草苔蟲總內(nèi)酯抗老年癡呆活性及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及草苔蟲總內(nèi)醋的抗老年癡呆活性及其在醫(yī)藥 領(lǐng)域中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 海洋苔薛動(dòng)物俗稱苔薛蟲、海席子、假珊瑚及苔蟲，屬真體腔動(dòng)物，是海洋底棲動(dòng) 物的重要組成之一。其種類很多，大約有4000多種，最常見的是總合草苔蟲?？偤喜萏οx Bugula neritina Linnaeus在世界水域分布廣泛，我國(guó)沿海從勸海到南海的西沙群島的多 鹽水域都有。該群體呈紅褐色或紫褐色，呈草叢狀，高40~150mm，每支有個(gè)蟲兩列，交互排 列。其群體常附著在海帶、石花菜、貝類W及船底、碼頭、航標(biāo)等水下設(shè)施上，影響海洋養(yǎng)殖 和國(guó)防、海洋交通，是海洋主要污損生物之一。直到1968年，美國(guó)亞利桑那州立大學(xué)化ttit 研究小組對(duì)海洋無脊椎動(dòng)物和脊椎動(dòng)物的廣泛研究中，首次發(fā)現(xiàn)了總合草苔蟲的抗癌活 性。經(jīng)過十多年的努力，1982年化ttit研究小組成功地從采集于加利福尼亞海域的總合草 苔蟲中分離得到第一個(gè)具有抗癌活性的單體bryostatin 1，并用X衍射法確定了它的結(jié)構(gòu)， 是大環(huán)內(nèi)醋類化合物。從此，該小組一直致力于總合草苔蟲中具有抗癌活性大環(huán)內(nèi)醋成分 的研究。目前為止，已從中得到20個(gè)活性單體，即b巧0S化tin 1~2(KLin冊(cè)，Yi YH，Li WL, Yao XS'Wu HM.Chinese J.Marine Drugs 1998,65,l;Pettit GR.Fortschritte der Chemie Organischer Naturstoffe, 1991,57,153) cBryostatin 1 和bryostatin 4經(jīng)美國(guó) 國(guó)立癌癥研究所(NCI)的生物鑒定，已投入臨床試驗(yàn)。此類化合物具有毒性低、活性強(qiáng)的特 點(diǎn)。它作用于蛋白激酶C(PKC)的新穎的作用機(jī)制，激發(fā)了研究者對(duì)其作用機(jī)制的廣泛深入 的研究。鑒于草苔蟲有限的天然資源和草苔蟲內(nèi)醋的微少含量，人們對(duì)其天然資源進(jìn)行的 廣泛的調(diào)查。
[0003] 老年癡呆癥(主要為阿爾茨海默病)是一種進(jìn)行性發(fā)展的致死性神經(jīng)退行性疾病， 臨床表現(xiàn)為認(rèn)知和記憶功能不斷惡化，日常生活能力進(jìn)行性減退，并有各種神經(jīng)精神癥狀 和行為障礙。運(yùn)種病在任何年齡都能出現(xiàn)，但是通常在60-70之間出現(xiàn)。當(dāng)被診斷出患有該 病時(shí)，大約還能存活3.3年?；疾÷恃芯匡@示，60歲人群的患病率為1 %，年齡每增加5歲，患 病率增加2倍。目前我國(guó)正加速進(jìn)入老齡化社會(huì)，據(jù)有關(guān)專家預(yù)測(cè)，到2020年我國(guó)60歲W上 人口將達(dá)到4億，老年癡呆癥病人將有1000萬人W上。最新報(bào)道，上海目前的老年癡呆癥患 者就已有12萬人。
[0004] 老年癡呆癥是一組病因未明的原發(fā)性退行性腦變性疾病，多起病于老年期，潛隱 起病，病程緩慢且不可逆，臨床上W智能損害為主。病理改變主要為皮質(zhì)彌漫性萎縮，溝回 增寬，腦室擴(kuò)大，神經(jīng)元大量減少，并可見老年斑(SP)，神經(jīng)原纖維結(jié)(NFT)等病變，膽堿乙 酷化酶及乙酷膽堿含量顯著減少。老年癡呆癥發(fā)病病因目前還不十分清楚，而且有多種亞 型，而發(fā)生病理變化的器官除大腦外還可能有其他器官。目前公認(rèn)的發(fā)病機(jī)制主要有兩種： 1.由于淀粉樣前蛋白的異常導(dǎo)致蛋白成分漏出細(xì)胞膜，導(dǎo)致神經(jīng)元纖維纏結(jié)和細(xì)胞死亡， 基因位于21號(hào)染色體。AD患者腦部乙酷膽堿明顯缺乏，乙酷膽堿醋酶和膽堿一酷轉(zhuǎn)移酶活 性降低，特別是海馬和顛葉皮質(zhì)部位。2.與載脂蛋白E(AP0-E4)的基因有關(guān)。
