具有增加抗腫瘤藥物療效的載體溶媒、制備方法及其給藥途徑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及用于增加抗腫瘤藥效的載體溶媒和制備方法，本發(fā)明還涉及該載體溶 媒的給藥途徑，本發(fā)明還涉及聯(lián)合使用的抗腫瘤藥物。屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 據(jù)統(tǒng)計(jì)，由于惡性腫瘤引起的死亡，全世界每年有850萬(wàn)以上，因此，有效地控制 惡性腫瘤，是醫(yī)藥工作者艱巨而迫切的任務(wù)。
[0003] 對(duì)惡性腫瘤的治療主要是應(yīng)用手術(shù)、放療和各種抗惡性腫瘤藥物化療，上述方法 各有其特點(diǎn)，但也存在有一定的局限性，特別是抗惡性腫瘤藥物化療時(shí)，藥效下降，效果不 明顯等。增加已有抗腫瘤藥物的療效是提高化療效果重要方法。
[0004] 許多抗腫瘤藥物，由于藥物理化性質(zhì)、藥動(dòng)學(xué)、藥效學(xué)原因，必須采取注射全身給 藥或局部注藥途徑給藥。常用的溶媒有生理鹽水和葡萄糖溶液。此類溶媒僅作為抗腫瘤藥 物的載體溶媒，本身不具備抗腫瘤功效，也不能增強(qiáng)其他抗腫瘤藥物的藥效。
[0005] 重水，化學(xué)名：氧化氣，英文：Deuteriumoxide,分子式：D20,從海水中分離獲得。 在體內(nèi)濃度30 %以上有害，以成人體重60kg計(jì)，人體內(nèi)有重水18kg時(shí)，始有毒性，由于人 體內(nèi)有重水18kg是不可能，因此重水屬于無(wú)毒或低毒物質(zhì)[D.M.Czajka:Physiological effectsofdeuteriumoxideondogs.Am.J.Physiol. 201 (1961) :357-362]〇
[0006] GrossP.R.于上世紀(jì)60年代發(fā)現(xiàn)重水有抑制細(xì)胞DNA合成酶的作用（Blockade ofDeoxyribouncleicacidsynthesisbydeuteriumoxide.Science133(1961)： 1131-1133。Theinhibitionofmitosisbydeuteriumoxide.AnnNYAcadSci 84(1960) :745-754)。隨后，Laissue等采用體外腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)，研究重水抗腫瘤作用 (Survivaloftumorbearingmiceexposedtoheavywaterorheavywaterplus methotrexate，CancerRes. 42 (1982) 1125-1129)。Altermatt等使用人腫瘤細(xì)胞株裸 鼠荷瘤模型，研究口服重水在體內(nèi)抗腫瘤作用（Heavywaterdelaygrowthofhuman carcinomainnudemice.Cancer62(1988) :462-466.Heavywaterenhancethe antieoplasticeffectof5-fluoro-uracilandbleomycieinnudemicebearing humancarcinoma.Int.JCancer. 45(1990) :475-480.)。近 10 年來(lái)，Hartmann等證實(shí)重 水可抑制膜腺癌細(xì)胞增殖（Effectsofheavywater(D20)onhumanpancreatictumor cells.AnticancerRes. 25(2005) :3407-3412)。Bahk等證實(shí)重水可抑制膀胱癌細(xì)胞增殖 (AnticancereffectofdeuteriumoxideonabladdercancercellrelatedtoBCL2 andbax.J.Ind.Eng.Chem. 13 (2007) :501-507)。2005 年歐盟衛(wèi)生當(dāng)局宣布，批準(zhǔn)Orphan designation公司（EU/3/04/239)，使用重水進(jìn)行人體治療胰腺癌的臨床前試驗(yàn)（Doc. Ref. ：EMEA/C0MP/69735/2004Rev. 1)〇
[0007] 綜合上述研究，本申請(qǐng)人發(fā)現(xiàn)，體內(nèi)研究都是采用傳統(tǒng)的口服重水方式，而且為達(dá) 到有效的治療劑量，必須給予動(dòng)物或病人口服相當(dāng)劑量，比如在動(dòng)物試驗(yàn)中，將重水加入飲 用水中到豐（濃）度為30%，任動(dòng)物隨意飲用。此種口服重水給藥方式有嚴(yán)重缺陷：一來(lái) 用量大，易達(dá)到重水毒性劑量范圍；二來(lái)每只動(dòng)物飲用水量不同，重水用量不能量化，無(wú)法 比較不同動(dòng)物的治療效果，并受到消化、吸收、代謝等藥動(dòng)學(xué)因素影響，致攝入量大且藥效 有限，成藥可能性??；三來(lái)大多數(shù)抗腫瘤藥物因各種原因不能口服給藥，如常用抗腫瘤藥5 氟尿嘧啶（5-FU) 口服吸收不完全，因此很難將重水與抗腫瘤藥物聯(lián)合使用；四來(lái)許多中晚 期腫瘤病人已有吞咽困難、或消化道手術(shù)，無(wú)法進(jìn)食進(jìn)水。
