Ig寬體金線蛭干粉），分兩次 給藥。
[0111] (4)陰性對(duì)照品：蒸饋水，由 R0-DI Water Purification System (Research Scientific Instruments Co.)制備。
[0112] 3.試驗(yàn)器材
[0113] 兔灌胃開(kāi)口器、藥匙、50ml注射器以及20號(hào)灌胃針、毛細(xì)管、秒表、表面皿、剃毛 刀、IOml注射器針頭（綠色）、棉球和酒精棉球。
[0114] 4.試驗(yàn)方法
[0115] 4.1 分組
[0116] 將檢疫合格的16只新西蘭兔隨機(jī)分為溶劑對(duì)照組、普通制劑對(duì)照品組、遲釋對(duì)照 制劑組、受試品組，每組4只動(dòng)物。
[0117] (1)溶劑對(duì)照組：灌胃給予50ml蒸餾水；
[0118] ⑵受試品組：給予臨床用量，即64mg/kg (相當(dāng)于寬體金線蛭干粉38. 3mg/kg)，以 兔子平均體重為2. 5kg計(jì)，給藥量為160mg/只，并以50ml蒸餾水送服。人的寬體金線蛭遲 釋微丸的給藥劑量為I. 67g/天（相當(dāng)于寬體金線蛭干粉Ig/天），根據(jù)等效劑量換算得到 新西蘭兔的寬體金線蛭遲釋微丸的給藥劑量為64mg/kg(相當(dāng)于寬體金線蛭干粉38. 3mg/ kg/ 天）。
[0119] (3)普通制劑對(duì)照品組：給予臨床用量，即43. 7mg/kg(相當(dāng)于寬體金線蛭干粉 38. 3mg/kg)，以兔子平均體重為2. 5kg計(jì)，給藥量為109. 2mg/只，并以50ml蒸餾水送服。 人的寬體金線蛭普通微丸的給藥劑量為I. Hg/人/天（相當(dāng)于寬體金線蛭干粉Ig/人/ 天），根據(jù)等效劑量換算得到新西蘭兔的未包衣微丸的給藥劑量為43. 7mg/kg/天（相當(dāng)于 寬體金線蛭干粉38. 3mg/kg/天）。
[0120] (4)遲釋對(duì)照制劑：給予臨床用量，即64mg/kg(相當(dāng)于寬體金線蛭干粉38. 3mg/ kg)，以兔子平均體重為2. 5kg計(jì)，給藥量為160mg/只，并以50ml蒸餾水送服。人的寬體 金線蛭遲釋微丸的給藥劑量為I. 67g/天（相當(dāng)于寬體金線蛭干粉Ig/天），根據(jù)等效劑量 換算得到新西蘭兔的寬體金線蛭遲釋微丸的給藥劑量為64mg/kg(相當(dāng)于寬體金線蛭干粉 38. 3mg/kg/ 天）。
[0121] 4. 2試驗(yàn)步驟
[0122] (1)16只兔子禁食（6月16日晚），給藥后放回籠子并喂食
[0123] (2)給藥
[0124] -人坐抱兔子，一人使用開(kāi)口器使兔子張開(kāi)嘴巴，另一人灌藥以及灌水。
[0125] (3)檢測(cè)凝血時(shí)間
[0126] 在給藥前、給藥后 0. 5h、lh、I. 5h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、IOh,耳緣中動(dòng)脈米血。 各時(shí)間點(diǎn)在新西蘭兔左右耳交替采血，采血點(diǎn)前5min固定兔子。采血前新西蘭兔耳緣中 動(dòng)脈以及動(dòng)脈周圍組織剃毛，酒精棉球反復(fù)擦血管使血管充盈，采血時(shí)先用注射器針頭扎 破血管，再將毛細(xì)管放至血管破口處接血，使毛細(xì)管迅速被血充盈，血液流至毛細(xì)管開(kāi)始計(jì) 時(shí)。30s后開(kāi)始折斷一端的毛細(xì)管（接血的另一端開(kāi)始折），50s后每隔IOs折一次，當(dāng)一端 出現(xiàn)血絲時(shí)，折另一端的毛細(xì)管，兩端均出現(xiàn)血絲的時(shí)間即為凝血時(shí)間。
[0127] 5.動(dòng)物處理
