一種翁布提取物的制備方法及其應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種翁布提取物的制備方法，同時還涉及用該方法制備的翁布提取物 的應用，屬于藏藥領域。
【背景技術】
[0002] 高尿酸血癥（hyperuricemia)是一種由于噪呤代謝紊亂和/或尿酸排泄障礙所致 血尿酸增高，細胞外液尿酸鹽呈超飽和的疾病。血尿酸超過416μmol/L時即可明確診斷為 高尿酸血癥。超高蛋白膳食是引起嘌呤代謝紊亂的重要原因，過量糖、脂肪、蛋白質(zhì)的攝入 及大量飲酒與患病率增加均有重要關系。當血尿酸濃度過高時，尿酸以鈉鹽的形式沉積在 關節(jié)及皮下組織，導致痛風的發(fā)生，因此高尿酸血癥患者中約5%~12%會發(fā)展成為痛風。 痛風不僅可以侵犯骨和關節(jié)，而且還容易累及腎臟和心血管系統(tǒng)。高尿酸血癥和痛風是當 前嚴重危害人類健康的的代謝性疾病。
[0003] 高尿酸血癥可由兩方面的原因引起：（1)尿酸生成增多：人體內(nèi)尿酸由內(nèi)源性和 外源性兩種途徑產(chǎn)生，外源性尿酸來源于食物，約占人體尿酸總量的20% ;內(nèi)源性尿酸主要 來源于核苷酸分解代謝，約占80% ;因此，高嘌呤膳食和體內(nèi)核酸的大量分解均可導致血尿 酸的升高。其中，黃嘌呤氧化酶是尿酸生成的關鍵酶，它能催化次黃嘌呤氧化為黃嘌呤再氧 化為尿酸。（2)尿酸排泄減少：尿酸主要通過腎臟排泄，腎臟對尿酸的排泄通過腎小球的濾 過、分泌前的重吸收、腎小管的主動分泌及分泌后重吸收來調(diào)節(jié)，其中以腎小管對尿酸重吸 收為主。尿酸鹽為極性分子，需離子通道才能通過腎小管上皮細胞膜，目前發(fā)現(xiàn)的離子通道 (尿酸鹽轉運蛋白）中，陰離子交換器是關鍵的離子通道，該通道可促進腎小管對尿酸的重 吸收，決定尿酸從腎臟排出的多少。
[0004] 目前西藥治療高尿酸血癥主要從以下兩方面：一是抑制尿酸生成的藥物，如別嘌 呤醇、秋水仙堿，非留體類抗炎藥（NSAIDs)，糖皮質(zhì)激素等；二是促進尿酸排泄的藥物，如 丙璜舒，苯磺唑酮，苯溴馬龍等；但上述藥物都有不同程度的副作用，如過敏性皮疹，藥物 熱，胃腸不適，白細胞及血小板減少，肝功能損害等。
[0005] 高尿酸血癥為理化檢查發(fā)現(xiàn)，中醫(yī)無相應的病證名，但中醫(yī)對高尿酸血癥所致的 痛風早有認識。《金匱要略?中風歷節(jié)》篇："寸口脈沉而弱，沉即主骨，弱即主筋，沉即為腎， 弱即為肝……歷節(jié)黃汗出，故日歷節(jié)"。從癥狀來看，現(xiàn)代醫(yī)學的痛風應當屬于中醫(yī)的痹證、 "歷節(jié)"的范疇。就其病因病機，歷代醫(yī)家論述頗多，高尿酸血癥的形成主要是由于先天稟 賦不足，腎中精氣有虧損，后天恣嗜膏粱肥甘，日久傷脾，脾失健運，腎失蒸騰，造成全身氣 化失司，津液代謝障礙，最終導致內(nèi)濕滋生，濕邪彌散于營血而成。元代朱丹溪在《格致余 論?痛風論》中說："彼痛風者，大率因血受熱，己自沸騰，其后或涉冷水，或立濕地，或扇取 涼，或臥當風，寒涼外搏，熱血得寒，汗?jié)崮凉?，所以作痛。夜則痛甚，行于陰也。"其論將病名 定為痛風，發(fā)病原因為血熱與風，寒，濕相搏而成，臨床以疼痛為主要特征。中醫(yī)藥治療高尿 酸血癥的研究已經(jīng)逐步受到重視和關注，并且取得了一定的成就，其療效也已顯現(xiàn)出諸多 優(yōu)越性。
