瑞香毒素類(lèi)二萜在制備抗艾滋病毒藥物中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬中藥制藥領(lǐng)域，涉及瑞香狼毒中瑞香毒素類(lèi)二萜在制備抗艾滋病毒藥物 中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 艾滋?。ˋIDS)自1981年美國(guó)診斷出首例AIDS患者之后，在全球范圍內(nèi)的傳播速 度驚人，被稱(chēng)為"20世紀(jì)的瘟疫〃，對(duì)人類(lèi)健康生存和社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅，其 傳播之快、危害之大，引起了全世界的廣泛關(guān)注。
[0003] 藥物化學(xué)工作者在篩選抗HIV藥物的過(guò)程中進(jìn)行了不懈的努力，但到目前為止能 治愈HIV感染的特效藥還在尋找。盡管著名的雞尾酒療法可將艾滋病患者血清中HIV病毒 的載量降低至檢測(cè)限以下，并不意味著HIV病毒得到了徹底的清除。這是因?yàn)镠IV病毒進(jìn) 入人體內(nèi)首先處于潛伏期，而處于潛伏期的HIV病毒可以躲過(guò)免疫系統(tǒng)和藥物的攻擊而不 受影響，這也是目前艾滋病得不到根治的原因之一。在篩選抗HIV新藥的過(guò)程中，越來(lái)越多 的藥物化學(xué)工作者把注意力轉(zhuǎn)向了植物來(lái)源豐富、價(jià)廉易得、毒副作用小、分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜多 樣的天然化合物。
[0004] 瑞香狼毒（Stellera chamaejasme)俗稱(chēng)斷腸草、饅頭花、山蘿卜等，為瑞香科 (Thymelaeaceae)狼毒屬（Stellera)多年生草本植物，其藥用部位為根，廣泛分布在我國(guó) 東北、西北、西南，河北及尼泊爾等地，其性味苦辛，有毒，有逐水祛痰、破積殺蟲(chóng)之功效。《中 藥大辭典》記載其主治水腫腹脹、痰、食、蟲(chóng)積、心腹疼痛、慢性氣管炎、咳嗽、氣喘、淋巴結(jié)、 皮膚結(jié)核、疥癬、痔痰等。近年有研究發(fā)現(xiàn)其具有抗腫瘤和抗病毒作用。
[0005] 本申請(qǐng)的發(fā)明人擬提供具有較強(qiáng)抗HIV活性的瑞香狼毒中的瑞香毒素二萜類(lèi)在 制備抗艾滋病病毒藥物中的用途。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供瑞香毒素類(lèi)二萜新的藥用用途，尤其涉及瑞香狼毒中瑞香毒 素類(lèi)二萜在制備抗艾滋病病毒藥物中的用途。
[0007] 本發(fā)明應(yīng)用現(xiàn)代藥理篩選方法，對(duì)植物藥中抑制HIV的活性物質(zhì)進(jìn)行研究，從瑞 香科狼毒屬（Stellera)植物瑞香狼毒（S. chamaejasme)中提取瑞香毒素二廠類(lèi)并證明其 具有較強(qiáng)的抗HIV活性。
[0008] 本發(fā)明涉及的瑞香毒素二萜類(lèi)化合物包括：瑞香內(nèi)酯Ustelleralide I) (1)、 wikstroelide B(2)和 wikstrotoxin A(3)。其中 stelleralide 1(1)為新化合物。
[0009] 本發(fā)明所述的瑞香毒素類(lèi)二萜具有如下I的結(jié)構(gòu)通式：
[0010]
[0011] 本發(fā)明涉及的瑞香狼毒（S. chamaejasme)在我國(guó)有豐富的藥用資源。本發(fā)明從瑞 香狼毒中分離得到瑞香毒素類(lèi)二萜，并經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)瑞香毒素類(lèi)二萜有較好的抗HIV活性。
[0012] 本發(fā)明所述的的化合物通過(guò)下述方法制備：
[0013] 取瑞香狼毒根40kg，95 %乙醇加熱回流提取，提取物濃縮后用石油醚萃取，共得 浸膏400g，取350g干法上樣進(jìn)行硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮梯度洗脫。石油醚-丙酮 (5:1~2:1)的流份經(jīng)MCI柱甲醇/水（4:1)除去色素，用石油醚-乙酸乙酯（20:1~1:1) 反復(fù)硅膠柱色譜，然后運(yùn)用S印hadexLH-20進(jìn)行分離，用環(huán)己烷/二氯甲烷/甲醇（4:5:1) 洗脫，最后用HPLC制備液相進(jìn)行純化，以乙腈/水(60:40~85:15)梯度洗脫，分離得到 stelleralide I(1)、wikstroelide B(2)和 wikstrotoxin A(3)〇
