置于70-90 %乙醇中浸泡1-2小時(shí)，在水浴鍋 內(nèi)加熱到60°C-70°C，浸提化，每IOmin攬拌一次，用紗布過(guò)濾，殘?jiān)屑尤?0-60%乙醇， 60°C-70°C繼續(xù)浸提化，每IOmin攬拌一次，紗布過(guò)濾，合并浸提液，濃縮成糊狀濾液，
[0078] 將上述兩種提取液合并置入雙效真空濃縮器中，濃縮至90°C時(shí)相對(duì)密度為1. 25 的濃縮液，置0~5°C低溫冷藏24小時(shí)；將冷藏液加0. 3%的助濾劑娃藻±，過(guò)濾，濾液再置 入雙效真空濃縮器中，濃縮至每Iml含0.Ig生藥量，然后加糊精，紫外線殺菌后裝瓶。
[0079] 具體實(shí)施例3 :
[0080] 6-8月中旬夏枯草果穗呈棟紅色時(shí)采收，除去雜質(zhì)，曬干，生用，大概4500g。用粉 碎機(jī)粉碎過(guò)80-100目篩；將過(guò)篩的顆粒物浸泡水中12小時(shí)，然后放入提取罐加熱煮沸1小 時(shí)，過(guò)濾，濾液備用；濾渣加水，第二次加熱，煮沸45分鐘，過(guò)濾，濾液備用；濾渣再加水，第 =次加熱煮沸半小時(shí)，過(guò)濾，加熱濃縮至膏狀，靜置備用。將膏狀提取物置于70-90 %乙醇 中浸泡1-2小時(shí)，在水浴鍋內(nèi)加熱到60°C-70°C，浸提化，每IOmin攬拌一次，用紗布過(guò)濾， 殘?jiān)屑尤?0-60%乙醇，60°C-70°C繼續(xù)浸提化，每IOmin攬拌一次，紗布過(guò)濾，合并浸提 液，濃縮成糊狀濾液，待用。
[0081] 再取其他原料再將其余原料玉米須llOOg，紫背天葵1200g，桑寄生llOOg，決明子 1200g，絞股藍(lán)llOOg，桑葉1200g，馬齒寬llOOg，昆布1200g，制首烏llOOg，虎杖llOOg，山 植1100邑，黃琴1100邑，半枝蓮1100邑，澤瀉1100邑，茵陳1100邑，檐子1200邑，紫花地下1100邑， 取其他原料洗凈去雜，泡入5-10倍量的乙醇中，將藥粉置有蓋不誘鋼桶內(nèi)，加70 %乙醇液， 質(zhì)量為粗粉的0. 8-1倍，攬拌均勻，濕潤(rùn)密閉放置1小時(shí)W上，使充分膨脹；將滲漉筒底部 濾板用紗布袋包裹鋪平后再將濕潤(rùn)膨脹后的藥物樣品拌松弄散，然后用不誘鋼勺盛粉，均 勻的裝入滲漉筒，裝10-12厘米厚，用T型棒壓勻，再按上述操作，一層一層的裝入，適當(dāng)加 壓，藥粉填裝不得超過(guò)滲漉筒的2/3高處；藥粉面上蓋不誘鋼孔板壓牢，打開(kāi)滲漉筒下面的 放料閥，并放一容器，然后緩緩加入70%乙醇液；待排出藥粉粉粒之間的空氣，并有乙醇流 出約20L左右，關(guān)閉放料閥，蓋上漉筒、浸潰24小時(shí)，然后開(kāi)放料閥進(jìn)行滲漉，控制滲漉速度 一般為1000 g藥材每分鐘流出2~3ml，濾液放入膽液缸內(nèi)，并將排空時(shí)的乙醇液倒入膽液 缸；將滲濾液合并靜置。
[0082] 將上述步驟得到的兩種置入雙效真空濃縮器中，濃縮至90°C時(shí)相對(duì)密度為1. 05 的濃縮液，置0~5°C低溫冷藏24小時(shí)；將冷藏液加0. 3%的助濾劑娃藻±，過(guò)濾，濾液再置 入雙效真空濃縮器中，濃縮至每Iml含0.Ig生藥量；然后加糊精，紫外線殺菌后裝瓶。
[0083] 藥理學(xué)毒性試驗(yàn)
[0084] 實(shí)驗(yàn)例1:本發(fā)明急性毒性試驗(yàn)
[00化]一、試驗(yàn)材料：動(dòng)物：昆明種小鼠，體重18-25g，雌雄各半，山東大學(xué)生物試驗(yàn)室育 種。藥物：本發(fā)明（所有原材料混合煎煮2次，合并過(guò)濾，取藥液）含0. 0365mg/ml。
[0086]二、方法：
[0087] 1、LD50計(jì)算：采用改良寇氏法，將小鼠隨機(jī)分成5組，每組10只，雌雄各半，將本 發(fā)明加蒸饋水溶解，配成最大濃度，按小鼠最大允許容量給藥，所給劑量按生藥量依次為 18,14. 4,11. 5,9. 2, 7. 4 (g.kg-1)，在動(dòng)物禁食（不禁水）18小時(shí)后，一日內(nèi)分兩次給藥（間 隔半小時(shí)），每次0. 5ml，觀察動(dòng)物死亡情況。
