醇得濃縮液;濃縮液中加入1,3_丁 二醇,加入量為步驟(3)所得濾液量體積百分比的90%,混溶均勻。真空抽濾,抽濾條件同 步驟(3),取清液,即得。
[0061] 實施例3本發(fā)明中藥組合物的制備
[0062] (1)按照下述原料藥粉碎后按所述重量份配比稱取,混勻;
[0063] 金銀花20g、丹參40g、黨參40g、黃芪30g、麥冬10g、仙人掌20g。
[0064] (2)體積百分比為60%乙醇提取,原料藥與乙醇質(zhì)量體積比g/ml為1 :20,放置于 電熱恒溫水浴鍋中,90°C提取1小時;
[0065] (3)將步驟(2)得到的提取液從恒溫水浴鍋中取出,靜置冷卻至常溫,100目粗過 濾,濾出藥渣,得濾液;將該濾液再進(jìn)行真空抽濾,抽濾條件:在布氏漏斗里鋪兩層濾紙,濾 紙中間夾〇. 6cm娃藻土真空抽濾,收集濾液;
[0066] (4)在真空度0. 1,43°C條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)全部乙醇得濃縮液;濃縮液中加入1,3_丁 二醇,加入量為步驟(3)所得濾液量體積百分比的60%,混溶均勻。真空抽濾,抽濾條件同 步驟(3),取清液,即得。
[0067] 實施例4本發(fā)明膏霜的制備
[0068] 組分及用量
[0069]
[0070] 制備方法
[0071] (I)A相加熱到85°C混合均勾,備用;
[0072] (2) B相卡波姆加入水中分散均勻后,黃原膠加入甘油中分散,分別混勻后,加入B 相其它原料,混合均勻;加熱到85°C,將步驟(I)A相加入B相,3000轉(zhuǎn)/分鐘,均質(zhì)5分鐘;
[0073] (3)攪拌降溫,50°C加入NaOH,攪拌均勻;攪拌降溫,45°C加入中藥提取物,攪拌均 勻;攪拌降溫,40°C加入防腐劑,攪拌均勻。
[0074] 實施例5本發(fā)明膏霜的制備
[0075] 組分及用量
[0078] 制備方法
[0079] (I)A相加熱到70°C混合均勾,備用;
[0080] (2)B相卡波姆加入水中分散均勻后,黃原膠加入甘油中分散,分別混勻后,加入B 相其它原料,混合均勻;加熱到70°C,將步驟(I)A相加入B相,5000轉(zhuǎn)/分鐘,均質(zhì)8分鐘;
[0081] (3)攪拌降溫,55°C加入NaOH,攪拌均勻;攪拌降溫,50°C加入提取物,攪拌均勻; 攪拌降溫,45°C加入防腐劑,攪拌均勻。
[0082] 實施例6本發(fā)明膏霜的制備
[0083] 組分及用量
[0084]
[0085] 制備方法
[0086] (I)A相加熱到90°C混合均勾,備用;
[0087] (2)B相卡波姆加入水中分散均勻后,黃原膠加入甘油中分散,分別混勻后,加入B 相其它原料,混合均勻;加熱到90°C,將步驟(I)A相加入B相,2000轉(zhuǎn)/分鐘,均質(zhì)10分 鐘;
[0088] (3)攪拌降溫,50°C加入NaOH,攪拌均勻;攪拌降溫,45°C加入提取物,攪拌均勻; 攪拌降溫,30°C加入防腐劑,攪拌均勻。
[0089] 本發(fā)明功效實驗
[0090] 一、實施例1、實施例2、實施例3所得中藥提取物A、B、C的防輻射功效評價
[0091] (1)研究目的
[0092] 通過觀察中藥提取物A、B、C(分別由實施例1、實施例2及實施例3制備得到)對 手機輻射后小鼠皮膚成纖維細(xì)胞株3T6生長的影響,評價中藥組合物A、B、C對手機輻射抑 制細(xì)胞生長的保護(hù)作用。
[0093] (2)實驗材料
[0094] 受試品:實施例1、實施例2、實施例3所得中藥提取物A、B、C
