用于癌癥治療的gla單一療法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明通常涉及使用吡喃葡糖基脂A(GLA)治療癌癥的組合物和方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 先天免疫系統(tǒng)是一種進(jìn)化上古老的系統(tǒng)，其設(shè)計(jì)為檢測(cè)是否存在微生物入侵者并 激活保護(hù)性反應(yīng)（Beutler，Mol. Immunol. 2004, 40, 845-859)。其對(duì)作為病原體組成部分 的化合物快速應(yīng)答，所述病原體被宿主認(rèn)為是危險(xiǎn)信號(hào)。這些分子模式的識(shí)別是由多組 高度保守的受體介導(dǎo)的（van Amersfoort 等，J. Clin. Microbiol. Rev. 2003, 16, 379)，其 激活導(dǎo)致急性炎性應(yīng)答。這些應(yīng)答包括生成各種細(xì)胞因子和趨化因子、引導(dǎo)針對(duì)入侵病原 體的局部攻擊以及起始激活并調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)適應(yīng)性組件的應(yīng)答（Dabbagh和Lewis, Curr. Opin. Infect. Dis. 2003, 16, 199-204 ；Bevan, Nat. Rev. Immunol. 2004, 4, 595-602 ； Pasare 和 Medzhitov, Seminars Tmmunol.2004, 16, 23-26 ；Finlay 和 Hancock, Nat. Rev. Microbiol. 2004, 2, 497-504 ;Akira 等，Nat. Immunol. 2001，2, 675-680 ;Pasare 和 Medzhitov, Immunity 2004, 21, 733-741)〇
[0003] 有證據(jù)表明先天免疫應(yīng)答可用于治療目的，例如開(kāi)發(fā)用于疫苗和治療多種疾病 (包括哮喘、感染和癌癥）的佐劑。然而，這類療法的一個(gè)重要顧慮在于，先天免疫的過(guò)度激 活可導(dǎo)致感染性休克的臨床癥狀（Pittet 等，J. Am. Med. Assoc. 1994, 271，1598-1601 ;Rice 和 Bernard, Anna. Rev. Med. 2005, 56, 225-248) 〇
[0004] 長(zhǎng)久以來(lái)，癌癥免疫學(xué)領(lǐng)域的一個(gè)目標(biāo)是增強(qiáng)免疫介導(dǎo)的抗腫瘤活性，從而實(shí)現(xiàn) 腫瘤消退和改進(jìn)癌癥腫瘤選擇。顯然需要增強(qiáng)抗腫瘤免疫應(yīng)答以用于癌癥治療的組合物和 方法。本發(fā)明提高了這個(gè)和其他相關(guān)優(yōu)勢(shì)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的一個(gè)方面提供了一種治療患有癌癥的哺乳動(dòng)物的方法，包括給予治療有 效量的包含GLA的組合物，所述組合物包含：
[0006] (a)下式的 GLA :
[0008] 其中：R1、R3、R5和R 6是C n_C2。烷基；且R2和R 4是C 12_C2。烷基；以及
[0009] (b)藥學(xué)上可接受的運(yùn)載體或賦形劑；該組合物不包含抗原。在上文所述方法的 一個(gè)實(shí)施方式中，R 1、R3、R5和R6是十一烷基且R2和R 4是十三烷基。在本文所述方法的另 一個(gè)實(shí)施方式中，該哺乳動(dòng)物是人。在另一個(gè)實(shí)施方式中，該組合物是水性制劑，且在某些 實(shí)施方式中，該組合物的形式是水包油乳液、油包水乳液、脂質(zhì)體、膠束結(jié)構(gòu)或微粒。
[0010] 在本文所述方法的某些實(shí)施方式中，該癌癥包括實(shí)體瘤，且可以是癌、肉瘤或淋巴 癌。在另一個(gè)實(shí)施方式中，該實(shí)體瘤是原發(fā)性實(shí)體瘤或可以是繼發(fā)性實(shí)體瘤。這些方法可用 于治療多種癌癥，包括但不限于：黑素瘤、梅克爾細(xì)胞癌、非霍奇金淋巴瘤（NHL)、肺癌、宮 頸癌、卵巢癌、子宮癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、腎癌、膀胱癌、腦癌和胰腺癌。 [0011] 在某些實(shí)施方式中，該組合物通過(guò)皮下、皮內(nèi)、肌肉內(nèi)、瘤內(nèi)或靜脈內(nèi)注射給予。在 其他實(shí)施方式中，該組合物通過(guò)鼻內(nèi)或肺內(nèi)給予。
