一種腦缺血再灌注損傷動(dòng)物模型的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及動(dòng)物模型技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種腦缺血再灌注損傷動(dòng)物模型的制作方法。
【背景技術(shù)】
[0002]動(dòng)物疾病模型主要用于實(shí)驗(yàn)生理學(xué)、實(shí)驗(yàn)病理學(xué)和實(shí)驗(yàn)治療學(xué)(包括新藥篩選)研究。人類疾病的發(fā)展十分復(fù)雜，以人本身作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象來(lái)深入探討疾病發(fā)生機(jī)制，推動(dòng)醫(yī)藥學(xué)的發(fā)展來(lái)之緩慢，臨床積累的經(jīng)驗(yàn)不僅在時(shí)間和空間上都存在局限性，而且許多實(shí)驗(yàn)在道義上和方法上也受到限制。而借助于動(dòng)物模型的間接研究，可以有意識(shí)地改變那些在自然條件下不可能或不易排除的因素，以便更準(zhǔn)確地觀察模型的實(shí)驗(yàn)結(jié)果并與人類疾病進(jìn)行比較研究，有助于更方便、更有效地認(rèn)識(shí)人類疾病的發(fā)生發(fā)展規(guī)律，研究防治措施。在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究中，建立腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ?，已成為研究腦血管疾病損傷機(jī)理及藥物開(kāi)發(fā)的關(guān)鍵。但是現(xiàn)有的腦缺血和再灌注動(dòng)物模型制作復(fù)雜、成功率低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種操作也極為簡(jiǎn)便、成功率高的腦缺血再灌注損傷動(dòng)物模型的制作方法，以解決上述【背景技術(shù)】中提出的問(wèn)題。
[0004]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案:
[0005]—種腦缺血再灌注損傷動(dòng)物模型的制作方法，包括以下步驟:
[0006]1)麻醉:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在手術(shù)前禁食12小時(shí)，自由飲水，用戊巴比妥鈉將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行頸部麻醉，每千克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物服用戊巴比妥鈉45_50mg ;
[0007]2)腦缺血:切開(kāi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的頸部?jī)蓚?cè)皮膚，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈和迷走神經(jīng)，切斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈或者在雙側(cè)頸總動(dòng)脈中植入球囊導(dǎo)管，并在植入球囊導(dǎo)管中充氣至球囊導(dǎo)管堵塞大腦中雙側(cè)頸總動(dòng)脈的起始部，使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的大腦中動(dòng)脈供血區(qū)缺血持續(xù)2.5_3h，制得腦缺血損傷動(dòng)物；
[0008]3)腦缺血后再灌注:切斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈2h后用軟管連接雙側(cè)頸總動(dòng)脈并縫合，并向軟管內(nèi)注入血液；或者將球囊導(dǎo)管中的氣體放出，將其頸部麻醉后，抽出球囊導(dǎo)管，使缺血區(qū)再次灌注血液；
[0009]4)評(píng)分:根據(jù)需要在不同時(shí)間內(nèi)進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分，并用錄像機(jī)記錄。
[0010]作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用老鼠或兔子。
[0011]作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案:步驟3)中，血液為手術(shù)前20-25天從該實(shí)驗(yàn)動(dòng)物上抽取的血液。
[0012]作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案:步驟3)中，注入的血液的流速為50-60mm/s。
[0013]作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物植入球囊導(dǎo)管的過(guò)程是:鈍性分離實(shí)驗(yàn)體頸總動(dòng)脈，結(jié)扎頸總動(dòng)脈，在結(jié)扎點(diǎn)下方出剪開(kāi)2-3_的小口，球囊導(dǎo)管插入到小口內(nèi)。
[0014]作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案:神經(jīng)功能缺損評(píng)分的標(biāo)準(zhǔn)包括自主活動(dòng)的程度、左前肢偏癱、提尾時(shí)左前肢伸不直、抗側(cè)推能力、向左傾斜度、向左環(huán)行度與對(duì)觸須的反應(yīng)。
[0015]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是:
[0016]本發(fā)明中采用球囊導(dǎo)管置入大腦動(dòng)脈，對(duì)其造成的損傷小，再灌注的操作也極為簡(jiǎn)便，可以控制腦缺血時(shí)間，為腦缺血和再灌注提供合理模型。而采用切斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈后再用軟管連接縫合，能夠保證腦缺血情況的快速進(jìn)行，且手術(shù)極為簡(jiǎn)單，成功率高，經(jīng)試驗(yàn):術(shù)后10小時(shí)內(nèi)試驗(yàn)動(dòng)物不會(huì)死亡。
【具體實(shí)施方式】
[0017]下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0018]實(shí)施例1
[0019]本發(fā)明實(shí)施例中，一種腦缺血再灌注損傷動(dòng)物模型的制作方法，包括以下步驟:
[0020]1)麻醉:老鼠在手術(shù)前禁食12小時(shí)，自由飲水，用戊巴比妥鈉將老鼠進(jìn)行頸部麻醉，每千克老鼠服用戊巴比妥鈉45mg ;試驗(yàn)中根據(jù)需要給予補(bǔ)充適量的戊巴比妥鈉。
[0021]2)腦缺血:將老鼠固定在腦立體定位儀上，切開(kāi)老鼠的頸部?jī)蓚?cè)皮膚，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈和迷走神經(jīng)，切斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈使老鼠的大腦中動(dòng)脈供血區(qū)缺血持續(xù)2.5h，制得腦缺血損傷動(dòng)物。
[0022]3)腦缺血后再灌注:切斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈2h后用軟管連接雙側(cè)頸總動(dòng)脈并縫合，并向軟管內(nèi)注入血液；血液為手術(shù)前20天從該老鼠上抽取的血液。注入的血液的流速為55mm/s。
[0023]4)評(píng)分:根據(jù)需要在不同時(shí)間內(nèi)進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分，并用錄像機(jī)記錄。神經(jīng)功能缺損評(píng)分的標(biāo)準(zhǔn)包括自主活動(dòng)的程度、左前肢偏癱、提尾時(shí)左前肢伸不直、抗側(cè)推能力、向左傾斜度、向左環(huán)行度與對(duì)觸須的反應(yīng)。
[0024]實(shí)施例2
[0025]本發(fā)明實(shí)施例中，一種腦缺血再灌注損傷動(dòng)物模型的制作方法，包括以下步驟:
[0026]1)麻醉:兔子在手術(shù)前禁食12小時(shí)，自由飲水，用戊巴比妥鈉將兔子進(jìn)行頸部麻醉，每千克兔子服用戊巴比妥鈉50mg ;試驗(yàn)中根據(jù)需要給予補(bǔ)充適量的戊巴比妥鈉。
[0027]2)腦缺血:將兔子固定在腦立體定位儀上，切開(kāi)兔子的頸部?jī)蓚?cè)皮膚，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈和迷走神經(jīng)，在雙側(cè)頸總動(dòng)脈中植入球囊導(dǎo)管。兔子植入球囊導(dǎo)管的過(guò)程是:鈍性分離實(shí)驗(yàn)體頸總動(dòng)脈，結(jié)扎頸總動(dòng)脈，在結(jié)扎點(diǎn)下方出剪開(kāi)2-3mm的小口，球囊導(dǎo)管插入到小口內(nèi)。在雙側(cè)頸總動(dòng)脈中植入球囊導(dǎo)管后，并在植入球囊導(dǎo)管中充氣至球囊導(dǎo)管堵塞大腦中雙側(cè)頸總動(dòng)脈的起始部，使兔子的大腦中動(dòng)脈供血區(qū)缺血持續(xù)3h，制得腦缺血損傷動(dòng)物。
[0028]3)腦缺血后再灌注:將球囊導(dǎo)管中的氣體放出，將其頸部麻醉后，抽出球囊導(dǎo)管，使缺血區(qū)再次灌注血液。
[0029]4)評(píng)分:根據(jù)需要在不同時(shí)間內(nèi)進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分，并用錄像機(jī)記錄。神經(jīng)功能缺損評(píng)分的標(biāo)準(zhǔn)包括自主活動(dòng)的程度、左前肢偏癱、提尾時(shí)左前肢伸不直、抗側(cè)推能力、向左傾斜度、向左環(huán)行度與對(duì)觸須的反應(yīng)。
[0030]對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實(shí)施例的細(xì)節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。因此，無(wú)論從哪一點(diǎn)來(lái)看，均應(yīng)將實(shí)施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說(shuō)明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。
[0031]此外，應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說(shuō)明書(shū)按照實(shí)施方式加以描述，但并非每個(gè)實(shí)施方式僅包含一個(gè)獨(dú)立的技術(shù)方案，說(shuō)明書(shū)的這種敘述方式僅僅是為清楚起見(jiàn)，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說(shuō)明書(shū)作為一個(gè)整體，各實(shí)施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實(shí)施方式。