一種組合物及其在抗急性腎衰藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 急性腎功能衰竭（Acute Renal Failure，ARF)是由多種原因引起的臨床綜合征， 可見(jiàn)于臨床各科病人，發(fā)病率高且往往帶來(lái)嚴(yán)重后果，其特點(diǎn)為短期內(nèi)（數(shù)小時(shí)至數(shù)天）腎 功能急劇下降，臨床表現(xiàn)為急性少尿（尿量<400mLPd)或無(wú)尿（尿量〈lOOmLPd)，體內(nèi)氮質(zhì) 代謝產(chǎn)物排出產(chǎn)生障礙，迅速出現(xiàn)氮質(zhì)血癥，水及電解質(zhì)、酸堿平衡紊亂，并引起全身各系 統(tǒng)相應(yīng)功能失調(diào)。引起急性腎衰的主要因素是腎血流量的急劇減少，以及由于腎組織缺血 引起的氧化應(yīng)激和細(xì)胞損傷，最終導(dǎo)致腎臟組織結(jié)構(gòu)的破壞和功能的惡化。目前臨床上尚 無(wú)公認(rèn)的治療急性腎衰有效的藥物，僅能通過(guò)糾正水電解質(zhì)平衡，糾正酸中毒等對(duì)癥治療 措施改善癥狀，后期還需要通過(guò)血液透析維持機(jī)體機(jī)能。在改善腎臟血流灌注障礙和減輕 腎組織損傷方面有明顯療效的臨床藥物少見(jiàn)。
[0003] 從天然產(chǎn)物中尋找化合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到 高效低毒的潛在藥物最有重要價(jià)值。
[0004] 本發(fā)明涉及的化合物I是一個(gè)2011年發(fā)表（Antonella Maggio et al.，2011. Artalbic acid,a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba (Asteraceae) from Sicily. Tetrahedron Letters，52(2011)4543 - 4545)的化合物， 我們對(duì)化合物I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個(gè)新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化 合物III和化合物IV制備了組合物并對(duì)該組合物抗急性腎衰活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，其具有抗急 性腎衰活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明公開(kāi)了一個(gè)新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合 物中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為55%和45%。
[0006]
[0007] 本發(fā)明公開(kāi)的組合物可以制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。
[0008] 本發(fā)明的目的是提供組合物用于治療急性腎衰的用途，即用于制備治療急性腎衰 藥物的用途。
[0009] 本發(fā)明的組合物對(duì)急性腎衰疾病有明顯的治療作用。
[0010] 通過(guò)我們的研究發(fā)現(xiàn)組合物能夠改善腎臟的功能。
[0011] 以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí) 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
【具體實(shí)施方式】
[0012] 實(shí)施例1化合物Artalbic acid的制備
[0013] 化合物Artalbic acid(I)的制備方法參照Antonella Maggio等人發(fā)表的 文南犬(Antonella Maggio et al. , 2011. Artalbic acid, a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba(Asteraceae)from Sicily. Tetrahedron Letters, 52(2011)4543 - 4545)的方法。
[0014]
[0015] 實(shí)施例2 Artalbic acid的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0016] 將化合物I (266mg，1. OOmmol)溶于10mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（TBAB) (0. 08g)，1，2-二溴乙烷（3. 760g，20.0 Ommol)和6mL的50 %氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?0 攝氏度攪拌16h。16h之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機(jī)相 溶液。然后對(duì)有機(jī)相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌5次，再用無(wú)水硫酸鈉干燥，最后減 壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動(dòng)相為：石油醚/丙酮 =100:1.0, v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末（272mg， 73% ) 〇
[0017] 4 NMR (500MHz，DMS0-d6) δ 11. 41 (s，1H)，6. 06 (s，1H)，5. 76 (s，1H)，4. 99 (s，1H)，4 .71 (s, 1Η), 4. 56 (s, 1H), 3. 86 (s, 2H), 3. 54 (s, 2H), 2. 65 (s, 1H), 2. 43 (s, 2H), 2. 33 (s, 2H), 2 .10 (s, 1H), 1. 64 (s, 3H), 1. 54 (s, 1H), 1. 44 (s, 2H), 0. 95 (s, 3H).