[0012] 在本文所述方法的另一個(gè)實(shí)施方式中，該組合物與一種或多種治療劑或治療聯(lián) 用。在這方面，在某些實(shí)施方式中，該治療劑是抗癌劑。其他治療劑或治療可以是化療劑、 免疫檢驗(yàn)點(diǎn)抑制劑或激活共刺激通路的抗體（例如但不限于抗CD40抗體）。多種治療劑中 的任一種都可考慮用于本發(fā)明，包括但不限于：泰索帝、卡鉑、曲妥珠單抗、表柔比星、環(huán)磷 酰胺、卡鉑、順鉑、多西他賽、多柔比星、依托泊甙、5-FU、吉西他濱、氨甲蝶呤和紫杉醇。在某 些實(shí)施方式中，一種或多種其他治療性治療是放療。
[0013] 附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明
[0014] 圖1是使用B16黑素瘤細(xì)胞注射后給予鹽水或GLA的小鼠中隨時(shí)間變化的腫瘤尺 寸。
[0015] 圖2是存活曲線，顯示與單獨(dú)接受鹽水的小鼠相比，接受GLA的小鼠具有改善的存 活率。
[0016] 圖3 :鼠 B16F10小鼠足墊黑素瘤的研發(fā)。B16F10小鼠足墊黑素瘤是一種靈活的 治療性腫瘤模型。B16F10腫瘤可容易地觀察，治療終點(diǎn)設(shè)為腫瘤體積小于IOOmm 2且動(dòng)物健 康，0. 3E5 B16F10細(xì)胞是推薦的最低腫瘤劑量，根據(jù)注射的細(xì)胞數(shù)目，治療窗口的范圍可以 是14-40天-可理論性提高腫瘤劑量以將治療窗口縮短至小于14天。
[0017] 圖4 :通過(guò)肌肉內(nèi)給藥途徑給予GLA-SE顯著（p>0. 008)改變BALB/c小鼠中B16F10 腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)。使用威氏符號(hào)秩檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)評(píng)價(jià)。
[0018] 圖5 :通過(guò)肌肉內(nèi)給藥途徑給予GLA-SE顯著（p>0. 03)增加具有B16F10腫瘤負(fù)荷 的BALB/c小鼠的生存期。用GBW檢驗(yàn)（Gehan-Breslow Wilcoxon test)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
[0019] 圖6是接種腫瘤細(xì)胞后肌肉內(nèi)（i.m.)或瘤內(nèi)（i.t.)給予賦形劑（2% SE)或 GLA-SE的小鼠中隨時(shí)間變化的腫瘤尺寸。使用斯氏T檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。*p〈0. 05。
[0020] 圖7 :B16F10小鼠黑素瘤模型中GLA+/-檢驗(yàn)點(diǎn)抑制劑的療效。A是腫瘤注射后第 4、9或14天開(kāi)始給予GLA-SE(i. t.)或2% SE賦形劑對(duì)照的荷瘤小鼠中隨時(shí)間變化的腫瘤 尺寸。B是腫瘤注射后第4天開(kāi)始給予GLA-SE(i. t.)或2% SE賦形劑對(duì)照加免疫檢驗(yàn)點(diǎn) 抑制劑（抗I3DLU抗HH、抗CTLA4或LTF2對(duì)照抗體；i. p.)的荷瘤小鼠中隨時(shí)間變化的腫 瘤尺寸。使用斯氏T檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較：*p = 0. 03 = 0. 005。
[0021] 圖8 :B16F10小鼠黑素瘤模型中GLA+/-抗CD40的療效。A是腫瘤注射后第4、9或 14天開(kāi)始給予GLA-SE (i. t.)或2 % SE賦形劑對(duì)照加抗CD40抗體（i. p.)的荷瘤小鼠中隨 時(shí)間變化的腫瘤尺寸。B是腫瘤注射后第8和15天給予GLA-SE (i. t.)或2% SE賦形劑對(duì) 照加腫瘤注射后第5和12天給予抗CD40(i.t.)的荷瘤小鼠中隨時(shí)間變化的腫瘤尺寸。使 用斯氏T檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較：*p = 0. 03 ;ns =不顯著。
[0022] 發(fā)明詳述
[0023] 本發(fā)明部分涉及以下驚人發(fā)現(xiàn)：癌癥建立后單獨(dú)給予GLA導(dǎo)致B16黑素瘤小鼠模 型中小鼠存活的提高。GLA已被用作疫苗佐劑以增強(qiáng)針對(duì)多種抗原的免疫應(yīng)答。然而，在本 發(fā)明前，GLA未被用作治療癌癥的單一療法。