[0005] 由于老年癡呆癥目前確切病因尚未得到充分闡明，治療方法主要是通過藥物作用 于不同的神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)，增強(qiáng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的高級(jí)活動(dòng)，減輕疾病過程中出現(xiàn)的各種癥狀， 延緩癡呆的進(jìn)一步發(fā)展。臨床上常用的治療主要通過抑制乙酷膽堿醋酶來提高患者體內(nèi)乙 酷膽堿含量，改善老年癡呆癥的臨床癥狀。目前臨床使用的治療藥物多為乙酷膽堿醋酶抑 審IJ劑(如他克林、多奈贓齊、卡己拉汀、力爛他敏、石杉?jí)A甲），NMDA受體括抗劑(美金剛)和抗 氧化劑(司來吉蘭、維生素 E、稱黑素、銀杏提取物)等W認(rèn)知功能障礙的藥物治療較多，但臨 床療效均不夠確切、口服吸收差、不易透過血腦屏障、特異性不強(qiáng)、或毒副作用大、特別是治 標(biāo)不治本等缺點(diǎn)。研究開發(fā)新型高效的抗老年癡呆的新藥是目前醫(yī)藥保健中迫切需要解決 的課題。但目前在運(yùn)一研究領(lǐng)域與國(guó)外同類研究還有較大差距。從天然產(chǎn)物中尋找發(fā)現(xiàn)抗 老年癡呆的化學(xué)成分是天然藥物研究中的一個(gè)新的熱點(diǎn)和發(fā)展方向。特別是海洋天然產(chǎn) 物，由于具有特殊的化學(xué)結(jié)構(gòu)和生理活性，從中發(fā)現(xiàn)抗老年癡呆的化學(xué)成分將具有更廣闊 的前景。
[0006] 有關(guān)草苔蟲總內(nèi)醋的抗老年癡呆活性，國(guó)內(nèi)外尚未見有過報(bào)導(dǎo)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于提供草苔蟲總內(nèi)醋及其制備方法;本發(fā)明的另一目的在于提供 草苔蟲總內(nèi)醋的新的醫(yī)藥用途。
[0008] 本發(fā)明的第一方面，提供了一種草苔蟲總內(nèi)醋，所述的草苔蟲總內(nèi)醋W總合草苔 蟲為原料，經(jīng)常規(guī)方法提取純化，得到草苔蟲總內(nèi)醋。
[0009] 本發(fā)明所述的草苔蟲總內(nèi)醋，經(jīng)高效液相層析分析，主要含有草苔蟲內(nèi)醋5、10、18 和4等10多種內(nèi)醋成分，其中W草苔蟲內(nèi)醋4的含量最高。Bryostatin 4占草苔蟲總內(nèi)醋 60%W上(質(zhì)量百分比）。
[0010] 較優(yōu)的，總合草苔蟲采集自我國(guó)南方海域。
[001。 本發(fā)明的第二方面，提供一種草苔蟲總內(nèi)醋的制備方法。
[0012] -種草苔蟲總內(nèi)醋的制備方法，其特征在于，所述的草苔蟲總內(nèi)醋的制備方法如 下：
[0013] 新鮮采集的總合草苔蟲Bugula neritina Linnaeus,用95%乙醇室溫浸提，將乙 醇提取液，減壓回收乙醇，得浸膏；
[0014] 浸膏用90%甲醇懸浮分散，用正己燒萃取，棄去正己燒萃取物;含水甲醇層再加水 成80 %甲醇水溶液，用αη4萃取，得αη4萃取物；
[0015] 0^4萃取物經(jīng)200~300目硅膠柱層析得活性組分;再經(jīng)過S邱hadex LH-20凝膠柱 層析，WC出Cl2: MeOH( 1:1)洗脫，流速60mL/h，得到活性組分A和活性組分B;
[0016] 對(duì)活性組分A和活性組分B分別進(jìn)行兩次凝膠柱層析，第一次W化xane:CH2Cl2: MeOH(4:5:1)洗脫，第二次WHexane: C出CI2:MeOH( 10:10 :1)洗脫，分別得到活性組分C和活 性組分D;
[0017] 活性組分C和活性組分D進(jìn)行0DS快速柱層析，W50%、80%Me0H梯度洗脫，得草苔 蟲總內(nèi)醋。
[0018] 在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，所述的草苔蟲總內(nèi)醋的制備方法，具體如下：
[0019] 新鮮采集的總合草苔蟲Bugula neritina Linnaeus原料，用95%乙醇室溫浸提一 周，共提取4遍，合并乙醇提取液，減壓回收乙醇，得浸膏。浸膏用90%甲醇懸浮分散，用正己 燒萃取5次，得正己燒萃取物，經(jīng)體外抗癌活性篩選無活性，棄去。含水甲醇層再加水使成 80 %甲醇水溶液，用αη4萃取5次，得αη4萃取物，為活性部位。該活性部位經(jīng)快速硅膠柱層 析（200~300目）得活性組分。再經(jīng)過Se地adex LH-20凝膠柱層析，WC此Cl2:Me0H(l: 1)洗 脫，流速60mL/h，得到兩個(gè)活性組分A和B。對(duì)運(yùn)兩個(gè)活性組分分別進(jìn)行兩次凝膠柱層析，依 次 WHexane-CH2Cl2-Me0H(4:5:1)和Hexane : CH2CI2:MeOH( 10 :10:1)洗脫，分別得到純度更 高、活性更強(qiáng)的兩個(gè)組分C和DX、D兩組分仍含有較多的綠色素，故將兩者合并，進(jìn)行0DS快 速柱層析，W50%、80%MeOH梯度洗脫，得淺黃色總草苔蟲內(nèi)醋(BRYS)。
