紫芝提取物對(duì)骨傷的治療作用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明公開了紫芝治療骨折的技術(shù)手段，以及紫芝治療骨折作用的最佳提取部位。
【背景技術(shù)】
[0002]根據(jù)我國第一部藥物專著《神農(nóng)本草經(jīng)》記載:靈芝有紫、赤、青、黃、白、黑六種，是祖國中醫(yī)藥寶庫中的珍品，素有〃仙草〃之譽(yù)，但現(xiàn)代文獻(xiàn)及所見標(biāo)本，多為多菌科植物紫芝或赤芝的全株。紫芝，也稱“中國靈芝”，為多孔菌科真菌紫芝(Ganoderma sinense Zhao,Xu et Zhang)的子實(shí)體，別名黑芝、玄芝、靈芝，味甘，性平。主要含麥角留醇、有機(jī)酸、氨基葡萄糖、多糖類、樹脂、甘露醇、多糖醇、脂肪酸，又含生物堿、內(nèi)酯、香豆精、水溶性蛋白質(zhì)和多種酶類。紫芝的應(yīng)用范圍非常廣泛，無論心、肺、肝、脾、腎臟虛弱，均可服用。紫芝所治病種涉及呼吸、循環(huán)、消化、神經(jīng)、內(nèi)分泌及免疫等各個(gè)系統(tǒng)；涵蓋內(nèi)、外、婦、兒、五官各科疾病。其根本原因，就在于紫芝扶正固本，增強(qiáng)免疫功能，提高機(jī)體抵抗力的巨大作用。它不同于一般藥物對(duì)某種疾病而起治療作用，亦不同于一般營養(yǎng)保健食品只對(duì)某一方面營養(yǎng)素的不足進(jìn)行補(bǔ)充和強(qiáng)化，而是在整體上雙向調(diào)節(jié)人體機(jī)能平衡，調(diào)動(dòng)機(jī)體內(nèi)部活力，調(diào)節(jié)人體新陳代謝機(jī)能，提高自身免疫能力，促使全部的內(nèi)臟或器官機(jī)能正?；弧渡褶r(nóng)本草經(jīng)》把紫芝列為上品，謂紫芝“主耳聾，利關(guān)節(jié)，保神益精，堅(jiān)筋骨，好顏色，久服輕身不老延年?！敝^赤芝“主胸中結(jié)，益心氣，補(bǔ)中增智慧不忘，久食輕身不老，延年成仙?！苯陙恚瑢?duì)紫芝的各種研究更為廣泛，藥理作用包括治慢性支氣管炎、支氣管哮喘、白細(xì)胞減少癥、冠心病、心律失常、神經(jīng)衰弱、糖尿病、抗過敏等，本實(shí)驗(yàn)通過記載利關(guān)節(jié)和堅(jiān)筋骨的藥理作用來研究紫芝治療骨傷的作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明公開了紫芝治療骨折作用的最佳提取部位。
1材料與儀器
1.1主要材料
紫芝，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:健康級(jí)Wistar大鼠120只，雌雄各半，體重180g?220g。將大鼠保持在清潔級(jí)別，環(huán)境溫度在20-22°C之間，并且相對(duì)濕度為60%的動(dòng)物飼養(yǎng)室內(nèi)適應(yīng)生長5天。使其可以自由獲得食物和水。
1.2主要試劑和藥品
石油醚、乙酸乙酯、95%乙醇；蒸餾水；氯化鈉注射液；醫(yī)用膠帶；75%酒精；羧甲基纖維素鈉；吐溫-80 ;鑷子；剪刀；解剖板；手術(shù)刀；止血鉗；注射器；苦味酸；灌胃器；傷科接骨片；戊巴比妥納；水合氣S全；慶大霉素；鵬伏；米血針；肝素納米血管；
1.3儀器與設(shè)備
高速萬能粉碎機(jī)；鼓風(fēng)干燥箱；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；數(shù)控超聲波清洗器；數(shù)顯恒溫水浴鍋；電子計(jì)數(shù)天平；網(wǎng)篩；索氏提取器；循環(huán)式真空泵；離心機(jī)；微量移液器；電冰箱；骨鉗；X線攝片機(jī)
2實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法
2.1藥物分組取干燥紫芝子實(shí)體5.9kg，經(jīng)高速萬能粉碎機(jī)粉碎，采用多種試劑，經(jīng)石油醚(60-90°C )、乙酸乙酯、乙醇和水四層提取物的梯度順序，依次對(duì)紫芝子實(shí)體進(jìn)行了回流提取，各提取物均提取3次，每次提取8h以上，過濾，合并提取液，通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀和真空泵進(jìn)行減壓濃縮，得到各個(gè)試劑的粗提物浸膏，烘干成固體，最后得到各提取物粉末，部分呈油狀固體，備用。取干燥紫芝子實(shí)體900g，將紫芝子實(shí)體進(jìn)行粉碎，先后以殘?jiān)c水1:10比例煮20min，1:5比例煮lOmin水浴加熱，過濾，得到水煎劑浸膏，得率為6%，烘干成固體粉碎得到粉末，備用。對(duì)各給藥組分別分組為石油醚提取物組、乙酸乙酯提取物組、乙醇提取物組、水提取物組、水煎組、陽性藥物組(傷科接骨片)、模型對(duì)照組、空白對(duì)照組共8組。