[0024] 本文和所附權(quán)利要求書(shū)所用的單數(shù)形式"一個(gè)"、"一種"和"所述"包括復(fù)數(shù)指示 物，除非上下文另有明確說(shuō)明。因此，例如，"一個(gè)（種）抗原"包括多個(gè)（種）這類抗原， "一個(gè)（種）細(xì)胞"或"該細(xì)胞"包括本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的一個(gè)（種）或多個(gè)（種）細(xì)胞 和其等同物（例如多個(gè)（種）細(xì)胞），等等。類似的，"一個(gè)（種）化合物"或"一個(gè)（種） 組合物"分別包括多個(gè)（種）這類化合物或組合物，且指一個(gè)（種）或多個(gè)（種）化合物 組合物，除非本文中另有明確說(shuō)明。在描述或要求保護(hù)方法步驟且這些步驟被描述為以特 定順序發(fā)生時(shí)，在第二步驟"之前"（即前面）發(fā)生（或進(jìn)行）的第一步驟的描述等同于在 第一步驟"之后"發(fā)生（或進(jìn)行）第二步驟。指代數(shù)字或數(shù)字范圍時(shí)，術(shù)語(yǔ)"約"表示所指 數(shù)字或數(shù)字范圍是實(shí)驗(yàn)變異性內(nèi)的約數(shù)（或在統(tǒng)計(jì)學(xué)實(shí)驗(yàn)誤差內(nèi)），且因此該數(shù)字或數(shù)字 范圍可在所示數(shù)字或數(shù)字范圍的1%至15%之間變化。術(shù)語(yǔ)"包含"（以及相關(guān)術(shù)語(yǔ)如"包 括"或"含有"或"具有"）不旨在排除在某些實(shí)施方式中（例如本文所述任何物質(zhì)組合物、 組合物、方法或過(guò)程等的實(shí)施方式）可"由所述特征組成"或"基本由所述特征組成"。
[0025] 本發(fā)明的方法和組合物適用于治療任何哺乳動(dòng)物，包括人。其他哺乳動(dòng)物包括小 家畜，特別是伴侶動(dòng)物和寵物，包括但不限于小鼠、大鼠、倉(cāng)鼠、豚鼠、兔、貓、狗和靈長(zhǎng)類動(dòng) 物?？芍委煹牟溉閯?dòng)物包括，例如，非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物（如猴、大猩猩、黑猩猩等）、嚙齒類動(dòng)物 (如大鼠、小鼠、沙鼠、倉(cāng)鼠、雪貂、兔）、兔形目動(dòng)物、豬科動(dòng)物（如豬、小型豬）、馬科動(dòng)物、犬 科動(dòng)物、貓科動(dòng)物、?？苿?dòng)物和其他家養(yǎng)、農(nóng)場(chǎng)和動(dòng)物園動(dòng)物。本文所述需要治療的對(duì)象已 被診斷為患有癌癥，或可具有表明該對(duì)象處于發(fā)生癌癥風(fēng)險(xiǎn)下的過(guò)度增殖性疾病跡象。示 例性癌癥病癥在下文中詳細(xì)描述。
[0026] 適用于本發(fā)明所述應(yīng)用的GLA化合物包括任何以下化合物。不受本發(fā)明理論的束 縛，本文所述GLA化合物被認(rèn)為靶向TLR4。TLR4在TLR家族中的獨(dú)特之處在于經(jīng)由MyD88 和TRIF依賴性通路發(fā)生下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)?？傊?，這些通路刺激DC成熟、抗原加工/呈遞、T 細(xì)胞初免和細(xì)胞因子（如IL-12、IFNa /β和TNFa )生產(chǎn)（參加例如IwasaId等，Nat. Immunol. 5:987(2004)) 〇
[0027] -種式（Ia)的吡喃葡糖基脂A(GLA)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
[0028]
[0029] 其中：R1、R3、R5和R6是C11-C20烷基；且R2和R4是C12-C20烷基；在更具體的 實(shí)施方式中，該GLA具有上文所列式（Ia)其中RU R3、R5和R6是C11-C14烷基；且R2和 R4是C12-C15烷基；在更具體的實(shí)施方式中，該GLA具有上文所列式（Ia)其中RU R3、R5 和R6是Cll烷基或^^一烷基；且R2和R4是C13烷基或十三烷基；
[0030] 或一種式（Ib)的GLA化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