[0018] 13C NMR(125MHz，DMS0-d6) δ 201. 95(s)，175. 93(s)，149. 13(s)，148. 15(s)，117. 0 5 (s), 109. 43 (s), 81. 86 (s), 70. 27 (s), 57. 68 (s), 41. 26 (s), 39. 07 (s), 38. 86 (s), 35. 69 (s) ,33. 36 (s), 30. 72 (s), 20. 44 (s), 18. 42 (s).
[0019] HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcd for C17H26Br04:3 7 3. 10 1 4 ；found 373. 1017.
[0021] 實(shí)施例3 Artalbic acid的0-(哌啶基）乙基衍生物（III)的合成
[0022] 將化合物II (187mg，0. 5mmol)溶于20mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無(wú)水碳酸鉀 (345mg，2. 5mmol)，鵬化鉀（84mg，0. 5mmol)和哌啶（852mg，lOmmol)，混合物加熱回流 10h。 反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取三次，合并有機(jī)相。依次用水 和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物 粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動(dòng)相為：石油醚/丙酮=100:0.5, v/v)，收集棕色 集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物ΠΙ的棕色粉末（118. 76mg，63% )。
[0023] 4 MMR (500MHz，DMS0-d6) δ 13. 93 (s，1H)，δ 6. 13 (s，1H)，5. 83 (s，1H)，4. 74 (s， 1Η), 4. 64 (s, 1Η), 3. 97 (s, 1H), 3. 56 (s, 2H), 2. 71 (s, 1H), 2. 61 (s, 2H), 2. 51 (d, J = 4. 4Hz ,4H), 2. 46 (s, 4H), 2. 16 (s, 1H), 1. 69 (s, 3H), 1. 55 (d, J = 13. 5Hz, 6H), 1. 44 (d, J = 12. 0Hz, 3H), 1. 03 (s, 3H).
[0024] 13C NMR(125MHz，DMS0-d6) δ 201. 95(s), 175. 95(s), 149. 17(s), 148. 18(s), 117. 1 0 (s), 109. 45 (s), 81. 87 (s), 67. 09 (s), 57. 73 (s), 54. 60 (d, J = 12. 4Hz) ,41.31 (s), 39. 09 ( s), 38. 87 (s), 35. 72 (s), 30. 78 (s), 24. 60 (s), 23. 47 (s), 20. 46 (s), 18. 45 (s).
[0025] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C22H36N04:3 78 . 26 44 ;found:378. 2639。
[0027] 實(shí)施例4 Artalbic acid的0-(嗎啉基）乙基衍生物（IV)的合成
[0028] 將化合物II (187mg，0. 5mmol)溶于20mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無(wú)水碳酸鉀 (345mg，2. 5mmol)，鵬化鉀（84mg，0. 5mmol)和嗎啉（1742mg，20mmol)，混合物加熱回流 6h。 反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入30mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取三次，合并有機(jī)相。依次用水 和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物 粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動(dòng)相為：石油醚/丙酮=100:0.5, v/v)，收集棕色 集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物IV的棕色粉末（108. Omg，57% )。
[0029] NMR (500MHz, DMS〇-d6) δ 16. 75(s, 1Η), δ 6. 1 3 (dt, J = 4. 0, 1. 9Hz, 1H) , 5. 83 (dt, J = 3. 9, 1. 8Hz, 1H) , 4. 79 - 4. 68 (m, 2H) , 4. 68 - 4. 59 (m, 1H), 3. 58 (dt, J = 15. 2, 8. 1Hz, 6H), 2. 79 - 2. 38 (m, 11H), 2. 03 (dd, J = 24. 7, 17. 8Hz, 1H), 1. 70 (t, J = 2. 0Hz, 3H), 1. 50 (ddd, J = 20. 4, 17. 8, 4. 5Hz, 3H), 1. 02 (s, 3H).
[0030] 13C NMR(125MHz，DMS0-d6) δ 201. 95(s), 175. 95(s), 149. 18(s), 148. 19(s), 117. 1 2 (s), 109. 45 (s), 81. 88 (s), 67. 10 (s), 66. 88 (s), 57. 72 (s), 54. 57 (s), 53. 02 (s) ,41.31 (s) ,39. 09 (s), 38. 90 (s), 35. 72 (s), 30. 78 (s), 20. 47 (s), 18. 46 (s).