[0095] 細(xì)胞株:小鼠皮膚成纖維細(xì)胞株3T6,購自中國科學(xué)院細(xì)胞庫,本實驗室傳代后使 用。
[0096] 試劑:FBS(批號:1428479)、0? 25 % Trypsin-EDTA(批號:1213981)購自 GIBCO 公司。改良型RPMI-1640型培養(yǎng)基(批號:NXL0745)購自HYCL0NE公司。DMSO (批號: 20121102)購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。細(xì)胞增值-毒性檢測一CCK-8試劑盒為日本 D0JIND0同仁化學(xué)研究所產(chǎn)品。
[0097] 實驗儀器:X71型倒置顯微鏡為Olympus公司產(chǎn)品。HH CP-OlW型二氧化碳細(xì)胞培 養(yǎng)箱為上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠產(chǎn)品。SW-CJ-IFD型單人單面凈化工作臺為蘇州 凈化設(shè)備有限公司產(chǎn)品。RT-6000型酶標(biāo)儀,深圳雷杜公司產(chǎn)品。諾基亞手機1050型,頻段 為 GSM900MHZ。
[0098] (3)實驗方法
[0099] 實驗分為空白對照組、輻射對照組、藥物不同濃度組,每組8個復(fù)孔。收集對數(shù)期 細(xì)胞,計數(shù),按IXioVml濃度接種到96孔板,每孔200 yl。置37°C,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱 中培養(yǎng)24小時,使細(xì)胞貼壁。用藥組加入不同中藥提取物100 y 1,空白對照組和輻射對照 組加入100 y 1無血清培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)。24小時后,將細(xì)胞板置于CO2培養(yǎng)箱外適應(yīng)1小 時,除空白對照組細(xì)胞外,將其他細(xì)胞板放置在手機上方,手機保持通話狀態(tài),空白對照組 細(xì)胞板于另一房間置于手機上方,手機保持關(guān)閉狀態(tài)。6小時后使用CCK法檢測細(xì)胞活性, 并計算增殖抑制率及增殖抑制保護(hù)率。
[0102] (4)實驗結(jié)果
[0103] 結(jié)果顯示,使用手機輻射6小時后,皮膚成纖維細(xì)胞增殖受到抑制,使得吸光度 降低,輻射對照組細(xì)胞OD值較空白對照組比較有顯著性差異(P〈0. 01),增殖抑制率達(dá)到 16. 89%沖藥提取物A、B、C劑量在1000 y g ? ml 1時均對輻射后細(xì)胞增殖抑制具有明顯的 保護(hù)作用,可以有效的降低輻射對成纖維細(xì)胞的抑制作用,從而吸光度上升,與輻射對照組 比較有顯著性差異(P〈〇. 05)。(見表3)中藥提取物A的對成纖維細(xì)胞增殖抑制保護(hù)率可 達(dá) 11. 86%。
[0104] 表3中藥提取物A、B、C對輻射后細(xì)胞增殖/毒性的影響
[0105]
[0106] 二、實施例1、實施例2、實施例3所得中藥提取物A、B、C對輻射間接作用的防護(hù)功 效
[0107] 輻射對生物活性物質(zhì)的作用有兩個途徑:一是直接作用于生物大分子如DNA,通 過電離和激發(fā)使其發(fā)生化學(xué)鍵的斷裂,造成分子結(jié)構(gòu)的改變和生物活性的喪失,這種作用 稱為直接作用;二是射線與水分子相互作用,產(chǎn)生自由基等活化產(chǎn)物,后者再作用于生物分 子,引起其損傷,此類作用稱為間接作用。在生物體內(nèi),由于水分子的大量存在,間接作用具 有更重要的意義。因此,針對輻射間接作用,可以選擇清除自由基功效來評價中藥提取物A、 B、C對輻射間接作用的防護(hù)功效。