[0088] 2、最大耐受劑量測(cè)定（M1D值）：取小鼠20只，雌雄各10只。將本發(fā)明加蒸饋水 溶解，配成最高濃度，按動(dòng)物的最大耐受量，W注射灌喂器能抽動(dòng)為準(zhǔn)。在動(dòng)物禁食（不禁 水）18小時(shí)后，一日內(nèi)分兩次給藥（間隔半小時(shí)），每次0. 5ml(每ml含生藥0. 36g)，總藥 量為18g生藥Ag.d，相當(dāng)臨床成人50Kg體重用量的300倍。給藥后連續(xù)觀察7天。
[0089] S、試驗(yàn)結(jié)果：
[0090] 在LD50計(jì)算中當(dāng)用最大允許濃度和最大允許容量給予小鼠時(shí)（18g/Kg.d)，未見(jiàn) 小鼠死亡，即未測(cè)出LD50,只可求最大耐受劑量，在7天觀察期中，動(dòng)物其食欲、活動(dòng)、毛色、 精神狀態(tài)等皆正常，發(fā)育正常，未見(jiàn)有死亡。即選用相當(dāng)于臨床劑量的300倍藥量，并無(wú)不 良反應(yīng)發(fā)生，表明急性毒性極小，MTD> 18g/Kg.d。
[0091] 實(shí)驗(yàn)例2 :急性毒性及長(zhǎng)期毒性的試驗(yàn)結(jié)果 陽(yáng)092] 急性毒性試驗(yàn)：通過(guò)小白鼠一次性灌胃給予本發(fā)明，最高濃度35%，最大灌胃容 量0. 4ml/10g，劑量14g/kg(每g藥粉相當(dāng)于IOg生藥），連續(xù)觀察7天，未發(fā)現(xiàn)任何毒性反 應(yīng)，因濃度和劑量無(wú)法增加，故未能測(cè)出該藥的LD50。最大耐受量測(cè)定：W最高濃度，最大 灌胃容量，小白鼠灌胃給藥3次，間隔5小時(shí)，然后連續(xù)觀察7天，無(wú)一例死亡。藥粉劑量為 >42g/kg.日（每g藥粉相當(dāng)于IOg生藥），按公斤體重計(jì)算相當(dāng)于成人臨床日用量的420 倍。
[0093] 長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)：為觀察長(zhǎng)期用藥是否產(chǎn)生毒性反應(yīng)，分別給予大鼠本發(fā)明飼服，按 成人臨床日用量的70倍和35倍（即7g/kg/日和3. 5g/kg/日），連續(xù)給喂8周，未見(jiàn)大鼠 的行為、進(jìn)食、體重出現(xiàn)異常，與對(duì)照組比，血常規(guī)，肝腎功能，各種重要臟器均無(wú)異常改變， 在所用藥劑量范圍內(nèi)，未曾發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的任何毒副反應(yīng)。通過(guò)動(dòng)物的急慢性毒性試驗(yàn)證實(shí)， 本發(fā)明安全范圍較大，是一種安全可靠的保健品。
[0094] 藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)：
[0095] 高血壓是導(dǎo)致屯、腦血管疾病重要的危險(xiǎn)因素，是全球人類最常見(jiàn)的慢性病，積 極防治高血壓是廣受關(guān)注的重要課題。高血壓的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，迄今尚未完全闡明。近 年來(lái)，一種細(xì)胞膜上的非選擇性陽(yáng)離子通道，瞬時(shí)受體電位通道C亞家族（transient recepto;rpotentialcanonical,TRPC)與高血壓的相互關(guān)系正成為研究的熱點(diǎn)。TRPC通道 組織分布廣泛，受多種因素調(diào)節(jié)，廣泛參與屯、血管病理生理過(guò)程。研究發(fā)現(xiàn)，瞬時(shí)受體電位 通道C亞族3亞型燈RPC3)和6亞型燈RPC6)與原發(fā)性高血壓關(guān)系密切，作用機(jī)制與高血壓 傳統(tǒng)發(fā)病機(jī)制存在區(qū)別。然而，目前有關(guān)降壓藥物對(duì)TRPC通道影響的研究才剛剛開(kāi)始。本 研究旨在了解自發(fā)性高血壓大鼠（spontaneouslyhype;rtensiverats,SHR)主動(dòng)脈TRPC3 和TRPC6的表達(dá)，用本發(fā)明、鄉(xiāng)沙坦和氨氯地平治療S皿大鼠后，觀察藥物對(duì)TRPC3和TRPC6 表達(dá)變化的影響，初步探討TRPC3和TRPC6調(diào)控血壓的可能機(jī)制，為臨床防治高血壓尋找更 好的治療祀點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[0096] 1材料與方法