[0128] 試驗(yàn)結(jié)束后空氣栓塞法將動(dòng)物處死，動(dòng)物尸體移交至廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心， 由動(dòng)物中心將動(dòng)物尸體送到廣州市衛(wèi)生處理廠進(jìn)行無(wú)害化處理。
[0129] 三、試驗(yàn)結(jié)果
[0130] 與溶劑對(duì)照組比較，受試品組在給藥后4、5、6、7、8h處的凝血時(shí)間均有顯著延長(zhǎng)， 抗凝作用可維持4h，給藥后6h達(dá)到抗凝血作用的最大值；而普通制劑對(duì)照組與溶劑對(duì)照 組比較，在給藥后0. 5、1、1. 5h凝血時(shí)間顯著延長(zhǎng)，抗凝作用可維持lh，凝血時(shí)間在給藥后 I. 5h達(dá)到最大值；遲釋制劑組（速釋微丸包衣）組給藥后5h達(dá)到抗凝血作用的最大值，但 持續(xù)時(shí)間較短，結(jié)果見(jiàn)表1。
[0131] 表1新西蘭兔寬體金線蛭微丸單次給藥的凝血時(shí)間（芡土SD)
[0132]
[0133] 與溶劑對(duì)照組比較：*P〈0. 05, **P〈0. 01。
[0134] 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)論
[0135] 寬體金線蛭遲釋微丸為寬體金線蛭提取物制備的遲釋微丸制劑。本實(shí)驗(yàn)對(duì)新西蘭 兔灌胃給予寬體金線蛭微丸，比較寬體金線蛭遲釋微丸與未包衣寬體金線蛭微丸及只延遲 釋藥（開(kāi)始釋藥后快速釋放）單次給藥抗凝血的時(shí)效關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與溶劑對(duì)照組比較， 受試品（寬體金線蛭遲釋微丸）組給藥后4、5、6、7、8h的凝血時(shí)間顯著延長(zhǎng)，抗凝作用可維 持4h，給藥后6h達(dá)到抗凝血作用的最大值；而普通制劑對(duì)照組（未包衣寬體金線蛭微丸） 與溶劑對(duì)照組比較，在給藥后〇. 5、1、1. 5h凝血時(shí)間顯著延長(zhǎng)，抗凝作用可維持lh，給藥后 I. 5h達(dá)到抗凝血作用的最大值；遲釋制劑組（速釋微丸包衣）組給藥后5h達(dá)到抗凝血作 用的最大值，但持續(xù)時(shí)間較受試品短，抗凝作用可維持2h。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)條件下，受試品 比普通制劑及只延遲釋放制劑對(duì)照品對(duì)新西蘭兔的抗凝血作用維持時(shí)間顯著延長(zhǎng)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種寬體金線蛭提取物緩釋微丸的制備方法，該方法包括以下步驟： a) 取寬體金線蛭提取物，分別加入寬體金線蛭提取物重量2-10倍的骨架材料、0. 1-1 倍的致孔劑、0. 05-0. 5倍的粘合劑和0. 01-0. 1倍的口服吸收促進(jìn)劑，混合均勻后用蒸餾水 潤(rùn)濕制備軟材，再經(jīng)擠出、滾圓、干燥和過(guò)24-40目篩的工藝，即得載藥微丸；其中，所述的 骨架材料為微晶纖維素和淀粉中一種，或二者的混合物；所述的致孔劑為乳糖、聚乙二醇或 氯化鈉；所述的粘合劑為羥丙基甲基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮；所述的口服吸收促進(jìn)劑為 SANC或十_烷基硫酸納； b) 在包衣鍋或流化床中，分別加入所述載藥微丸重量0. 1-0. 5倍的溶脹材料和 0. 01-0. 