[0108] 將實施例1~3所得中藥提取物和去離子水以3 :97的質(zhì)量比混勻,得到中藥提取 物的水溶液;以該中藥提取物的水溶液作為試驗組;其中,實施例1所得中藥提取物A對應(yīng) 樣品1 ;實施例2所得中藥提取物B對應(yīng)樣品2 ;實施例3所得中藥提取物C對應(yīng)樣品3 ;將 試驗組中的中藥提取物替換為維生素C衍生物,所得水溶液作為陽性對照。
[0109] 測定結(jié)果如圖1。實驗結(jié)果表明,各實施例所得中藥提取物在其水溶液中的質(zhì)量百 分含量為3. 0 %時,均已具有明顯對DPPH清除能力,具有降低羥自由基、烷自由基或氧化自 由基的有效濃度和打斷脂質(zhì)過氧化鏈反應(yīng)的作用,從而具有良好的延緩皮膚輻射老化的作 用。
[0110] 三、實施例1、實施例2、實施例3所得中藥提取物A、B、C的抑菌功能評價
[0111] 霧霾等空氣污染,令環(huán)境中的微生物含量增加,其中常見的大腸桿菌、金黃色葡萄 球菌、痤瘡丙酸桿菌接觸皮膚易造成皮膚痤瘡、敏感等現(xiàn)象。
[0112] 將實施例1~3所得中藥提取物A、B、C進(jìn)行大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、痤瘡丙酸 桿菌抑制功效評價。
[0113] 牛津杯法:依據(jù)不同供試菌株配置相應(yīng)培養(yǎng)基,高壓蒸汽滅菌12rC,20min。制作 固體培養(yǎng)基平板,每個培養(yǎng)皿約倒入20mL培養(yǎng)基,待培養(yǎng)基凝固后,用移液槍取100 y L菌 液(已經(jīng)過麥?zhǔn)媳葷岱y定濃度的菌懸液)滴入培養(yǎng)皿中,采用平板涂布法,將菌懸液均勻 涂布于固體培養(yǎng)基上。在培養(yǎng)基表面直接垂直放上牛津杯(內(nèi)徑6mm、外徑8mm、高IOmm的 圓形小管),輕輕加壓,使其與培養(yǎng)基接觸無空隙。每個培養(yǎng)皿放置三個牛津杯。每個牛津 杯中加入200 y L待測樣品,將細(xì)菌的培養(yǎng)皿輕置于細(xì)菌培養(yǎng)箱中37°C培養(yǎng)16個小時左右。
[0114] 其中,實施例1所得中藥提取物A對應(yīng)樣品1 ;實施例2所得中藥提取物B對應(yīng)樣 品2 ;實施例3所得中藥提取物C對應(yīng)樣品3 ;陽性對照為0. 2% MTI (甲基異噻唑啉酮/碘 丙炔基丁基甲氨酸酯)。MTI是化妝品中常用的防腐劑,建議用量為0.05%~0.02%。對 細(xì)菌、真菌均有優(yōu)異的抗菌活性。測定結(jié)果如表4。
[0115] 表4中藥提取物A、B、C抑菌效果評價
[0116]
[0117] 注:抑菌圈直徑多20mm為極敏感"+++"判為有抑菌作用,抑菌圈越大抑菌效果越 好;15mm彡抑菌直徑<20mm為高敏"++";10mm彡抑菌直徑<15mm為中敏" + 抑菌直徑〈10mm 為無效,判為無抑菌作用。參考陳玉萍.抗菌藥物的藥敏試驗方法[J].畜牧獸醫(yī)科技信息, 2007, (5) :88-89〇
[0118] 從實驗結(jié)果可以看出,樣品1、樣品2、樣品3均具有良好的抑菌效果,能夠有效降 低環(huán)境中微生物對皮膚的有害影響。
[0119] 四、實施例4、實施例5、實施例6所得制劑的防輻射功效評價
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