一種抗癌組合物及其制劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及抗腫瘤藥物研究領(lǐng)域，特別涉及一種抗癌組合物及其制劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 腫瘤是機(jī)體在各種致瘤因素作用下，局部組織的細(xì)胞在基因水平上失去對(duì)其生長(zhǎng) 的正常調(diào)控導(dǎo)致異常增生與分化而形成的新生物。新生物一旦形成，不因病因消除而停止 生長(zhǎng)，他的生長(zhǎng)不受正常機(jī)體生理調(diào)節(jié)，而是破壞正常組織與器官，這一點(diǎn)在惡性腫瘤尤其 明顯。與良性腫瘤相比，惡性腫瘤生長(zhǎng)速度快，呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，易發(fā)生出血、壞死、潰瘍等，并 常有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，造成人體消瘦、無力、貧血、食欲不振、發(fā)熱以及嚴(yán)重的臟器功能受損等，最 終造成患者死亡。
[0003] 惡性腫瘤是嚴(yán)重威脅人們生命健康的第一病害，在繼切除手術(shù)、放療、化療之后， 腫瘤免疫細(xì)胞治療是臨床用于腫瘤治療的第四大療法，它是一種新興的、具有顯著療效的 腫瘤治療模式，是一種自身免疫抗癌的新型治療方法。它是運(yùn)用生物技術(shù)和生物制劑對(duì)從 病人體內(nèi)采集的免疫細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)和擴(kuò)增后回輸?shù)讲∪梭w內(nèi)的方法，來激發(fā)、增強(qiáng)機(jī) 體自身免疫功能，從而達(dá)到治療腫瘤的目的。
[0004] 細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（cytokine-induced killers，CIK)是一類抗腫瘤抗病 毒效應(yīng)細(xì)胞，能在體外被誘導(dǎo)并大量增殖。樹突狀細(xì)胞（dendritic cell，DC)是有效的專 職抗原提呈細(xì)胞，成熟的DC可以通過II型組織相容性抗原（MHC- II )等途徑提呈腫瘤抗 原，有效抵制腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸機(jī)制。CIK細(xì)胞和DC細(xì)胞是細(xì)胞免疫治療的兩個(gè)重要組 成部分，兩者聯(lián)合可確保高效的免疫反應(yīng)。
[0005] 隨著細(xì)胞制備技術(shù)的日趨完善，DC-CIK細(xì)胞過繼免疫治療在臨床逐漸開展，相關(guān) 報(bào)道可見。實(shí)驗(yàn)研究方面，Marten實(shí)驗(yàn)研究表明：DC和CIK功培養(yǎng)可以同時(shí)促進(jìn)CIK細(xì)胞 和DC細(xì)胞的增殖和免疫功能。張嵩等的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明：化療后應(yīng)用DC-CIK細(xì)胞可有 效抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，甚至使腫瘤完全消失；而且DC-CIK細(xì)胞的抗腫瘤效應(yīng)對(duì)集體免疫系 統(tǒng)功能不產(chǎn)生危害，在當(dāng)前對(duì)腫瘤特異性抗原了解相對(duì)較少的情況下，應(yīng)用DC-CIK細(xì)胞作 為腫瘤放化療和手術(shù)后的輔助治療有重要的臨床意義。目前，DC-CIK療法也常應(yīng)用于臨床 治療和科研，把擴(kuò)增到一定數(shù)量的DC細(xì)胞和CIK細(xì)胞共培養(yǎng)，然后回輸?shù)交颊唧w內(nèi)，聯(lián)合治 療腫瘤。
[0006] 雖然目前DC-CIK治療技術(shù)較為成熟，但DC-CIK細(xì)胞治療效果仍需有待提高，對(duì)于 治療腫瘤效果更好的制劑或治療方法仍有需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 有鑒于此，本發(fā)明提供了一種抗癌組合物及其制劑。該組合物將DC-CIK細(xì)胞與康 艾注射液聯(lián)合使用時(shí)可起到顯著的增效作用，可大大減少用藥量，節(jié)省治療成本。