[0006] 藏藥翁布原植物為檉柳科（Tamaricaceae)水柏枝屬水柏枝Myricaria germanica(L. )Desv.，莖直立且多分枝，枝紅棕色，葉小，線形或線狀長圓形，分布于西藏、 青海、四川、云南、甘肅、陜西、山西，生長于海拔2000~2900m的河灘環(huán)境。據(jù)《晶珠本草》 記載，翁布有清熱解毒，發(fā)散透疹，治黃水病的功效，為我國西藏等少數(shù)民族地區(qū)的常用藥 物。但有關翁布的基礎研究尚十分有限，使該藥材的后續(xù)推廣和應用受到限制。現(xiàn)代研究 關于翁布的化學成分及藥理作用鮮有報道，也未見翁布提取物的制備方法及其用于制備治 療高尿酸血癥藥物的報道。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0007] 本發(fā)明的目的是提供一種翁布提取物的制備方法及其應用，能夠有效用于治療高 尿酸血癥。
[0008] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術方案是提供一種翁布提取物的制備方 法，包括以下步驟：
[0009] (1)翁布藥材粉碎，過20-80目篩，再對其進行超臨界二氧化碳萃取，萃取溫度 40-50°C、萃取壓力20-30MPa、萃取時間l-2h，萃取分離得到揮發(fā)油和藥渣A，收集揮發(fā)油， 得到翁布提取物A;
[0010] (2)在步驟（1)的藥渣A中加入濃度60-95%乙醇，50-80°C溫浸提取2-4次，每次 提取時間為l_3h，每次加入濃度60-95%乙醇用量為藥渣A重量的8-12倍，過濾，得到藥渣 B和提取液，合并提取液，回收乙醇，濃縮干燥，得到翁布提取物B;
[0011] (3)將步驟（2)的藥渣B加水回流提取1-4次，每次提取時間為l-3h，每次水用量 為藥渣B重量的6-10倍，過濾，合并提取液，濃縮至相對密度1. 07,上樣于大孔吸附樹脂，先 用水洗脫，再用濃度30-70%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，得到翁布 提取物C;
[0012] (4)將翁布提取物A、翁布提取物B和翁布提取物C混合均勻，得到翁布提取物。
[0013] 步驟（3)的大孔吸附樹脂為HPD600大孔吸附樹脂或LSA-21大孔吸附樹脂。
[0014] 本發(fā)明所采用的技術方案還在于提供一種上述方法制備的翁布提取物在制備治 療高尿酸血癥藥物中的應用。
[0015] 本發(fā)明制備的翁布提取物可制成片劑、膠囊劑或顆粒劑，所用方法均為本領域的 常規(guī)技術手段。
[0016]本發(fā)明首次以檉柳科水柏枝屬水柏枝Myricariagermanica(L. )Desv.(翁布）， 制備翁布提取物，原料來源豐富，成本低，使用方便，見效快，患者痛苦小，不抗藥，毒副作用 小，安全系數(shù)高。本發(fā)明翁布提取物的制備方法簡單，操作方便，所制備的翁布提取物能夠 有效用于高尿酸血癥的治療，有力推動了翁布的研究推廣。實驗表明，翁布提取物能夠顯著 降低高尿酸血癥患者血尿酸、肌酐、尿素氮含量及高尿酸血癥模型組大鼠血尿酸、尿尿酸、 黃嘌呤氧化酶、血肌酐、尿素氮含量。
【具體實施方式】
[0017] 以下結合實施例對本發(fā)明的【具體實施方式】作進一步詳細說明。
[0018] 實施例1
[0019] 本實施例的翁布提取物的制備方法，包括以下步驟：
[0020] (1)翁布藥材粉碎，過20目篩，再對其進行超臨界二氧化碳萃取，萃取溫度45°C、 萃取壓力20MPa、萃取時間lh，萃取分離得到揮發(fā)油和藥渣A，收集揮發(fā)油，得到翁布提取物 A；
