一種含升麻的植物組合物提取方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種含升麻的植物組合物提取方法及應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 含升麻的植物組合物由升麻100份，牛耳巖白菜40份、毛葉輪環(huán)藤50份、蘆子蘭 40份作為原料藥制成，目前的提取方法是加水煎煮二次，每次2-3小時，合并煎液，濾過，濃 縮成稠膏，制粒，干燥，包糖衣，即得。
[0003] 現(xiàn)有技術(shù)中，尚未有含升麻的植物組合物在提取制備方面采用微波技術(shù)的報道， 而采用水煎煮的方法，工藝粗糙、落后，雜質(zhì)多，導(dǎo)致患者用量過大，不方便服用，嚴(yán)重影響 了本品在臨床上應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 發(fā)明目的：為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種含升麻的植物組合物 提取方法。
[0005] 本發(fā)明的另一個目的在于提供一種含升麻的植物組合物在制備抑制大鼠腎上腺 嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
[0006] 技術(shù)方案：本發(fā)明的目的是通過如下的方案實現(xiàn)的：
[0007] -種含升麻的植物組合物提取方法，植物組合物由升麻100份，牛耳巖白菜40份、 毛葉輪環(huán)藤50份、蘆子蘭40份作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成：取上述原料藥， 粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取 2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5 倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠 囊或顆粒劑。
[0008] 上述一種含升麻的植物組合物提取方法，制備方法中微波萃取功率為500W，每次 萃取6分鐘。
[0009] -種含升麻的植物組合物在制備抑制大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞增殖藥 物中的應(yīng)用，含升麻的植物組合物由升麻100份，牛耳巖白菜40份、毛葉輪環(huán)藤50份、蘆子 蘭40份作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成：取上述原料藥，粉碎，加入2L的70% 乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘， 合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液， 減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。
[0010] 上述一種含升麻的植物組合物在制備抑制大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞增 殖藥物中的應(yīng)用，制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
[0011] 現(xiàn)有技術(shù)中，含升麻的植物組合物每片0. 4g，每次4片，一日3次，采用本發(fā)明制備 成的含升麻的植物組合物每片〇. 4g，但含有的藥材量是原來的2倍，因此每次僅需2片，一 日服用3次，在具有更多活性成分的條件下大大減少了服用量。
【具體實施方式】
[0012] 以下通過實施例形式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不應(yīng)將此 理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均 屬于本發(fā)明的范圍。
[0013] 實施例1
[0014] 取升麻100份，牛耳巖白菜40份、毛葉輪環(huán)藤50份、蘆子蘭40份，粉碎，加入2L 的70 %乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8 分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗 脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑，每片〇. 4g。
[0015] 實施例2
[0016] 取升麻100份，牛耳巖白菜40份、毛葉輪環(huán)藤50份、蘆子蘭40份，粉碎，加入2L 的70 %乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8 分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗 脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成膠囊。
[0017] 實施例3
[0018] 取升麻100份，牛耳巖白菜40份、毛葉輪環(huán)藤50份、蘆子蘭40份，粉碎，加入2L 的70 %乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8 分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗 脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成顆粒劑。
[0019] 牛耳巖白菜為苦苣苔科唇柱苣苔屬植物牛耳朵Chirita eburnea Hance，以根或 全草入藥。四季可采。補(bǔ)虛，止咳，止血，除濕。用于陰虛咳嗽，肺結(jié)核咳血，紅崩，白帶。外 用治外傷出血，癰瘡。本發(fā)明以根入藥。
[0020]毛葉輪環(huán)藤，拉丁名為Cycleabarbata(Wall. )Miers，毛茛目，防已科，散熱解毒， 散淤止痛。用于急性扁桃體炎，咽喉炎，牙痛，胃痛，腹痛，胃腸炎，瘧疾，跌打損傷。本發(fā)明 以全草入藥。
[0021] 蘆子蘭，胡椒科胡椒屬植物蕁麻葉胡椒，以全株入藥。全年可采，切片曬干。理氣 止痛。用于感冒，胃痛，痛經(jīng)，跌打損傷，風(fēng)濕骨痛。
[0022] 實施例4 :含升麻的植物組合物抑制大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞增殖的實 驗研究資料
[0023] 1實驗材料
[0024] I. 1實驗用細(xì)胞株
[0025] 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞，南京醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心實驗室細(xì)胞庫， DMEM+10% FBS常規(guī)培養(yǎng)。
[0026] 1. 2實驗藥物
[0027] 研究藥物：本發(fā)明含升麻的植物組合物：按實施例1方法制備。
[0028]藥液儲液：稱取IOOmg含升麻的植物組合物，溶于5ml無水乙醇中，0. 2ym濾器過 濾，500yIdoff管分裝，-20°C存儲，同時0.2ym濾器過濾無水乙醇以備對照組之用。
[0029] I. 3實驗試劑
[0030] DMEM(GIBC0 公司 Cat. No. 12100-061Lot. No. 758137);胎牛血清（浙江天 杭生物科技有限公司Lot. No. 100419) ;NaHC03 (上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat. No.11810-033Lot. No. 1088387) Jrypsin(AMRESC0 公司批號：2010/04) ;EDTA(AMRESC0 公司批號：2009/10) !Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0公司批號：2010242); Str印tomycin Sulfate (AMRESC0公司批號：2010382);無水乙醇（南京化學(xué)試劑有限公司 批號：080310182) ;MTT(Biosharp 批號：0793) ;PBS(實驗室自配）；
[0031] 1.4實驗器材
