一種具有降血糖作用的鐵皮石斛根提取物及其用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及鐵皮石斛新的藥用部位的開發(fā)，具體涉及一種具有降血糖作用的鐵皮 石斛根提取物及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 糖尿?。―iabetes Mellitus，DM)是由于體內(nèi)胰島素分泌絕對(duì)或相對(duì)不足（革巴組 織細(xì)胞對(duì)胰島素敏感性降低），進(jìn)而引起糖、蛋白質(zhì)、脂肪、水和電解質(zhì)等一系列的代謝紊 舌L以高血糖為主要共同標(biāo)志的一類全身性代謝疾病。隨著生活水平的提高、飲食結(jié)構(gòu)和生 活方式的改變，我國(guó)糖尿病的發(fā)病率正逐年升高。目前臨床上用于降血糖的主導(dǎo)藥物是西 藥，包括口服降血糖藥和胰島素制劑。西藥治療糖尿病療效肯定，但存在一定的消化道反應(yīng) 和肝、腎損害等副作用，且不能有效控制并發(fā)癥。而中藥治療糖尿病療效穩(wěn)定，作用溫和，不 良反應(yīng)少，具有綜合治療作用，能夠有效防治并發(fā)癥。因此，積極開發(fā)安全、有效的中藥降血 糖藥物，對(duì)糖尿病的防治具有重要意義。
[0003] 鐵皮石斛為蘭科植物鐵皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo的干燥 莖，是我國(guó)傳統(tǒng)的名貴中藥材。其味甘、性微寒，歸胃、腎經(jīng)，具有益胃生津、滋陰清熱的功 效，可用于陰傷津虧，口干煩渴等癥?，F(xiàn)代藥理研究表明，鐵皮石斛具有良好的降糖效果，并 發(fā)現(xiàn)多種降糖的活性成分，如多糖、黃酮和微量元素等。目前研究發(fā)現(xiàn)，非藥用的根也含有 和藥用（莖）相類似的化學(xué)成分，有部分類似的功能。但是，《中國(guó)藥典》記載鐵皮石斛以莖 入藥，在其生產(chǎn)領(lǐng)域，一般都認(rèn)為根為非藥用部位，從來(lái)不考慮對(duì)其加以藥物應(yīng)用，但其產(chǎn) 量很大，造成了資源的大量浪費(fèi)。
[0004] 目前，可查詢到的關(guān)于鐵皮石斛根的專利只有一篇，是一種具有降壓作用的鐵皮 石斛根提取物及用途（申請(qǐng)?zhí)?201310743001.0)，主要涉及水提取物在降血壓藥品食品制 備方面的應(yīng)用。本專利發(fā)明人以降低血糖、改善糖耐量為主要藥效指標(biāo)，觀察并比較了鐵 皮石斛根的水和乙醇提取物經(jīng)長(zhǎng)期給藥對(duì)糖尿病小鼠的影響，篩選出藥效明顯的乙醇提取 物，具有良好的開發(fā)前景，并為鐵皮石斛合理利用和綜合開發(fā)提供了新的途徑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種具有降血糖作用的鐵皮石斛根 提取物及其用途。
[0006] 本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：一種具有降血糖作用的鐵皮石斛 根提取物，所述鐵皮石斛根提取物通過以下方法制備得到：鐵皮石斛根洗凈、干燥后，機(jī)械 粉碎，每克鐵皮石斛根加入5~20毫升乙醇與水的混合溶液，在70~KKTC下提取1~3 次，每次1~3h，所述乙醇與水的混合溶液由乙醇和水按體積比60~85 : 15~40混合組 成，合并濾液，減壓濃縮得鐵皮石斛根提取物。
[0007] 該鐵皮石斛根提取物可用于制備預(yù)防和治療糖尿病的藥品或食品。該鐵皮石斛根 提取物可以與藥劑或食品上認(rèn)可的輔料，采用現(xiàn)代制劑技術(shù)，制成以鐵皮石斛根提取物為 主的浸膏，片劑、顆粒劑、丸劑、膠囊劑、散劑、口服液等各種劑型。
[0008] 本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明通過比較非藥用的鐵皮石斛根與藥用（莖）的化學(xué) 成分，猜測(cè)根部可能具有類似功能。因此本發(fā)明選用鐵皮石斛根作為依托，開發(fā)其功效，擴(kuò) 大鐵皮石斛新的藥用資源和實(shí)現(xiàn)資源的綜合利用。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明：該鐵皮石斛根提取 物能夠顯著降低糖尿病小鼠的空腹血糖（FGB)和糖化血紅蛋白（HbAlc)，有效改善口服糖 耐量（OGTT)，具有良好的降糖效果，可制成以鐵皮石斛根提取物為主的浸膏，片劑、顆粒劑、 丸劑、膠囊劑、散劑、口服液等以防治高血糖為主要功能的藥品及保健食品。
【具體實(shí)施方式】
[0009] 下面根據(jù)實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的效果將體現(xiàn)得更加明顯。