[0032] 其中：1^1、1^、1^3、1^4、1^5和1^6相同或不同且獨(dú)立地選擇0、順和（〇12)山7、1^8、1^9 和LlO相同或不同且在任何情況下可以不存在或是C( = 0) ;Y1是酸官能團(tuán)；Y2和Y3相同 或不同且各自獨(dú)立地選自〇H、SH和酸官能團(tuán)；Y4是OH或SH;R1、R3、R5和R6相同或不同 且各自獨(dú)立地選自C8-C13烷基；且R2和R4相同或不同且各自獨(dú)立地選自C6-C11烷基。
[0033] DSLP是一類GLA型化合物，其含有通過(guò)接合選自葡萄糖和氨基取代葡萄糖的兩個(gè) 單糖基團(tuán)形成的二糖（DS)基團(tuán)，其中該二糖化學(xué)結(jié)合到一個(gè)磷酸（P)基團(tuán)和多個(gè)脂（L)基 團(tuán)上。更具體地，該二糖可視作由兩個(gè)單糖單元形成，各單糖單元具有6個(gè)碳。在該二糖 中，單糖之一將形成還原端，且另一個(gè)單糖將形成非還原端。為方便起見(jiàn)，形成還原末端的 單糖的碳將表示為位于位置1、2、3、4、5和6處，而形成非還原末端的單糖的相應(yīng)碳原子將 表示為位于位置1'、2'、3'、4'、5'和6'處，其遵循常規(guī)碳水化合物命名方法。在DSLP中， 非還原末端的1位碳通過(guò)醚（-〇-)或氨基（-NH-)基團(tuán)連接至還原末端的6'位碳。該磷酸 基團(tuán)將連接至二糖，優(yōu)選通過(guò)非還原末端的4'碳。各脂基團(tuán)將通過(guò)酰胺（-NH-C(O)-)或酯 (-O-C(O)-)連接接合至二糖，其中羰基接合至脂基團(tuán)。該二糖具有7個(gè)位置可連接至酰胺 或酯基，g卩非還原末端的2'、3'和6'位以及還原末端的1、2、3和4位。
[0034] 例如，該脂基團(tuán)具有至少3個(gè)碳，或至少6個(gè)碳，優(yōu)選至少8個(gè)碳，且更優(yōu)選至少10 個(gè)碳，其中在各情況下，該脂基團(tuán)具有不超過(guò)24個(gè)碳，不超過(guò)22個(gè)碳，或不超過(guò)20個(gè)碳。在 一個(gè)實(shí)施方式中，這些脂基團(tuán)總共提供60-100個(gè)碳，優(yōu)選70-90個(gè)碳。脂基團(tuán)可僅由碳和 氫原子組成，即其可以是烴基脂基團(tuán)，或其可以含有一個(gè)羥基，即其可以是羥基取代的脂基 團(tuán)，或其可以含有酯基，該酯基繼而通過(guò)酯基的羰基（-C(O)-)接合至烴基脂或羥基取代的 脂基團(tuán)，即酯取代的脂。烴基酯基團(tuán)可以是飽和的或不飽和的，不飽和烴基脂基團(tuán)將在相鄰 的碳原子之間具有一個(gè)雙鍵。
[0035] 該DSLP包含3或4或5或6或7個(gè)脂基團(tuán)。在一個(gè)方面中，該DSLP包含3-7個(gè) 脂基團(tuán)，而在另一個(gè)方面中，該DSLP包含4-6個(gè)脂基團(tuán)。在一個(gè)方面中，該脂基團(tuán)獨(dú)立地選 自烴基脂、羥基取代的脂和酯取代的脂。在一個(gè)方面中，使用羥基取代1、4'和6'位。在一 個(gè)方面中，該單糖單元各自是葡糖胺。該DSLP可以是游離酸形式，或鹽形式，例如銨鹽。
[0036] 在某些實(shí)施方式中，DSLP上的脂如下文所述：使用-0- (CO) -CH2-CH (Ra) (-O-C(O)-Rb)取代 3' 位；使用-NH-(CO)-CH2-CH(Ra) (-O-C(O)-Rb)取代 2' 位；使用-0-(C0)-CH2-CH(0H) (Ra)取代 3 位；使用-NH-(C0)-CH2-CH(0H) (Ra)取代 2 位；其中，Ra 和Rb各自選自癸基、^^一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基，各術(shù)語(yǔ)都指飽和烴基。在 一個(gè)實(shí)施方式中，Ra是十一烷基且Rb是十三烷基，該化合物描述于例如美國(guó)專利申請(qǐng)公開(kāi) 2008/0131466中作為"GLA"。其中Ra是^^一烷基且Rb是十三烷基的化合物可以立體化 學(xué)限定的形式使用，其可以PHAD?佐劑的形式購(gòu)自例如阿凡提極性脂質(zhì)制品公司（Avanti Polar Lipids)〇
[0037] 在一個(gè)方面中，該DSLP是稱作3D-MPL的天然衍生化合物的混合物。3D-MPL佐劑 由GSK公司（GlaxoSmithKline Company)以藥物級(jí)別生產(chǎn)，作為其MPL?佐劑。3D-MPL已 被廣泛描述于科學(xué)和專利文獻(xiàn)，參見(jiàn)例如，Vaccine Design:the subunit and adjuvant approach(《疫苗設(shè)計(jì)：亞基和佐劑方法》），Powell M.