[0031] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C21H34N05:380 . 24 3 7 ;found:380. 2431。
[0033] 實(shí)施例5組合物對(duì)急性腎衰大鼠的治療作用
[0034] ( -）實(shí)驗(yàn)方法
[0035] 組合物的制備：將研磨之后過(guò)200目網(wǎng)的55mg化合物III的粉末和研磨之后過(guò) 200目網(wǎng)的45mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組 合物，使用時(shí)用水溶解這l〇〇mg的組合物即得到組合物的溶液。
[0036] 采用肌肉注射甘油致急性腎功能衰竭大鼠動(dòng)物模型。選用180~220g健康雄性 SD大鼠30只，隨機(jī)分為5組：假手術(shù)組（肌肉注射生理鹽水）；模型組（肌肉注射甘油）； 給藥干預(yù)組（組合物、化合物III或者化合物IV 0. 6mg/Kg，肌肉注射甘油），各組大鼠在甘 油造模后立即尾靜脈注射生理鹽水或待試藥物，12和24小時(shí)后再給藥一次。
[0037] (二）觀察指標(biāo)
[0038] 大鼠末次給藥或生理鹽水后放入代謝籠收集24小時(shí)尿，留尿后6小時(shí)用4%水合 氯醛腹腔注射麻醉，采用激光多普勒血流儀測(cè)定造模后及治療后雙側(cè)腎臟血流量，取平均 值作為單只動(dòng)物腎血流量；取血制備血清，測(cè)定血BUN和Cre (均按試劑盒說(shuō)明書操作）。
[0039] (三）實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0040] 1.組合物可增加急性腎衰小鼠腎血流量
[0041] 組合物可顯著增加急性腎衰小鼠腎血流量，而化合物III和化合物IV無(wú)此作用。
[0042] 表1組合物對(duì)急性腎衰小鼠腎血流量的影響
[0043]
[0044] *Ρ〈0· 05vs急性腎衰模型組
[0045] 2.組合物對(duì)急性腎衰小鼠腎功能具保護(hù)作用
[0046] 急性腎衰大鼠靜脈注射生理鹽水24小時(shí)后，血清BUN和Cre見(jiàn)表2。急性腎衰模 型組明顯高于假手術(shù)組，說(shuō)明模型組動(dòng)物腎功能損害嚴(yán)重。組合物能改善急性腎衰大鼠的 腎功能（P〈〇. 05)，而化合物III和化合物IV無(wú)此作用。見(jiàn)表2。
[0047] 表2各試驗(yàn)組大鼠腎功能指標(biāo)比較
[0049] *P〈0. 05vs急性腎衰模型組
[0050] 結(jié)論：組合物能夠保護(hù)腎臟的功能，可以用來(lái)制備抗急性腎衰藥物。而化合物III 和化合物IV不能夠保護(hù)腎臟，不可用來(lái)制備抗急性腎衰藥物。
[0051 ] 實(shí)施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
[0052] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成100片。
[0053] 實(shí)施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
[0054] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100 粒。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為55%和45%，2. 如權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為：將化合物III的粉末和化合物 IV的粉末按照質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為55 %和45 %充分混合。3. -種如權(quán)利要求1所述的組合物在治療急性腎衰藥物中的應(yīng)用。4. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療急性腎衰藥物中的應(yīng)用，其特征為：所述組合物 改善急性腎衰所引起的腎臟血流量的降低。5. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療急性腎衰藥物中的應(yīng)用，其特征為：所述組合物 改善急性腎衰引起的血清BUN的升高。6. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療急性腎衰藥物中的應(yīng)用，其特征為：所述組合物 改善急性腎衰引起的血清Cre的升高。
【專利摘要】本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其在制備抗急性腎衰藥物上的用途。本發(fā)明公開(kāi)了一種組合物及其制備方法。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的組合物具有抗急性腎衰的作用，具有開(kāi)發(fā)抗急性腎衰藥物的價(jià)值。
【IPC分類】A61K31/4453, A61P13/12, A61K31/5375
【公開(kāi)號(hào)】CN105287585
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510744581
【發(fā)明人】丁秋菊
【申請(qǐng)人】南京海澳斯生物醫(yī)藥科技有限公司
【公開(kāi)日】2016年2月3日
【申請(qǐng)日】2015年11月5日