[0010] 實(shí)施例1
[0011] 鐵皮石斛根洗凈、干燥后，機(jī)械粉碎，依次加入20倍、15倍、15倍量的乙醇與水的 混合溶液，所述乙醇與水的混合溶液由乙醇和水按體積比85 : 15混合組成，90°C提取3 次，每次lh，合并濾液，減壓濃縮得鐵皮石斛根提取物。
[0012] 實(shí)施例2
[0013] 鐵皮石斛根洗凈、干燥后，機(jī)械粉碎，依次加入20倍、15倍、15倍量的乙醇與水的 混合溶液，所述乙醇與水的混合溶液由乙醇和水按體積比60 : 40混合組成，KKTC提取2 次，每次I. 5h，合并濾液，減壓濃縮得鐵皮石斛根提取物。
[0014] 實(shí)施例3
[0015] 鐵皮石斛根洗凈、干燥后，機(jī)械粉碎，分別加入10倍量的乙醇與水的混合溶液，所 述乙醇與水的混合溶液由乙醇和水按體積比70 : 30混合組成，85°C提取3次，每次lh，合 并濾液，減壓濃縮得鐵皮石斛根提取物。
[0016] 實(shí)施例4
[0017] 鐵皮石斛根提取物經(jīng)長(zhǎng)期給藥發(fā)現(xiàn)對(duì)高糖高脂飼料聯(lián)合鏈脲佐菌素（STZ)制備 的實(shí)驗(yàn)性糖尿病模型小鼠的空腹血糖（FGB)和糖化血紅蛋白（HbAlc)具有顯著的降低作 用，對(duì)口服糖耐量（OGTT)具有良好的調(diào)節(jié)作用。
[0018] 1實(shí)驗(yàn)材料與儀器
[0019] 1.1 動(dòng)物
[0020] 清潔級(jí)ICR小鼠，雄性，體質(zhì)量20±2g，由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生 產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK (浙）2008-0033。
[0021] 1.2藥物配置
[0022] I. 2. 1 受試藥
[0023] 鐵皮石斛根，由浙江旺旺野生植物開發(fā)公司提供，提取物配置成5. Og生藥/kg， 4 °C冰箱冷藏備用。
[0024] 1. 2. 2 陽(yáng)性藥
[0025] 格華止（鹽酸二甲雙胍片），規(guī)格0. 5g/片，購(gòu)自中美上海施貴寶制藥有限公司，批 號(hào)1307093,臨用前用蒸饋水配置成15mg/mL。
[0026] 1. 3主要試劑
[0027] 鏈脲佐菌素（STZ，美國(guó)sigma公司，批號(hào)20131211);葡萄糖、糖化血紅蛋白（GLU、 HbAlc，寧波美康生物科技股份有限公司，批號(hào)20140505、20140429)。
[0028] 1. 4主要儀器
[0029] BA-40FR(ACCUTE)全自動(dòng)生化分析儀（日本東芝）；Microcll7微量離心機(jī)（美國(guó) Thermo);雅培安妥超越血糖儀，安培超越血糖試紙（美國(guó)Abbott公司）；HX1001T電子天 平（慈溪市天冬衡器廠）；YF_40型微壓循環(huán)中藥煎藥機(jī)（北京東華原醫(yī)療設(shè)備有限公司）； R-501旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海申順生物科技有限公司）。
[0030] 2實(shí)驗(yàn)方法
[0031] 2.1分組與給藥
[0032] ICR小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)抽取10只作為正常組，其余為造模組。模型采用 高糖高脂飼料喂養(yǎng)后腹腔注射鏈脲佐菌素制備。給藥前，眼眶取血測(cè)定造模小鼠的血糖值， 篩選出血糖滿足要求的小鼠。然后將造模成功的小鼠按血糖和體重隨機(jī)分層法分組，即：模 型組、鹽酸二甲雙胍組和鐵皮石斛根85 %乙醇提取物組，每組10只。鹽酸二甲雙胍按0. 3g/ kg/d劑量給藥，鐵皮石斛根85 %乙醇提取物按10.0 g/kg/d劑量給藥，正常組和模型組給予 等量蒸餾水。灌胃容積為〇. lmL/lOg體重，2次/日，連續(xù)給藥10周。
[0033] 2. 2觀察指標(biāo)
[0034] 于給藥前，給藥第6、8、10周禁食（不禁水）8h眼眶取血，分離血清用葡萄糖氧化 酶法測(cè)定各組小鼠空腹血糖。給藥10周后，眼眶取血，加 m)TA抗凝，用酶比色法檢測(cè)小鼠 全血中的糖化血紅蛋白濃度。
[0035] 2. 3 口服糖耐量試驗(yàn)（OGTT)
[0036] 給藥8周后，各組小鼠先禁食（不禁水）6h，然后灌胃給藥，給藥后2h尾靜脈取血 并用血糖儀測(cè)定記為Oh的血糖值（GB。），然后各組經(jīng)口給予2. Og/kg的葡萄糖溶液。尾靜 脈取血測(cè)定給葡萄糖后lh、2h的血糖值（GB1和GB2)，并計(jì)算各組曲線下面積（AUC)。