[0021] (2)在步驟⑴的藥渣A中加入濃度60%乙醇，50°C溫浸提取2次，每次提取時間 為lh，每次加入濃度60%乙醇用量為藥渣A重量的10倍，過濾，得到藥渣B和提取液，合并 提取液，回收乙醇，濃縮干燥，得到翁布提取物B;
[0022] (3)將步驟⑵的藥渣B加水回流提取1次，提取時間為lh，水用量為藥渣B重量 的6倍，過濾，將提取液濃縮至相對密度1. 07,上樣于HPD600大孔吸附樹脂，先用水洗脫，再 用濃度30%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，得到翁布提取物C;
[0023] (4)將翁布提取物A、翁布提取物B和翁布提取物C混合均勻，得到翁布提取物。
[0024] 實施例2
[0025] 本實施例的翁布提取物的制備方法，包括以下步驟：
[0026] (1)翁布藥材粉碎，過80目篩，再對其進行超臨界二氧化碳萃取，萃取溫度50°C、 萃取壓力30MPa、萃取時間2h，萃取分離得到揮發(fā)油和藥渣A，收集揮發(fā)油，得到翁布提取物 A；
[0027] (2)在步驟⑴的藥渣A中加入濃度95%乙醇，80°C溫浸提取4次，每次提取時間 為3h，每次加入濃度95 %乙醇用量為藥渣A重量的8倍，過濾，得到藥渣B和提取液，合并 提取液，回收乙醇，濃縮干燥，得到翁布提取物B;
[0028] (3)將步驟（2)的藥渣B加水回流提取4次，每次提取時間為3h，每次水用量為藥 渣B重量的10倍，過濾，合并提取液，濃縮至相對密度1. 07,上樣于HPD600大孔吸附樹脂， 先用水洗脫，再用濃度70%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，得到翁布提 取物C;
[0029] (4)將翁布提取物A、翁布提取物B和翁布提取物C混合均勻，得到翁布提取物。
[0030] 實施例3
[0031] 本實施例的翁布提取物的制備方法，包括以下步驟：
[0032] (1)翁布藥材粉碎，過40目篩，再對其進行超臨界二氧化碳萃取，萃取溫度40°C、 萃取壓力25MPa、萃取時間1. 5h，萃取分離得到揮發(fā)油和藥渣A，收集揮發(fā)油，得到翁布提取 物A;
[0033] (2)在步驟⑴的藥渣A中加入濃度75%乙醇，70°C溫浸提取3次，每次提取時間 為2h，每次加入濃度75%乙醇用量為藥渣A重量的12倍，過濾，得到藥渣B和提取液，合并 提取液，回收乙醇，濃縮干燥，得到翁布提取物B;
[0034] (3)將步驟（2)的藥渣B加水回流提取2次，每次提取時間為2h，每次水用量為藥 渣B重量的8倍，過濾，合并提取液，濃縮至相對密度1. 07,上樣于LSA-21大孔吸附樹脂，先 用水洗脫，再用濃度50%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，得到翁布提取 物C;
[0035] (4)將翁布提取物A、翁布提取物B和翁布提取物C混合均勻，得到翁布提取物。
[0036] 實驗例1翁布提取物治療高尿酸血癥的臨床療效觀察
[0037] 本發(fā)明翁布提取物在2013年5月至2014年12月臨床觀察高尿酸血癥患者64例， 報告如下：
[0038] 1、一般資料
[0039] 64例患者中，男性34例，女性30例，年齡最小35歲，最大64歲，平均年齡50. 7 歲，病程6個月到10年。
[0040] 2、診斷標準
[0041] 參照《中藥新藥臨床研究指導原則》：
[0042] (1)高尿酸血癥的診斷標準為：血尿酸（UA)彡416ymol/