1倍的粘合劑，用蒸餾水溶解并混勻，然后，往包衣鍋或流化床中加入所述的載藥微 丸，在25°C _45°C下噴霧包裹溶脹衣膜；其中，所述的溶脹材料為交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮或低 取代羥丙級(jí)纖維素，所述的包衣粘合劑為聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基甲基纖維素； c) 按步驟b)所得包衣溶脹衣膜的載藥微丸的重量以控釋材料中的固含量計(jì)取 0. 033-0. 5倍的控釋材料，置于包衣鍋或流化床中，加入控釋材料重量的0. 02-0. 2倍的 增塑劑和控釋材料重量的〇. 01-0. 5倍的抗粘劑，用蒸餾水溶解，混合均勻。然后，往包衣 鍋或流化床中加入步驟b)所得包裹溶脹衣膜的載藥微丸，在25°C -45°C下進(jìn)行噴霧包 裹控釋衣膜；其中，所述的控釋材料是EudragirtS30D、EudragifRLSOD、EuclragirtE 30D、EudragitlRSlOO、EudragiteRL100 或乙基纖維素中的一種，或者是 Eudragit*RS30D 和 Eudragit*RL30D 的混合物，或者是 EudragitlSRS100 和 EudragitlUOO 的混合物；當(dāng) 所述的控釋材料是 Eudragit*RS30D 和 EudragitsRL30D 的混合物時(shí)，EudragitsRS30D 與 Eii:dr_ag.it;4_R:L3〇D 的重量比=5:1-50:1 ;當(dāng)所述的控釋材料是 E_ud_r_a:|it:''RSH)Q 和 Eudragi1:*RLK)0 的混合物時(shí)，Eudragii^RSlOO 與 Eudragit*RLK)0 的重量比=5:1-50:1 ;所 述的增塑劑是聚乙二醇、檸檬酸三乙酯或癸二酸二丁酯；所述的抗粘劑是單硬脂酸甘油酯 或滑石粉； d) 按步驟c)所得包衣溶脹衣膜的載藥微丸的重量以腸溶材料中的固含量計(jì)取 0. 033-0. 5倍的腸溶釋材料，置于包衣鍋或流化床中，加入腸溶材料重量0. 02-0. 2倍的增 塑劑和0. 01-0. 5倍的抗粘劑，用蒸餾水溶解，混合均勻。然后，往包衣鍋或流化床中加入步 驟c)所得包衣控釋衣膜的載藥微丸，在25°C_45°C下進(jìn)行噴霧包裹腸溶衣膜；其中，所述的 腸溶材料為Eudmgitt3Q:E)-55、EudfagitllOQ-?、鄰苯二甲酸醋酸纖維素或羥丙基甲基 纖維素酞酸酯；所述的增塑劑為聚乙二醇或檸檬酸三乙酯；所述的抗粘劑為單硬脂酸甘油 酯或滑石粉。2. -種寬體金線蛭提取物緩釋微丸的制備方法，其特征在于，寬體金線蛭提取物為寬 體金線蛭的水提物。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種寬體金線蛭提取物緩釋微丸的制備方法，該方法包括取寬體金線蛭提取物制備載藥微丸以及在載藥微丸外依次包裹溶脹衣膜、包裹控釋衣膜和包裹腸溶衣膜的步驟。本發(fā)明所述的緩釋微丸為pH-時(shí)間控制相結(jié)合的緩釋制劑，該緩釋制劑可使所含的寬體金線蛭提取物延時(shí)至小腸末端至結(jié)腸部位控制釋藥，避免寬體金線蛭有效組分被消化道各種蛋白酶所破壞，提高藥物的生物利用度。
【IPC分類】A61K47/34, A61K35/62, A61P7/02, A61K47/32, A61K9/16, A61K47/38, A61K47/36
【公開(kāi)號(hào)】CN105267149
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410310968
【發(fā)明人】關(guān)世俠
【申請(qǐng)人】廣州瑞濟(jì)生物技術(shù)有限公司
【公開(kāi)日】2016年1月27日
【申請(qǐng)日】2014年7月1日