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種腦缺血再灌注損傷動(dòng)物模型的制作方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)麻醉:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在手術(shù)前禁食12小時(shí)，自由飲水，用戊巴比妥鈉將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行頸部麻醉，每千克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物服用戊巴比妥鈉45-50mg ; 2)腦缺血:切開(kāi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的頸部?jī)蓚?cè)皮膚，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈和迷走神經(jīng)，切斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈或者在雙側(cè)頸總動(dòng)脈中植入球囊導(dǎo)管，并在植入球囊導(dǎo)管中充氣至球囊導(dǎo)管堵塞大腦中雙側(cè)頸總動(dòng)脈的起始部，使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的大腦中動(dòng)脈供血區(qū)缺血持續(xù)2.5-3h，制得腦缺血損傷動(dòng)物； 3)腦缺血后再灌注:切斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈2h后用軟管連接雙側(cè)頸總動(dòng)脈并縫合，并向軟管內(nèi)注入血液；或者將球囊導(dǎo)管中的氣體放出，將其頸部麻醉后，抽出球囊導(dǎo)管，使缺血區(qū)再次灌注血液； 4)評(píng)分:根據(jù)需要在不同時(shí)間內(nèi)進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分，并用錄像機(jī)記錄。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腦缺血再灌注損傷動(dòng)物模型的制作方法，其特征在于，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用老鼠或兔子。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腦缺血再灌注損傷動(dòng)物模型的制作方法，其特征在于，步驟3)中，血液為手術(shù)前20-25天從該實(shí)驗(yàn)動(dòng)物上抽取的血液。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腦缺血再灌注損傷動(dòng)物模型的制作方法，其特征在于，步驟3)中，注入的血液的流速為50_60mm/s。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腦缺血再灌注損傷動(dòng)物模型的制作方法，其特征在于，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物植入球囊導(dǎo)管的過(guò)程是:鈍性分離實(shí)驗(yàn)體頸總動(dòng)脈，結(jié)扎頸總動(dòng)脈，在結(jié)扎點(diǎn)下方出剪開(kāi)2-3mm的小口，球囊導(dǎo)管插入到小口內(nèi)。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腦缺血再灌注損傷動(dòng)物模型的制作方法，其特征在于，神經(jīng)功能缺損評(píng)分的標(biāo)準(zhǔn)包括自主活動(dòng)的程度、左前肢偏癱、提尾時(shí)左前肢伸不直、抗側(cè)推能力、向左傾斜度、向左環(huán)行度與對(duì)觸須的反應(yīng)。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種腦缺血再灌注損傷動(dòng)物模型的制作方法，用戊巴比妥鈉將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行頸部麻醉，切開(kāi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的頸部?jī)蓚?cè)皮膚，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈和迷走神經(jīng)，切斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈或者在雙側(cè)頸總動(dòng)脈中植入球囊導(dǎo)管，并在植入球囊導(dǎo)管中充氣至球囊導(dǎo)管堵塞大腦中雙側(cè)頸總動(dòng)脈的起始部，缺血持續(xù)2.5-3h，制得腦缺血損傷動(dòng)物；切斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈2h后用軟管連接雙側(cè)頸總動(dòng)脈并縫合，并向軟管內(nèi)注入血液；或者將球囊導(dǎo)管中的氣體放出，使缺血區(qū)再次灌注血液；根據(jù)需要在不同時(shí)間內(nèi)進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分，并用錄像機(jī)記錄。本發(fā)明操作簡(jiǎn)便，成功率高，為腦缺血和再灌注提供合理模型。
【IPC分類】A61D7/00, A61D1/00
【公開(kāi)號(hào)】CN105326578
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510863185
【發(fā)明人】侯軟玲, 李穎虹, 王國(guó)紅, 魏林郁, 郭直岳, 趙紅崗, 李東亮
【申請(qǐng)人】新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【公開(kāi)日】2016年2月17日
【申請(qǐng)日】2015年11月25日