山蠟梅葉片在制備抑制回盲腸腺癌細(xì)胞hct-8細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種山蠟梅葉片在制備抑制回盲腸腺癌細(xì)胞 HCT-8細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用及山蠟梅葉片的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 山蠟梅葉片標(biāo)準(zhǔn)號(hào)WS-11310(ZD-1310)-2002,記載于國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編內(nèi)科內(nèi) 科肺系(一)分冊(cè)。由山蠟梅葉1500g作為原料藥制成，具有辛涼解表，清熱解毒的功效。用 于風(fēng)熱感冒，發(fā)熱，惡寒，咽痛。
[0003] 現(xiàn)有技術(shù)中，尚未有山蠟梅葉片在在制備抑制人回盲腸腺癌細(xì)胞HCT-8細(xì)胞增殖 藥物中的應(yīng)用的報(bào)道，也未見(jiàn)有山蠟梅葉片提取制備方面采用超臨界萃取的報(bào)道，而水煎 煮、水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油的方法，工藝粗糙、落后，雜質(zhì)多，導(dǎo)致患者用量過(guò)大，不方便 服用，嚴(yán)重影響了本品在臨床上應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 發(fā)明目的：本發(fā)明的目的在于提供一種山蠟梅葉片在制備抑制回盲腸腺癌細(xì)胞 HCT-8細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
[0005] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種山蠟梅葉片的制備方法。
[0006] 本發(fā)明的目的是通過(guò)如下的方案實(shí)現(xiàn)的： 山蠟梅葉片在制備抑制回盲腸腺癌細(xì)胞HCT-8細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，所述山蠟梅 葉片由山錯(cuò)梅葉1500g作為原料藥制成，所述山錯(cuò)梅葉片的制備方法由下列步驟組成：取 山蠟梅葉，加入到〇)2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百 分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30-50°C，C(V流量l-3ml/g生藥·min，萃取時(shí)間 700-800min，得超臨界萃取物，將超臨界萃取物加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成 500片，每片重0· 35g。
[0007] 優(yōu)選的，上述的山蠟梅葉片在制備抑制回盲腸腺癌細(xì)胞HCT-8細(xì)胞增殖藥物中的 應(yīng)用，所述山蠟梅葉片的制備方法由下列步驟組成：取山蠟梅葉，加入到C02超臨界萃取器 中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%，萃取壓力25MPa，溫度40°C， 〇V流量2ml/g生藥·min，萃取時(shí)間750min，得超臨界萃取物，將超臨界萃取物加入淀粉， 70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成500片，每片重0. 35g。
[0008] 現(xiàn)有技術(shù)中，山蠟梅葉片口服，一次6~7片，一日3次。山蠟梅葉片服藥量大。采 用本發(fā)明方法制備成的山蠟梅葉片每片重〇. 35g，每次僅需3片，一日服用3次。在具有更 多活性成分的條件下大大減少了服用量。此結(jié)論可以通過(guò)下述試驗(yàn)證明。
[0009] 試驗(yàn)一、不同方法制備的山蠟梅葉片中槲皮素和山柰素含量的比較 1、儀器及試藥本發(fā)明山蠟梅葉片：按實(shí)施例1方法制備，使用1500g原料藥，經(jīng)提取制 成500片，每片重0. 35g。原山蠟梅葉片，按照WS-11310(ZD-1310)-2002標(biāo)準(zhǔn)方法制備。 Agilentl200高效液相色譜儀；METTLERAE240電子分析天平；槲皮素和山柰素對(duì)照品（中 國(guó)藥品生物制品檢定所)。
[0010] 2、方法 照高效液相色譜法（中國(guó)藥典2010年版一部附錄VID)測(cè)定。
[0011] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-0. 5% 磷酸溶液（45 : 55)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為365nm。理論板數(shù)分別按槲皮素、山柰素峰計(jì)算 均應(yīng)不低于1500。
[0012] 對(duì)照品溶液的制備精密稱取槲皮素、山柰素對(duì)照品適量，分別加甲醇制成每1ml 含6Pg、8Pg的溶液，即得。
[0013] 供試品溶液的制備取本發(fā)明山蠟梅葉片10片，精密稱定，研細(xì)，取0. 60g，精密 稱定，加甲醇加熱回流2次（50ml、50ml)，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，殘?jiān)蛹状歼m量洗 滌，濾過(guò)，洗液并入濾液中，蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至3~4,加醋 酸乙酯振搖提取5次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解，轉(zhuǎn)移至 l〇ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
[0014] 對(duì)照產(chǎn)品供試品溶液的制備取對(duì)照的山蠟梅葉片20片，精密稱定，研細(xì)，取 1. 2g，精密稱定，加甲醇加熱回流2次（50ml、50ml)，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，殘?jiān)?甲醇適量洗滌，濾過(guò)，洗液并入濾液中，蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至 3~4,加醋酸乙酯振搖提取5次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶 解，轉(zhuǎn)移至l〇ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勾，即得。
[0015] 測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液、對(duì)照產(chǎn)品供試品溶液各5μ1，注 入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
[0016] 3、結(jié)果 結(jié)果表明，本發(fā)明山蠟梅葉片中槲皮素和山柰素的含量為220-362Pg/片；而原山蠟 梅葉片中槲皮素和山柰素的含量為36Pg/粒，每次服用量3片的槲皮素和山柰素含量為原 片劑6粒含量的3-5倍，在服用量減少的情況下，槲皮素和山柰素含量有很大提高。
[0017] 上述研究表明，采用本發(fā)明制備方法制備的山蠟梅葉片，有效成分含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于 WS-11310 (ZD-1310) -2002標(biāo)準(zhǔn)記載的方法制備的山蠟梅葉片。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作更進(jìn)一步的說(shuō)明，以便本領(lǐng)域的技術(shù)人員更了解 本發(fā)明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述 內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
[0019] 實(shí)施例1 取山蠟梅葉1500g，加入到0)2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶 劑的體積百分比為5%，萃取壓力25MPa，溫度40°C，C(V流量2ml/g生藥·min，萃取時(shí)間 750min，得超臨界萃取物，將超臨界萃取物加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成500 片，每片重0· 35g。
[0020] 經(jīng)檢測(cè)，成品中槲皮素和山柰素的含量為362Pg/片。
[0021] 實(shí)施例2 取山蠟梅葉1500g，加入到0)2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶 劑的體積百分比為4%，萃取壓力15MPa，溫度30°C，C(V流量lml/g生藥·min，萃取時(shí)間 800min，得超臨界萃取物，將超臨界萃取物加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成500 片，每片重0· 35g。
[0022] 經(jīng)檢測(cè)，成品中槲皮素和山柰素的含量為22(^g/片。
[0023] 實(shí)施例3 取山蠟梅葉1500g，加入到0)2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶 劑的體積百分比為6%，萃取壓力30MPa，溫度60°C，C(V流量