[0032] 萊卡倒置顯微鏡（德國Leica型號：DMlL);可見-紫外光微孔板檢測儀（美國MD 公司型號：SPECTRA MAX 190) ;C02培養(yǎng)箱（FORMA型號：3111);超凈臺（蘇凈集團(tuán)安泰公 司制造型號：SW-CJ-ZFD);純水儀（美國Spring公司型號：S/N 020579);精密移液器（法 國吉爾森公司型號：P2);電子天平（德國賽多利斯有限公司型號：BT323S);全自動高壓滅 菌鍋（日本SANYO公司型號：MLS-3020);臺式電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海精密實驗設(shè)備公司型 號：DHG9123A);冰箱（西門子公司型號：KG18V21TI);液氮罐（CBS型號：2001);低速離心 機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠型號：KA-1000) ;0? 2ym濾器（MILLIP0RE型號：SLGP033RB) ;10cm 培養(yǎng)皿（NEST公司）、96孔培養(yǎng)板（NEST公司）；細(xì)胞計數(shù)板；離心管、移液管、Tips若干。
[0033] 2實驗方法
[0034] 1)大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞用DMEM+10% FBS于37°C、5% C02進(jìn)行常 規(guī)培養(yǎng)（10cm培養(yǎng)皿），當(dāng)細(xì)胞生長至對數(shù)期時，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入 3ml 0. 25%胰蛋白酶-0. 04% EDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反 應(yīng)，吹打細(xì)胞后將其轉(zhuǎn)入離心管中，1000 rpm離心5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3X IO4個/ml。
[0035]2)將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180 y 1，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱 中（37°C，5% C02)常規(guī)培養(yǎng)。
[0036] 3)根據(jù)細(xì)胞生長情況，一般長至50 % -70 %，加入含升麻的植物組合物溶液，繼續(xù) 培養(yǎng)24h。
[0037]4) 24h 后加入 20 y I MTT 溶液（5mg/ml，即 0? 5 % MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。
[0038] 5)4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 y 1二甲基亞砜，置搖 床上低速振蕩l〇min，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。
[0039] 6)同時設(shè)置本底（不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液），對照孔（細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解 介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜），每組設(shè)定6個復(fù)孔。
[0040] 7)結(jié)果以藥物對細(xì)胞的抑制率表示：
[0041] 細(xì)胞增值抑制率（％ )=(對照孔OD值-給藥孔OD值）/對照孔OD值X 100 %。 實驗重復(fù)3次。
[0042] 3統(tǒng)計處理
[0043] 采用Microsoft Excel 2003軟件中的相關(guān)分析和Student t檢驗，數(shù)據(jù)以 mean iS. D.表不。
[0044] 4實驗結(jié)果
[0045] MTT法實驗后統(tǒng)計結(jié)果顯示，與對照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時，對大鼠腎上腺 嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞增殖抑制有差異（P〈0. 05)，劑量在lOmg/ml時該差異具有顯著性 (P〈0. 01)，當(dāng)劑量達(dá)到15-20mg/ml時有極顯著性差異（P〈0. 001)。
[0046] 表1含升麻的植物組合物對大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞增殖抑制影響研究 這土SD)
[0047]
[0048] 注：與對照組比較，*P〈0. 01 ;#P〈0. 001
[0049] 5實驗結(jié)論
[0050] 含升麻的植物組合物可以抑制大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞增殖，減少大鼠 腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞的細(xì)胞生長數(shù)目，該作用呈劑量依賴性。
【主權(quán)項】
1. 一種含升麻的植物組合物提取方法，其特征在于植物組合物由升麻100份，牛耳巖 白菜40份、毛葉輪環(huán)藤50份、蘆子蘭40份作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成：取 上述原料藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為 400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50 % 乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔 料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種含升麻的植物組合物提取方法，其特征在于制備方法中微 波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。3. -種含升麻的植物組合物在抑制大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞增殖藥物中的 應(yīng)用，其特征在于含升麻的植物組合物由升麻100份，牛耳巖白菜40份、毛葉輪環(huán)藤50份、 蘆子蘭40份作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成：取上述原料藥，粉碎，加入2L的 70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分 鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫 液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述一種含升麻的植物組合物在抑制大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12 細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在于制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分 鐘。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種含升麻的植物組合物提取方法，由升麻100份，牛耳巖白菜40份、毛葉輪環(huán)藤50份、蘆子蘭40作為原料藥制成，采用微波提取方法制備而成，使得含量有很大提高，用量減少，本發(fā)明還提供了含升麻的植物組合物在制備抑制大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
【IPC分類】A61P35/00, A61K36/71
【公開號】CN105193967
【申請?zhí)枴緾N201510580453
【發(fā)明人】趙明亮
【申請人】南京正亮醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2015年12月30日
【申請日】2015年9月12日