[0008] 針對(duì)上述技術(shù)缺陷，本發(fā)明突破傳統(tǒng)的口服重水方式，使用重水配制成各種溶液， 并以此類溶液作為載體溶媒，溶解或稀釋臨床所用各種抗腫瘤藥物，作為抗腫瘤藥物的載 體，直接注射給藥或灌注給藥，例如：靜脈注射、靜脈滴注、動(dòng)脈導(dǎo)管注射、瘤體注射、直腸灌 洗、膀胱灌洗、胸腔灌洗、腹腔灌洗。改變了重水在體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)，其重水本身具有抗腫瘤的藥 效；而且又協(xié)同增強(qiáng)其他抗腫瘤藥物的藥效，治療惡性腫瘤，取得意想不到的效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明的目的在于提供一種療效好、使用方便、毒副作用小的具有抗腫瘤增效的 載體溶媒和制備方法。本發(fā)明的另一目的在于提供該載體溶媒的使用途徑。
[0010] 本發(fā)明提供的用于抗腫瘤增效的載體溶媒，是由下述重量配比的原料制成：用重 水配制，重水，化學(xué)名：氧化氣，英文：Deuteriumoxide,分子式：D20,分子量20,配制用豐 (濃）度為：1-99. 999%。重水用于配制臨床抗腫瘤藥物的載體溶媒，包括但不限于：① 不含其他成份的純重水溶液；②含〇. 9 %氯化鈉的注射用或灌洗用生理鹽重水溶液；③含 5-25%葡萄糖的注射用或灌洗用重水溶液；④含0. 9%氯化鈉和5-10%葡萄糖的注射用或 灌洗用重水溶液；⑤含5-50%碳酸氫鈉的注射用或灌洗用重水溶液；⑥以重水參入為基質(zhì) 成份0. 1-99. 9 %的乳劑、霜?jiǎng)?、油劑、脂質(zhì)體等制劑。
[0011] 該載體溶媒具有增加臨床所用抗腫瘤藥物療效的功效，溶解或稀釋臨床所用抗腫 瘤藥物，采用靜脈注射、靜脈滴注、灌洗用等途徑給藥。療效好、使用方便、毒副作用小。
【附圖說(shuō)明】：
[0012] 圖1.生理鹽重水（DJ001)濃度-細(xì)胞存活率曲線。
[0013] 圖2.生理鹽重水（DJ001)聯(lián)合5Fu對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。
[0014] 圖3.生理鹽重水（DJ001)聯(lián)合吉西他濱（GM)對(duì)肺癌A549細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。
[0015] 圖4.生理鹽重水（DJ001)聯(lián)合5-Fu對(duì)人結(jié)腸癌裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)抑制作用。
[0016] 圖5.生理鹽重水（DJ001)聯(lián)合5-Fu對(duì)人胃癌裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)抑制作用。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面結(jié)合實(shí)施例及臨床觀察試驗(yàn)報(bào)告對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。
[0018] 實(shí)施例1
[0019] 稱取藥用級(jí)氯化鈉9克，加入上述重水920ml溶解氯化鈉9克，攪拌使溶解，用氫 氧化鈉溶液調(diào)PH值至7. 0~8. 0,加上述重水至1000ml，用G4垂熔漏斗濾過(guò)，灌裝密封，滅 菌消毒，即得本發(fā)明〇. 9%氯化鈉生理鹽重水溶液。
[0020] 實(shí)施例2
[0021] 稱取藥用級(jí)葡萄糖50-250克，加入上述重水920ml，攪拌使溶解，用氫氧化鈉溶液 調(diào)PH值至7. 0~8. 0,加上述重水至1000ml，用G4垂熔漏斗濾過(guò)，灌裝密封，滅菌消毒，即 得本發(fā)明5-25 %葡萄糖重水溶液。
[0022] 實(shí)施例3
[0023] 稱取藥用級(jí)氯化鈉9克、葡萄糖50-100克，加入上述重水920ml，攪拌使溶解，用氫 氧化鈉溶液調(diào)PH值至7. 0~8. 0,加上述重水至1000ml，用G4垂熔漏斗濾過(guò)，灌裝密封，滅 菌消毒，即得本發(fā)明〇. 9%氯化鈉5-10%葡萄糖重水溶液。
[0024] 實(shí)施例4
[0025] 稱取藥用級(jí)碳酸氫鈉50-500克,加入上述重水920ml,攪拌使溶解,用氫氧化鈉溶 液調(diào)PH值至7. 0~8. 0,加上述重水至1000ml，用G4垂熔漏斗濾過(guò)，灌裝密封，滅菌消毒， 即得本發(fā)明5-50 %碳酸氫鈉的注射用或灌洗用重水溶液。
[0026] 實(shí)施例5
[0027] 配制以重水參入為基質(zhì)成份0. 1-99. 9%的乳劑、霜?jiǎng)?、油劑、脂質(zhì)體等制劑，加入 重水至任何乳劑、霜?jiǎng)?、油劑、脂質(zhì)體等制劑內(nèi)，達(dá)到0. 1-99. 9%濃度，灌裝密封，滅菌消毒。
[0028] 實(shí)施例6
[0029] 重水體外抑制人腫瘤細(xì)胞增殖的研究，MTT法：
[0030]方法：
[0031] 1.取培養(yǎng)3~4天處于指數(shù)生長(zhǎng)期的培養(yǎng)細(xì)胞一瓶，加人適量0. 25 % 1'巧?以114014液，使貼壁細(xì)胞脫落，用101111含10%胎牛血清的1?^11640培養(yǎng)液配成懸液。
