一種生物光敏劑的制作方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于光敏試劑制備技術領域，具體涉及一種生物光敏劑。
【背景技術】
[0002]在目前生物光敏劑制備領域中當前存在的問題主要包括負載的光敏劑與納米顆粒之間的能量轉換效率低，因此生物光敏劑的單線態(tài)氧的產(chǎn)率低。重要的原因是與納米顆粒負載的光敏劑本身的特性有關，一般的光敏劑吸收光子之后，與氧分子之間的能量交換率低，產(chǎn)生的單線態(tài)氧量少。一般的生物光敏劑對作用對象都沒有特定的靶向。無靶向的生物光敏劑，由于對癌細胞沒有特異性識別的功能，同樣也會攻擊正常組織細胞，這樣會極大的增加了光動力治療的副作用。同時，生物光敏劑只有進入到細胞內(nèi)部，對癌細胞的殺傷力才大，而癌細胞對沒有靶向納米顆粒的吸收率不高。從而導致光動力治療的效果不佳。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種生物光敏劑，即一種強穿透性和高靶向性的新型生物光敏劑，從而彌補現(xiàn)有技術的不足。
[0004]本發(fā)明的生物光敏劑，其制備過程如下:
[0005]1)在介孔二氧化娃包覆的上轉換納米顆粒(NaYF4:Yb/Er)的表面連接上氨基(-NH2)，獲得表面接有氨基(-nh2)的納米顆粒；
[0006]2)將酞菁二氯化鈦浸入到表面接有氨基(-NH2)的納米顆粒的介孔二氧化硅層中；獲得負載有酞菁二氯化鈦的納米顆粒；
[0007]3)將負載有光敏劑酞菁二氯化鈦的納米顆粒表面修飾透明質酸完成制備。
[0008]上述制備過程，其一種具體過程如下:
[0009]1)將介孔二氧化硅包覆的上轉換納米顆粒溶解在甲苯中，再加入APTMS制成混合溶液，混合溶液進行密封常溫旋轉；旋轉結束后離心收集納米顆粒，用甲苯清洗風干后獲得表面接有氨基的納米顆粒；
[0010]作為優(yōu)選，混合溶液中介孔二氧化娃包覆的上轉換納米顆粒的濃度為2-10mg/ml ；
[0011]作為優(yōu)選，混合溶液中甲苯和APTMS的體積比為40-60:1 ；
[0012]2)將酞菁二氯化鈦溶于吡啶溶液中，密封溶解后進行離心，取上清液；將表面接有氨基(_nh2)的納米顆粒浸入上清液中，密閉進行懸浮，然后離心收集納米顆粒，將顆粒清洗后存放于MES緩沖液中，獲得負載有酞菁二氯化鈦的納米顆粒；
[0013]其中顆粒清洗是用PBS溶液進行的；
[0014]3)將透明質酸活化后加入MES緩沖液中，并加入步驟2)制備的負載有酞菁二氯化鈦的納米顆粒，溶液密封超聲室溫旋轉進行酰胺化反應制成產(chǎn)品。
[0015]在MES緩沖液中NHS(N-羥基琥珀酰亞胺)和EDC(l-(3_ 二甲氨基丙基)_3_乙基碳二亞胺鹽酸鹽)對透明質酸的作用終濃度為l_3mg/ml。
[0016]本發(fā)明將酞菁二氯化鈦和透明質酸以合適的負載順序和高效的結合方式對納米顆粒進行修飾，修飾后的上轉換納米顆粒有高的單線態(tài)氧的產(chǎn)率，和對過量表達CD44蛋白的細胞的特異性識別的高靶向功能。
【附圖說明】
[0017]圖1:負載酞菁二氯化鈦的上轉換納米顆粒單線態(tài)氧的產(chǎn)率圖。
【具體實施方式】
[0018]下面結合實施例對本發(fā)明進行詳細的描述。
[0019]實施例1:生物光敏劑的制備
[0020]1)介孔二氧化娃包覆的上轉換納米顆粒(NaYF4:Yb/Er)表面連接氨基:
[0021]稱取15mg介孔二氧化娃包覆的上轉換納米顆粒(NaYF4:Yb/Er)，加到裝有3ml甲苯溶液的小瓶中，密封常溫300rpm旋轉6h (旋轉速度不宜太快，不超過600rpm)。再加入50ul APTMS (體積比甲苯:APTMS = 60:1)，溶液密封常溫旋轉24h。旋轉結束后，離心收集納米顆粒，相對離心力為3500g，時間6min。取甲苯溶液3ml，吹打溶液直到顆粒混勻，溶液呈懸池液，再離心收集納米顆粒，相對離心力為3500g，時間6min，再重復以上步驟，用3ml甲苯清洗一遍，然后放通風櫥風干。此時獲得表面接有氨基(-NH2)的納米顆粒。
[0022]2)納米顆粒的介孔二氧化硅層負載光敏劑酞菁二氯化鈦:
[0023]稱取0.5mg酞菁二氯化鈦溶于3ml的吡啶溶液中，密封超聲40min (超聲池中放冰袋，保證超聲過程水溫常溫)，之后溶液3000rpm離心lOmin，取上清液放于25ml小瓶中，沉淀放通風櫥風干后稱量質量叫。則上清液中酞菁二氯化鈦的濃度是[(0.5-1?)/3]mg/ml ο (酞菁二氯化鈦的稱量質量1?，溶于吡啶之后，只溶解一部分，此時離心收集不溶解的沉淀，風干后稱量m2.我們?nèi)∮蒙锨逡?，所以上清液中的酞菁二氯化鈦的質量為(m1-ng，濃度
上清液體積V))。將15mg表面接有氨基(_NH2)的納米顆粒浸入上清液中，密閉瓶口超聲40min (超聲水溫保持不變)后，室溫600rpm旋轉24h。離心收集納米顆粒，3000rpm離心lOmin。吸取2ml PBS溶液(0.1M PH7.5)吹打溶液直到顆粒混勻，溶液呈懸濁液，再離心收集納米顆粒，3000rpm離心lOmin。重復以上步驟，再次用2mlPBS溶液清洗納米顆粒。最后顆粒存放于2ml MES緩沖液中。獲得負載有光敏劑酞菁二氯化鈦的納米顆粒
[0024]3)介孔二氧化娃包覆的上轉換納米顆粒(NaYF4:Yb/Er)表面修飾透明質酸:
[0025]稱取15mg透明質酸(HA)放入2ml超純水中活化過夜，再加入2ml MES緩沖液(緩沖液中EDC (4mg/ml)和NHS (4mg/ml))，保證EDC和NHS對透明質酸的作用終濃度都為2mg/ml ο溶液常溫600rpm旋轉30min。取2ml含有15mg納米顆粒的MES緩沖液加入上面的溶液中，溶液密封超聲40min后，室溫旋轉300rpm，8h，充分進行酰胺化反應。反應完成后lOOOOrpm離心lOmin離心收集產(chǎn)品，取2ml超純水吹打溶液直到顆粒混勻，溶液呈懸濁液，離心收集納米顆粒，lOOOOrpm離心lOmin。重復以上步驟，再次用2ml超純水清洗納米顆粒。納米顆粒清洗2次后完成生物光敏劑的制備。將產(chǎn)品存放于2ml超純水中，密封4°C保存。
[0026]1)對本發(fā)明制備的新型生物光敏劑進行單線態(tài)氧產(chǎn)率的檢測。單線態(tài)氧產(chǎn)率是利用熒光物質ABDA對單線態(tài)氧敏感而使其自身的熒光強度降低來檢測的。負載不同光敏劑的納米顆粒單線態(tài)氧產(chǎn)率檢測結果顯示:負載部花青MC540的上轉換納米顆粒的單線態(tài)氧產(chǎn)率為20%;負載酞菁鋅(ZnPc)的上轉換納米顆粒的單線態(tài)氧產(chǎn)率為10%;負載酞菁二氯化鈦的上轉換納米顆粒的單線態(tài)氧產(chǎn)率為40.7%。本發(fā)明制備的負載酞菁二氯化鈦的上轉換納米顆粒單線態(tài)氧的產(chǎn)率與之前的相比有了大大的提高(圖1)。
[0027]2)利用傅立葉紅外光譜儀對制備的新型生物光敏劑進行檢測，從紅外光譜圖分析得；3313cm 1處的吸收峰來源于HA的0 - Η伸縮鍵，2931cm 1處的吸收峰來代表C - Η伸縮鍵，1637cm 1處的吸收峰代表-CH2shoulder peak,810andlll0,1637cm 1處的吸收峰代表S1-ο-Si伸縮鍵。綜合以上分析透明質酸分子(HA)已經(jīng)包覆到顆粒的表面。
[0028]實施例2:生物光敏劑的制備
[0029]1)介孔二氧化娃包覆的上轉換納米顆粒(NaYF4