[0037] AUC = (GBo+GBi) X 0. 5+ (GB^GB2) X 0. 5
[0038] 2. 4統(tǒng)計(jì)與分析
[0039] 數(shù)據(jù)用SPSS 13. 0軟件統(tǒng)計(jì)并分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)結(jié)果均采用Γ ± S表示，組間差 異做兩樣本均數(shù)比較的t檢驗(yàn)，以p < 0. 05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0040] 3實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0041] 3. 1給藥期間各組血糖變化情況
[0042] 與正常組相比，模型小鼠空腹血糖均明顯升高（P<0.01);與模型組比較，給藥6 周后，鐵皮石斛根85%乙醇提取物能明顯降低模型小鼠的空腹血糖（P<0. 05);且降糖效 果平穩(wěn)持續(xù)。結(jié)果見表1。
[0043] 表1連續(xù)給藥對(duì)模型小鼠 FGB的影響（T ±5·, mmol/L)
[0045] 注：與正常組比較，ΔΡ < 0· 05, ΔΔΡ < (λ 01 ;與模型組比較，*P < (λ 05，**P < (λ 01
[0046] 3. 2給藥8周各組口服糖耐量（OGTT)變化情況
[0047] 與正常組相比，模型組小鼠 OGTT中各時(shí)間點(diǎn)的血糖值及AUC均顯著升高（Ρ < 0. 01)，糖耐量異常；與模型組比較，給藥8周后，鐵皮石斛根85%乙醇提取物能顯著降低 模型小鼠各時(shí)間點(diǎn)的血糖值及AUC(Ρ < 0. 01，P < 0. 05)，能明顯改善模型小鼠的糖耐量。 結(jié)果見表2。
[0048] 表2連續(xù)給藥8周對(duì)模型小鼠 OGTT的影響（r ± s，mmol/L)
[0050] 注：與正常組比較，ΔΡ < 0· 05, ΔΔΡ < 0· 01 ;與模型組比較，*Ρ < 0· 05，**P < 0· 01
[0051] 3· 3給藥10周各組糖化血紅蛋白（HbAlc)變化情況
[0052] 與正常組相比，模型組小鼠 HbAlc顯著升高（Ρ<0. 01);與模型組比較，給藥10周 后，鐵皮石斛根85%乙醇提取物能顯著降低模型小鼠的HbAlc (Ρ < 0. 01)，穩(wěn)定血糖。結(jié)果 見表3。
[0053] 表3連續(xù)給藥10周對(duì)模型小鼠 HbAI c的影響（r ± 5 )
[0055] 注：與正常組比較，><0.05/泎<0.01;與模型組比較，卞<0.05，，<0.01。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有降血糖作用的鐵皮石斛根提取物，所述鐵皮石斛根提取物通過以下方法制 備得到：鐵皮石斛根洗凈、干燥后，機(jī)械粉碎，每克鐵皮石斛根加入5~20 _升乙醇與水的 混合溶液，在70~KKTC下提取1~3次，每次1~3h，所述乙醇與水的混合溶液由乙醇和 水按體積比60~85 : 15~40混合組成，合并濾液，減壓濃縮得鐵皮石斛根提取物。2. -種權(quán)利要求1所述鐵皮石斛根提取物在制備預(yù)防和治療糖尿病的藥品和食品中 的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及鐵皮石斛新的藥用部位的開發(fā)，公開了一種具有降血糖作用的鐵皮石斛根提取物及其用途。所述鐵皮石斛根提取物通過以下方法制備得到：鐵皮石斛根洗凈、干燥后，機(jī)械粉碎，每克鐵皮石斛根加入5～20毫升乙醇與水的混合溶液，在70～100℃下提取1～3次，每次1～3h，所述乙醇與水的混合溶液由乙醇和水按體積比60～85∶15～40混合組成，合并濾液，減壓濃縮得鐵皮石斛根提取物。通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，鐵皮石斛根提取物在降低血糖和改善糖耐量方面療效穩(wěn)定，可應(yīng)用于防治高血糖為主要功能的藥品及保健食品；本發(fā)明選用鐵皮石斛根作為依托，開發(fā)其功效，擴(kuò)大鐵皮石斛新的藥用資源和實(shí)現(xiàn)資源的綜合利用。
【IPC分類】A61P3/10, A61K125/00, A61K36/8984
【公開號(hào)】CN105434886
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410482159
【發(fā)明人】呂圭源, 陳素紅, 宓文佳, 李燕
【申請(qǐng)人】浙江中醫(yī)藥大學(xué)
【公開日】2016年3月30日
【申請(qǐng)日】2014年9月19日