[0020] 所述的95%乙醇用量為原料的20-30倍(重量比）。
[0021] 所述的正己燒萃取5次，每次用量4-化。
[0022] 所述的αη4萃取5次，每次用量1-化。
[0023] 本發(fā)明的第Ξ方面，提供上述的草苔蟲總內(nèi)醋的新的醫(yī)藥用途。
[0024] 本發(fā)明提供了草苔蟲總內(nèi)醋在制備預(yù)防或治療老年癡呆藥物或保健品中的應(yīng)用。
[0025] 本發(fā)明所述的草苔蟲總內(nèi)醋在制備預(yù)防或治療老年癡呆藥物或保健品中的應(yīng)用 中，所述的藥物或保健品中：草苔蟲總內(nèi)醋作為唯一活性成份，或包含草苔蟲總內(nèi)醋的組合 物。
[0026] 所述藥物或保健品中，草苔蟲總內(nèi)醋的含量為0.1-99wt%，優(yōu)選含量為0.5-90wt%。
[0027] 所述藥物中，草苔蟲總內(nèi)醋、包含草苔蟲總內(nèi)醋的藥物組合物可W和藥劑學(xué)上的 常規(guī)藥用輔料制成藥物制劑。
[0028] 所述的藥物制劑可W是片劑、顆粒劑、分散片、膠囊劑、軟膠囊劑、滴丸、注射劑、粉 針劑，或氣霧劑等。
[0029] 本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，草苔蟲總內(nèi)醋具備抗老年癡呆生物活性：
[0030] 雄性ICR小鼠隨機(jī)分為9組，每組小鼠6只。設(shè)對(duì)照組，BOTS藥物設(shè):0.0025mg/kg， 0.005mg/kg，0.01mg/kg組，抗衰老實(shí)驗(yàn)陽性藥物(維生素 E)。服和維生素 E注射給藥，共60 天。末次給藥Ih后，全部小鼠做水迷宮實(shí)驗(yàn)，持續(xù)一周，記錄小鼠找到平臺(tái)的時(shí)間。在小鼠水 迷宮實(shí)驗(yàn)中，草苔蟲總內(nèi)醋(BRYS)與模型組相比，中濃度組和高濃度組能顯著縮短游泳時(shí) 間。一周后，按照試劑盒說明書處理樣品，檢測(cè)腦勻漿乙酷膽堿醋酶活力，乙酷膽堿轉(zhuǎn)移酶 含量和血清SOD活力，丙二醒含量，谷脫甘膚過氧化物酶活力，乙酷膽堿含量，谷脫甘膚含 量。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0軟件處理，數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，草苔蟲總內(nèi)醋有明 顯的抗老年癡呆活性。此外，草苔蟲總內(nèi)醋對(duì)體質(zhì)量和臟器指數(shù)均無明顯的影響，表明毒性 較低。
[0031] W上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，草苔蟲總內(nèi)醋具有顯著的抗老年癡呆活性和較低的毒性，可 用于開發(fā)抗老年癡呆的藥品。
[0032] 由于，在本發(fā)明的草苔蟲總內(nèi)醋中，W草苔蟲內(nèi)醋4的含量最高，B巧ostatin 4占 草苔蟲總內(nèi)醋60% W上。因此，本發(fā)明也提供了化yostatin 4在制備預(yù)防或治療老年癡呆 藥物或保健品中的應(yīng)用。
[0033] 本發(fā)明尋找到了安全有效的抗老年癡呆的藥品。
【具體實(shí)施方式】
[0034] 下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】，進(jìn)一步闡釋本發(fā)明。下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如 無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料和試劑等，如無特殊說明，均可從商 業(yè)途徑得到。運(yùn)些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。
[0035] 實(shí)施例1.草苔蟲總內(nèi)醋的提取純化
[0036]