[0097] 1. 1 材料
[0098] 1. 1. 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0099] 健康甜R和WKY大鼠，12周，雄性，體重240-280g，購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院中國(guó)協(xié)和 醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所，許可證編號(hào)SCXK(京）2009-0004,在山東醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中 屯、飼養(yǎng)。 陽(yáng)100] 1. 1. 2主要試劑及其配制 陽(yáng)1〇1] (1)主要試劑
[0102] 雷米普利（瑞泰）賽諾菲-安萬(wàn)特制藥有限公司鄉(xiāng)沙坦（代文）諾華制藥有限 公司苯橫酸氨氯地平（絡(luò)活喜）輝瑞制藥有限公司TRPC3、TRPC6兔抗多克隆抗體美國(guó) Qiemicon公司Trizol Reagent美國(guó)Invitrogen反轉(zhuǎn)錄試劑盒ReverTra Ace-a-日本 TOYOBO膜蛋白提取試劑盒貝博生物有限公司GAPDH兔抗單克隆抗體北京博奧森生物技術(shù) 有限公司辣根酶標(biāo)記羊抗兔IgG北京博奧森生物技術(shù)有限公司BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒北 京博奧森生物技術(shù)有限公司SDS-PAGE凝膠制備試劑盒北京博奧森生物技術(shù)有限公司 陽(yáng)1〇3] (2)主要試劑的配制 陽(yáng)104] 4%多聚甲醒：多聚甲醒40g，用0.IMPBS緩沖液定容至IL?蛋白電泳緩沖液： Tris6.Og,甘氨酸28. 8g，SDSl.Og,用去離子水定容至IL?轉(zhuǎn)膜緩沖液：Tris2. 375g，甘氨 酸 11. 25g，SDSO. 375g，甲醇 200ml，去離子水定容至IL.TBS緩沖液：化Cl8.Og，KCl0. 2g， Tris3.Og，雙蒸水定容至IL?TBST緩沖液：TBS緩沖液700ml,20%吐溫-201. 65ml?封閉 液：脫脂奶粉 5g，TBST(0.Ol% )100mL。 陽(yáng)105] 1. 1. 3主要儀器與設(shè)備
[0106] 大鼠尾動(dòng)脈無(wú)創(chuàng)血壓計(jì)RBP-I型，淮北正華生物儀器有限公司高速冷凍離屯、 機(jī)Al1egra64R型，美國(guó)Beckman倒置顯微鏡日本OLYMPUS凝膠/發(fā)光圖像分析系統(tǒng) ChemiDOC-X-RS型，美國(guó)Bio-Rad超純水儀化IXlO型，美國(guó)Minipore梯度PCR儀SlOOO雙 槽，美國(guó)Bio-Rad全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀MSS型，芬蘭雷勃超低溫冰箱MDF-382HT型，日本Sanyo微 型離屯、機(jī)Microl7型，美國(guó)Thermo,電子分析天平AUW120D型，日本島津，S用電熱恒溫水 箱KW-1000DA型，江蘇金壇市金為實(shí)驗(yàn)儀器廠。高壓滅菌器LAC-5060S型，韓國(guó)萊博提弛恒 溫?fù)u床420型，美國(guó)化ermo電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱畑G-9140A型，上海齊欣科學(xué)儀器有限公 司。電泳儀DYY-IOC型，北京市六一儀器廠垂直電泳槽。美國(guó)Bio-Rad臺(tái)式冷凍恒溫?fù)u床 SHA-2型，江蘇金壇市金為實(shí)驗(yàn)儀器廠。722紫外光分光光度計(jì)UV-265型，日本島津
[0107] 1.2實(shí)驗(yàn)方法
[0108] 1.2. 1動(dòng)物分組及給藥
[0109] 24只12周