[0008] 為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：
[0009] 本發(fā)明提供了一種藥物組合物，包括DC-CIK細(xì)胞和康艾注射液。
[0010] DC-CIK生物免疫療法是在體外將單個(gè)核細(xì)胞誘導(dǎo)分化為樹突狀細(xì)胞（DC)，再用 經(jīng)抗原刺激的樹突狀細(xì)胞（DC)誘導(dǎo)CIK細(xì)胞產(chǎn)生特異性腫瘤殺傷作用的治療技術(shù)，即將樹 突狀細(xì)胞（DC)與CIK細(xì)胞進(jìn)行共同培養(yǎng)而成的殺傷性細(xì)胞群體（DC-CIK)。
[0011] 康艾注射液，由黃芪、人參、苦參素制成。益氣扶正，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。用于原發(fā) 性肝癌、肺癌、直腸癌、惡性淋巴瘤、婦科惡性腫瘤；各種原因引起的白細(xì)胞低下及減少癥； 慢性乙型肝炎的治療。
[0012] 本發(fā)明發(fā)現(xiàn)將DC-CIK細(xì)胞與康艾注射液聯(lián)合使用時(shí)可起到顯著的增效作用，可 大大減少用藥量，節(jié)省治療成本。
[0013] 作為優(yōu)選，以cell/mL計(jì)，DC-CIK細(xì)胞與康艾注射液的用量比為（1~10) X 10s: (10 ~20) 〇
[0014] 優(yōu)選地，以cell/mL計(jì)，DC-CIK細(xì)胞與康艾注射液的用量比為4X 10s: (10~20)。
[0015] 在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，以cell/mL計(jì)，DC-CIK細(xì)胞與康艾注射液的用量 比為 4X10S:10。
[0016] 在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，以cell/mL計(jì)，DC-CIK細(xì)胞與康艾注射液的用 量比為4X10 S:15。
[0017] 在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，以cell/mL計(jì)，DC-CIK細(xì)胞與康艾注射液的用 量比為4X10 S:20。
[0018] 在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，DC-CIK細(xì)胞的制備方法包括如下步驟：
[0019] 步驟1 :將PBMC進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，獲得貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞；
[0020] 步驟2 :取懸浮細(xì)胞，加入INF- γ培養(yǎng)1天后，加入IL-2、IL-I α和0KT-3繼續(xù)培 養(yǎng)6~10天，獲得CIK細(xì)胞；
[0021] 取貼壁細(xì)胞，加入GM-CSF、IL-4培養(yǎng)6天，加入腫瘤抗原和TNF- α繼續(xù)培養(yǎng)1~ 5天，獲得DC細(xì)胞；
[0022] 步驟3 :將DC細(xì)胞和CIK細(xì)胞混合共培養(yǎng)，獲得DC-CIK細(xì)胞。
[0023] 作為優(yōu)選，INF- γ的終濃度為500~2000IU/mL，IL-2的終濃度為100~1000IU/ mL，IL-I α 的終濃度為 100 ~l〇〇〇IU/mL，0KT-3 的終濃度為 200 ~2000IU/mL，IL-4 的終 濃度為200~1000IU/mL，GM-CSF的終濃度為200~1000IU/mL，腫瘤抗原的用量為10~ 30 μ L/mL，TNF- α 的終濃度為 50 ~200ng/mL。
[0024] 在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，INF-γ的終濃度為500IU/mL，IL-2的終濃度為 100IU/mL，IL-I α的終濃度為l〇〇IU/mL，0KT-3的終濃度為200IU/mL，IL-4的終濃度為 200IU/mL，GM-CSF的終濃度為200IU/mL，腫瘤抗原的用量為10 μ L/mL，TNF- α的終濃度為 50ng/mL〇
[0025] 在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，INF-γ的終濃度為1000IU/mL，IL-2的終濃度為 300IU/mL，IL-I α的終濃度為200IU/mL，0KT-3的終濃度為500IU/mL，IL-4的終濃度為 500IU/mL，GM-CSF的終濃度為500IU/mL，腫瘤抗原的用量為20 μ L/mL，TNF- α的終濃度為 100ng/mL〇