[0014] 其中化合物stelleralide I (1)為新化合物。
[0015] Stelleralide 1(1)，C35H5009 (614)，白色無(wú)定型粉末，〇]2D° +21.6 (c 0.10， MeQH)：; IR(KBr) vnax：3435, 2920, 2843, 1709, 1616, 1463, 1375, 1019cm 1 ；UV(MeOH) 入 (log ε ) : 230 (3. 98) ;CD (0· 00065M, MeOH) λ nax ( Λ ε ) 226 ( - 12. 1)，242 (5. 82) nm :? 和13CNMR數(shù)據(jù)見(jiàn)表1和2。
[0016] Wikstroelide B (2)，C37H52010 (656)，白色無(wú)定型粉末，[?.+ 1.7· S (e'O. 11; le聰）；IR(KBr) vnax :34 15, 2938, 2832, 1710, 1630, 1420, 1008cm 1 ;UV(Me0H) 入 (log ε ) : 234 (3. 76) ;CD (0· 00060M，MeOH) λ nax ( Λ ε ) 224 ( - 12. 6)，240 (5. 77) nm :? 和13CNMR數(shù)據(jù)如表1和2所示；
[0017] WikstrotoxinA(3), C35H50Os(598),白色無(wú)定型粉末，[.σ] D + 20, 2 (c0. 12， MeOH) ； IR(KBr) v nax： 3440, 2965, 2842, 1712, 1625, 1428, 1011cm 1 ；UV (MeOH)λ max (l〇g ε ) ：UV(Me0H) Anax(l〇g ε ) :238(3. 92) ； CD (0. 00058M, MeOH) λ_(Λ ε )224( - 1L 8), 240(5. 96)nm :? 和 13CNMR 數(shù)據(jù)如表 1 和 2 所示。
[0018] 表1化合物1-3的4(4001抱）匪1?數(shù)據(jù)（0)(：13,3 in ppm, J in Hz)
[0019]
[0021] 表 2 化合物 1 - 3 的 13C(100MHz)NMR 數(shù)據(jù)（CDC13, δ in ppm)
[0022]
[0024] 本發(fā)明所述的瑞香毒素類(lèi)二萜進(jìn)行了經(jīng)體外抗HIV活性試驗(yàn)，結(jié)果顯示其具有較 強(qiáng)的抗HIV作用，且有效濃度低，細(xì)胞毒性較小的特點(diǎn)（如表3所示）；其中，wikstrotoxin A (3)抗HIV活性最強(qiáng)，EC5。值分別為0. 013 μ M，治療指數(shù)（ΤΙ)分別為1284,明顯強(qiáng)于陽(yáng)性 對(duì)照藥齊多夫定（AZT，EC5。= 0·032μΜ，ΤΙ>116·87)，wikstroelideB(2)的 EC5。值和陽(yáng)性 對(duì)照藥齊多夫定相當(dāng)為0. 039μΜ，但其治療指數(shù)為392高于齊多夫定，新化合物瑞香內(nèi)酯 I (stelleralide I) (1)具有較強(qiáng)的抗 HIV 活性，其 EC5。值為 0· 12 μ Μ。
[0025] 本發(fā)明所述的瑞香毒素類(lèi)二萜可作為活性成分用于制備抗艾滋病毒的藥物。
【附圖說(shuō)明】：
[0026] 圖1是瑞香狼毒中瑞香毒素類(lèi)二萜成分提取分離工藝流程圖，
[0027] 其中，A :石油醚-乙酸乙酯，Β:甲醇-水，C:環(huán)己烷-二氯甲烷-甲醇，D:乙 臆-水。
【具體實(shí)施方式】
[0028] 實(shí)施例1制備瑞香狼毒中的瑞香毒素類(lèi)二萜