2.2大鼠分組及給藥SPF級(jí)Wistar大鼠144只飼養(yǎng)于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，將實(shí)驗(yàn)大鼠按性另IJ、體重隨機(jī)分組，實(shí)驗(yàn)期間大鼠自由攝食基礎(chǔ)飼料和飲水，并分籠飼養(yǎng)，每籠9只大鼠，雌雄各半，共16籠，分別對(duì)每只大鼠進(jìn)行標(biāo)記(1-9號(hào))，共分為8組，每18只實(shí)驗(yàn)大鼠為一組，適應(yīng)性生長7d。每天以灌胃的形式給予各組動(dòng)物相應(yīng)的受試藥物，各實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物按體重給藥，每天劑量為150-300mg/kg，每個(gè)劑量組按照2ml/100g體重灌胃給藥，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組給予等體積的生理鹽水劑量為150-300mg/kg。每天一次,連續(xù)灌胃給藥30天。
2.3大鼠造模選取石油醚提取物組、乙酸乙酯提取物組、乙醇提取物組、水提取物組、水煎組、陽性藥物組、模型對(duì)照組7組大鼠進(jìn)行造模。腹腔注射0.3%戊巴比妥鈉溶液10ml/kg, 10%水合氯醛3ml/kg使大鼠全身麻醉,當(dāng)大鼠完全被麻醉后，將大鼠放置在無菌手術(shù)臺(tái)上固定。在無菌環(huán)境操作下，左前肢剪毛，并用醫(yī)用酒精消毒，用手術(shù)刀切開皮膚，分離皮下組織，用骨鉗對(duì)大鼠橈骨造成骨折，空白對(duì)照組不造成骨折，骨折造模手術(shù)完成后，用生理鹽水清理傷口，并逐層關(guān)閉切口，最后手術(shù)縫合線縫合皮膚。即造模完畢，并觀察其動(dòng)態(tài)。術(shù)后連續(xù)3天內(nèi)，對(duì)骨折大鼠注射4萬單位的慶大霉素進(jìn)行消炎殺菌，并對(duì)骨骼大鼠的傷口處用碘伏進(jìn)行消毒，定期更換墊料，保證骨折大鼠的生存環(huán)境干凈清潔，避免其傷口感染。
2.4 X射線透視將大鼠送至內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院影像科進(jìn)行X射線透視，拍攝X射線片證明大鼠橈骨骨折模型建立成功。于造模后第一天即為灌胃第一天，144只大鼠連續(xù)給藥10天。于灌胃第11天，以每組雌雄各半各3只為實(shí)驗(yàn)觀察對(duì)象，共計(jì)48只，并將大鼠送至內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院影像科進(jìn)行X射線透視，將拍攝完X光片的實(shí)驗(yàn)大鼠從內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院運(yùn)回，將大鼠放置在無菌手術(shù)臺(tái)上固定，對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行腹主動(dòng)脈取血，取血清備用，后將死亡的大鼠的前肢取下，留下前肢的標(biāo)本，并將前置標(biāo)本用被生理鹽水浸濕的醫(yī)用紗布包裹好，并將每只大鼠進(jìn)行解剖，取出肝、脾、胸腺、腎臟，并將處理好的血清、內(nèi)臟、前肢標(biāo)本放到-80°C的冰箱中保存。剩余96只大鼠，連續(xù)給藥20天后，于灌胃第21天步驟同上，取出48只進(jìn)行X射線透視，并分別從這48只大鼠中取出血清、內(nèi)臟、前肢橈骨；同理，最后剩余48只大鼠，連續(xù)給藥30天，于灌胃第31天后，全部進(jìn)行X射線透視，并將處理好的血清、內(nèi)臟、前肢標(biāo)本放到-80 V的冰箱中保存。
2.5實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2.5.1動(dòng)物狀態(tài)
在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期過程中，有1只大鼠因生活狀態(tài)不佳，肺部異常遭剔除，1只大鼠因體重明顯減小，胃部異常遭剔除。其余受試動(dòng)物無明顯變化，傷口皮膚愈合良好，生長良好，飲食，活動(dòng)，精神狀態(tài)，皮毛膚色，動(dòng)物體重未收到嚴(yán)重影響，體重變化正常，在連續(xù)灌胃給藥過程中，沒有動(dòng)物死亡。
2.5.2影像學(xué)觀察
【附圖說明】
附圖為影像學(xué)檢查示意圖。
注:從左到右依次為①石油醚提取物組、②乙酸乙酯提取物組、③乙醇提取物組、④水提取物組、⑤水煎組、⑥陽性藥物組(傷科接骨片)、⑦模型對(duì)照組、⑧空白對(duì)照組。
2.5.3骨折效果分析
實(shí)驗(yàn)大鼠手術(shù)后經(jīng)過X光片的確認(rèn)，確定7組大鼠的橈骨骨折模型造模成功，X線射片可見除空白對(duì)照組以外，其余7組均可見橈骨中斷，骨折線清晰可見，骨髓腔受到破壞，骨膜下及周圍組織發(fā)生腫脹。骨折率為100%。<