇25倍量（481-4821^)冷浸2411，然后用布氏漏斗 收集濾液，重復(fù)3次。將濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸餾，濃縮濾液，濃縮濾液低溫干燥，得粗提 物。將粗提物經(jīng)大孔樹(shù)脂（DlOl)吸附脫色，95%乙醇洗脫后，將洗脫液濃縮蒸干，低溫冷凍 干燥，得巖白菜提取物2. 2g，提取率為13. 75%。
[0023] 或者，稱(chēng)取巖白菜樣品（Bergenia purpurascens (Hook. f. et Thoms. ) Engl.)(根 狀莖）16g，將樣品研成粉末狀，用95 %乙醇20倍量冷浸20h，然后用布氏漏斗收集濾液，重 復(fù)4次。將濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸餾，濃縮濾液，濃縮濾液低溫干燥，得粗提物。將粗提 物經(jīng)大孔樹(shù)脂（D101)吸附脫色，90%乙醇洗脫后，將洗脫液濃縮蒸干，低溫冷凍干燥，得巖 白菜提取物2. 3g，提取率為14. 38%。
[0024] 實(shí)施例2 :
[0025]巖白菜提取物的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)：通過(guò)MTS比色法，確定樣品的CC5Q(50%cytotoxic concentration)，即對(duì)50%的細(xì)胞產(chǎn)生毒性時(shí)的藥物濃度，從而確定以下活性實(shí)驗(yàn)的安全 樣品濃度。
[0026] 實(shí)驗(yàn)方法：96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，將B16細(xì)胞與不同濃度的待測(cè)藥物溶液混合，設(shè)定 3個(gè)重復(fù)孔，同時(shí)設(shè)置不含藥物的空白對(duì)照，37°C，5% CO2培養(yǎng)24h，采用MTS比色法檢測(cè)細(xì) 胞毒性，酶標(biāo)儀測(cè)定OD值，測(cè)定波長(zhǎng)490nm。計(jì)算得到CC 5。值。
[0027] 細(xì)胞存活率（％ )=實(shí)驗(yàn)孔OD490nni/空白孔OD490nni X 100 %
[0028] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：紅花花序提取物的細(xì)胞存活率為99. 532%?？擅黠@看出，在細(xì)胞培養(yǎng) 24h后，細(xì)胞數(shù)量幾乎沒(méi)有發(fā)生變化，說(shuō)明巖白菜提取物對(duì)細(xì)胞沒(méi)有毒害作用，作為皮膚化 妝品的天然原料的安全性是有保證的。
[0029] 實(shí)施例2 :
[0030] DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)：將待測(cè)藥物與DPPH(終濃度為100 y M)混合反應(yīng)，設(shè)定3個(gè) 重復(fù)孔，同時(shí)設(shè)置不含藥物的空白對(duì)照和Trolox陽(yáng)性對(duì)照，30°C，lh，酶標(biāo)儀測(cè)定OD值，檢 測(cè)波長(zhǎng)為515nm。計(jì)算得到抗氧化率。
[0031] 抗氧化率（％) = (1-實(shí)驗(yàn)孔 OD515nni/ 空白孔 OD515J X 100%
[0032] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在實(shí)驗(yàn)中，巖白菜提取物表現(xiàn)出顯著的DPPH自由基清除能力，并且根 據(jù)濃度梯度，呈現(xiàn)良好的量效關(guān)系（見(jiàn)圖1)，可被用作具備抗皺或防曬潛力化妝品活性的 良好天然植被來(lái)源。
[0033] 實(shí)施例3 :
[0034] 酪氨酸酶抑制實(shí)驗(yàn)：將待測(cè)藥物與L_Dopa(終濃度I. 25mM)混合，加入酪氨酸酶 (終濃度25U/mL)開(kāi)始反應(yīng)，設(shè)定3個(gè)重復(fù)孔，同時(shí)設(shè)置不含藥物的空白對(duì)照和Kojic Acid 陽(yáng)性對(duì)照，室溫，5min，酶標(biāo)儀測(cè)定OD值，檢測(cè)波長(zhǎng)為490nm。計(jì)算得到酪氨酸酶活性抑制 率。
[0035] 酪氨酸酶活性抑制率（％)=〔 1 _ (樣品OD490nni-樣品本底對(duì)照OD490nJ /實(shí)驗(yàn)對(duì)照 孔 OD490J X 100 %
[0036] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在對(duì)照實(shí)驗(yàn)中，巖白菜提取物（IC5。= 49. 302 y g/mL)表現(xiàn)出有對(duì)酪氨 酸酶良好的抑制效果（見(jiàn)圖2)。說(shuō)明巖白菜提取物具美白或去黑色素（斑）的皮膚化妝品 活性應(yīng)用潛力，可被作為美白或去黑色素天然化妝品良好的植被原材料。
[0037] 本發(fā)明提供具有巖白菜提取物或巖白菜提取物混合物的局部組合物，它在藥學(xué)上 或化妝品上可接受的載體。這些組合物能抑制皮膚的酪氨酸酶活性，B16細(xì)胞黑色素生成 抑制活性，彈性蛋白活性，TNF-a分泌抑制活性，促膠原蛋白分泌活性，抑制皮膚的氧化。 這些組合物能用于細(xì)紋和/皺紋，皮膚紅疹，干性、敏感肌膚，皮膚瘙癢，膚色不均或皮膚黑 斑，皮膚發(fā)炎和其它與此相關(guān)的皮膚不適癥。這些組合物包含有從巖白菜中得到的提取 物或從該植物中得到的活性成分。這些組合物能進(jìn)一步抑制皮膚的脂肪氧化酶，COX(環(huán) 氧化酶）活性，MMP-I和MMP-3活性。這些組合物中巖白菜提取物的含量是組合物總重的 O.OOlwt%-20.0 wt%。這些組合物可以是護(hù)膚液、護(hù)膚霜或乳劑等。巖白菜的提取物可以 是水溶性提取物，該提取物可以用醇（例如甲醇、乙醇、丙醇，丁醇等）提取。
[0038] 本發(fā)明中含有巖白菜提取物的組合物可用于局部皮膚護(hù)理或護(hù)發(fā)產(chǎn)品。這些組合 物可以做成乳化劑（例如水包油、油包水、硅油包水，水包硅油，水包油包水，油包水包油， 油包水包硅油等），霜?jiǎng)?，護(hù)膚液，液體（例如水劑或水-醇溶液），無(wú)水基質(zhì)（例如唇膏或 粉劑等），啫喱，油膏，奶液，軟膏，噴霧劑，固體劑，眼霜等。局部施用這些組合物可減輕皮 膚紅斑的外觀（如皮膚紅斑、過(guò)敏性皮膚、皮膚紅腫、發(fā)炎等），還可減輕由于紅斑引起的疼 痛。紅斑一般可由皮膚日光灼傷、皮膚的電療、皮膚燒傷、接觸性過(guò)敏、全身過(guò)敏、皮膚毒性、 鍛煉、蟲(chóng)咬、細(xì)菌感染、病毒感染、真菌感染、寄生原蟲(chóng)感染、按摩和吹風(fēng)引起的皮炎等。可治 療干性皮膚、敏感皮膚或皮膚搔癢或減小膚色不均的外觀?？蓽p