[0029] 取瑞香狼毒根40kg，95 %乙醇加熱回流提取，提取物濃縮后用石油醚萃取，共得 浸膏400g，取350g干法上樣進(jìn)行硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮梯度洗脫。石油醚-丙酮 (5:1~2:1)的流份經(jīng)MCI柱（甲醇/水（4:1))除去色素，用石油醚-乙酸乙酯（20:1~ 1:1)進(jìn)行反復(fù)硅膠柱色譜，然后運(yùn)用S印hadex LH-20進(jìn)行分離，用環(huán)己烷/二氯甲烷/甲 醇（4:5:1)洗脫，最后用HPLC制備液相進(jìn)行純化，以乙腈/水(60:40~85:15)梯度洗脫， 分離得到瑞香內(nèi)酯 stelleralide I(l)、wikstroelide B(2)和 wikstrotoxin A(3)。
[0030] 實(shí)施例2體外抗HIV實(shí)驗(yàn)
[0031] 應(yīng)用HIV-1NL4-3病毒株感染MT4細(xì)胞（感染倍數(shù)=0.001)，同時(shí)加入不同濃度的 藥物。感染48小時(shí)候加入含適宜濃度藥物的新鮮基質(zhì)以維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng)，4天后采用 P24ELISA試劑盒分析病毒的復(fù)制情況。實(shí)驗(yàn)以齊多夫定（AZT)為陽(yáng)性對(duì)照藥物?；衔锏?EC5。指藥物抑制HIV-1P24抗原產(chǎn)生降低至50%時(shí)的藥物濃度。采用線性回歸分析法求得 EC5〇 (Biosoft software) 〇
[0032] 表3瑞香毒素類(lèi)二萜抗HIV活性
【主權(quán)項(xiàng)】
1.具有如下結(jié)構(gòu)通式I的瑞香毒素類(lèi)二萜在制備抗艾滋病毒藥物中的用途，其中，當(dāng)R = 0H時(shí)，化合物為stelleralideia);時(shí)，化合物為 wikstroelideB(2);當(dāng)R = Η時(shí)，化合物為wikstrotoxinA(3)。2. 式I結(jié)構(gòu)的瑞香毒素類(lèi)二萜，其中，R= 0H。3. 按權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的瑞香毒素類(lèi)二萜通過(guò)下述方法制備： 取瑞香狼毒根，95%乙醇加熱回流提取，提取物濃縮后用石油醚萃取，得浸膏，干法上 樣進(jìn)行硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮梯度洗脫，石油醚-丙酮（5:1~2:1)的流份經(jīng)MCI柱甲醇/水（4:1)除去色素，用石油醚-乙酸乙酯（20:1~1:1)反復(fù)硅膠柱色譜，然后用 S印hadexLH-20分離，用環(huán)己烷/二氯甲烷/甲醇（4:5:1)洗脫，最后用HPLC制備液相純化， 以乙臆 / 水（60:40 ~85:15)梯度洗脫，分離得到ste11eralidel(1)、wikstroelideB(2) 和wikstrotoxinA(3)〇
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬中藥制藥領(lǐng)域，涉及瑞香毒素類(lèi)二萜在制備抗艾滋病毒藥物中的用途。本發(fā)明從狼毒屬(Stellera)植物瑞香狼毒(S.chamaejasme)中提取到瑞香毒素類(lèi)二萜化合物，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)其具有較強(qiáng)的抗HIV活性，所述的化合物經(jīng)與陽(yáng)性對(duì)照藥齊多夫定的藥理試驗(yàn)比較，結(jié)果表明其具有較強(qiáng)的抗HIV作用，且有效濃度低，細(xì)胞毒性較小，本發(fā)明所述的化合物瑞香毒素類(lèi)二萜可作為活性成分用于制備抗艾滋病毒的藥物。
【IPC分類(lèi)】C07D493/18, A61K31/357, A61P31/18
【公開(kāi)號(hào)】CN105287497
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410309142
【發(fā)明人】陳道峰, 嚴(yán)敏, 盧燕, 李國(guó)雄
【申請(qǐng)人】復(fù)旦大學(xué)
【公開(kāi)日】2016年2月3日
【申請(qǐng)日】2014年6月30日