[0026] 在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，INF-γ的終濃度為2000IU/mL，IL-2的終濃度為 1000IU/mL，IL-I α的終濃度為1000IU/mL，0KT-3的終濃度為2000IU/mL，IL-4的終濃度為 1000IU/mL，GM-CSF的終濃度為1000IU/mL，腫瘤抗原的用量為30 μ L/mL，TNF- α的終濃度 為 200ng/mL。
[0027] 作為優(yōu)選，共培養(yǎng)的時(shí)間為5~10天。
[0028] 本發(fā)明還提供了該組合物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。
[0029] 在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，癌為肺癌、乳腺癌、胃腸癌、肝癌或子宮癌。
[0030] 本發(fā)明還提供了一種DC-CIK細(xì)胞混合制劑，包括DC-CIK細(xì)胞、人血白蛋白、康艾 注射液和氯化鈉注射液。
[0031] 作為優(yōu)選，以cell/mL/mL/mL計(jì)，所述DC-CIK細(xì)胞、所述人血白蛋白、所述康艾注 射液與所述氯化鈉注射液的用量比為（1~10) X 10s: (10~20) : (10~20) : (65~75)。
[0032] 優(yōu)選地，以cell/mL/mL/mL計(jì)，所述DC-CIK細(xì)胞、所述人血白蛋白、所述康艾注射 液與所述氯化鈉注射液的用量比為4X 10s: 15 : (10~20) : (65~75)。
[0033] 在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，以cell/mL/mL/mL計(jì)，所述DC-CIK細(xì)胞、所述人血 白蛋白、所述康艾注射液與所述氯化鈉注射液的用量比為4X10 S:15 :10 :75。
[0034] 在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，以cell/mL/mL/mL計(jì)，所述DC-CIK細(xì)胞、所述人 血白蛋白、所述康艾注射液與所述氯化鈉注射液的用量比為4X10 S:15 :15 :70。
[0035] 在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，以cell/mL/mL/mL計(jì)，所述DC-CIK細(xì)胞、所述人 血白蛋白、所述康艾注射液與所述氯化鈉注射液的用量比為4X10 S:15 :20 :65。
[0036] 在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，DC-CIK細(xì)胞的制備方法包括如下步驟：
[0037] 步驟1 :將PBMC進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，獲得貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞；
[0038] 步驟2 :取懸浮細(xì)胞，加入INF- γ培養(yǎng)1天后，加入比-2、IL-I α和0KT-3繼續(xù)培 養(yǎng)6~10天，獲得CIK細(xì)胞；
[0039] 取貼壁細(xì)胞，加入GM-CSF、IL-4培養(yǎng)6天，加入腫瘤抗原和TNF- α繼續(xù)培養(yǎng)1~ 5天，獲得DC細(xì)胞；
[0040] 步驟3 :將DC細(xì)胞和CIK細(xì)胞混合共培養(yǎng)，獲得DC-CIK細(xì)胞。
[0041] 作為優(yōu)選，INF- γ的終濃度為500~2000IU/mL，IL-2的終濃度為100~1000IU/ mL，IL-I α 的終濃度為 100 ~l〇〇〇IU/mL，0KT-3 的終濃度為 200 ~2000IU/mL，IL-4 的終 濃度為200~1000IU/mL，GM-CSF的終濃度為200~1000IU/mL，腫瘤抗原的用量為10~ 30 μ L/mL，TNF- α 的終濃度為 50 ~200ng/mL。
[0042] 在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，INF-γ的終濃度為1000IU/mL，IL-2的終濃度為 300IU/mL，IL-I α的終濃度為200IU/mL，0KT-3的終濃度為500IU/