[0032] 2.血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上作細(xì)胞計(jì)數(shù)，一般活細(xì)胞應(yīng)在97%以上。
[0033] 3.用完全培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞懸液，配成1X104個(gè)細(xì)胞/ml懸液。
[0034] 4.取12孔平板，每孔加細(xì)胞懸液300μ1。加細(xì)胞過(guò)程應(yīng)控制在4小時(shí)以內(nèi)。將 平板置37°C、5%C02溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)。
[0035] 5.重水如表1作稀釋，加入細(xì)胞培養(yǎng)板中。
[0036] 6.將12孔板在37°C，含5%C02空氣及100%濕度的溫箱中孵育3天。
[0037] 7.MTT用無(wú)血清RPMI1640培養(yǎng)液配成lmg/ml溶液，每孔加200μ1，37°C溫育4小 時(shí)，使MTT還原為甲臜。
[0038] 8.吸出上清液，加入200μ1DMS0使甲職溶解，用平板搖床搖勻。
[0039] 9.用酶標(biāo)儀在參考波長(zhǎng)450nm，檢測(cè)波長(zhǎng)570nm處檢測(cè)每個(gè)小孔的吸光度。結(jié)果 計(jì)算：以溶劑對(duì)照處理的腫瘤細(xì)胞為對(duì)照組，計(jì)算藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率。以藥物的不同 濃度及對(duì)細(xì)胞的抑制率作圖可得到劑量反應(yīng)曲線，從中求出藥物的半數(shù)抑制濃度（IC5。)。
[0040]
[0041] 結(jié)果：重水對(duì)肺癌細(xì)胞株A549、NCI-H460、NCI-1975;胰腺癌細(xì)胞株CFPAC-1、 ASPC-UPANC-1;結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT-116;胃癌細(xì)胞株BGC-823均有一定的抑制生長(zhǎng)作用，重 水濃度越高，對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用越明顯（表1)。
[0042] 表1.重水體外抑制人腫瘤細(xì)胞增殖
[0043]
[0044] 根據(jù)上面抑制率（％ )，計(jì)算出重水濃度-細(xì)胞存活率曲線，詳見圖1。
[0045] 實(shí)施例7
[0046] 生理鹽重水聯(lián)合5-氟尿嘧啶（5-FU)對(duì)人結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞株增殖實(shí)驗(yàn)：
[0047] 取10%生理鹽重水，稀釋5-氟尿嘧啶，加入細(xì)胞培養(yǎng)板中，體外抑制腫瘤細(xì)胞增 殖，MTT法，實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)施例7。
[0048] 結(jié)果：5_Fu對(duì)人結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞有一定的抑制生長(zhǎng)作用，與10%生理鹽重水 聯(lián)用，可明顯增加5-Fu抗腫瘤作用。
[0049] 也計(jì)算出不同5-Fu濃度與10%重水聯(lián)用-細(xì)胞存活率曲線，詳見圖2。
[0050] 表2.生理鹽重水聯(lián)合5-FU對(duì)人結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞增殖
[0051]
[0052] 實(shí)施例8
[0053] 生理鹽重水聯(lián)合5-氟尿嘧啶（5-FU)對(duì)人結(jié)腸癌裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)抑制作用：
[0054] 方法
[0055] 1.取瘤種復(fù)蘇并接種取瘤種復(fù)蘇加無(wú)菌生理鹽水制成細(xì)胞懸液，接種于動(dòng)物右 上肢腋窩皮下。接種腫瘤細(xì)胞數(shù)約為5X106/只。
[0056] 2.分組給藥接種后第6天分組給藥并按下式測(cè)量腫瘤體積，每3天1次。實(shí)驗(yàn) 共設(shè)4組：①生理鹽水對(duì)照組，②5-氟尿嘧啶（5-Fu)陽(yáng)性藥對(duì)照組：生理鹽水稀釋5-氟 尿嘧啶（5-FU)，尾靜脈注射給藥每3天1次；③生理鹽重水9. 6ml/kg組，尾靜脈注射，每天 1次；④生理鹽重水9. 6ml/kg稀釋5-氟尿啼陡（5-FU)，尾靜脈注射給藥每3天1次，連續(xù) 11天。
[0057] 相對(duì)瘤體積（mm3) =l/2a2b(a為寬，b為長(zhǎng)）
[0058]
[0059] 停藥后24小時(shí)處死動(dòng)物，剝瘤稱重，并用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法處理數(shù)據(jù)。進(jìn)行療效評(píng)價(jià)。
[0060] 結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，給藥21天后，生理鹽重水（9. 6ml/k