一種治療肺鱗癌的馬尾松樹(shù)皮提取物及其制備方法與其組合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及中藥提取物技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種用于防治肺鱗癌的馬尾松樹(shù)皮提 取物及其制備方法與其組合物。
【背景技術(shù)】
[0002] 癌癥對(duì)人類的威脅日益增大，日漸成為危及人類健康與生命的"頭號(hào)殺手"。征服 癌癥已成為全人類面臨的一項(xiàng)迫在眉睫的任務(wù)，各國(guó)都把它作為重要課題，并投入巨資進(jìn) 行攻關(guān)。由于癌癥的手術(shù)治療、放射治療、化學(xué)藥品治療均存在一定程度的局限性，且化學(xué) 藥品治療癌癥的毒副作用不斷出現(xiàn)，國(guó)際科學(xué)界開(kāi)始把目光轉(zhuǎn)向更為安全的天然植物提取 物，并成為治療癌癥的研究熱點(diǎn)。
[000引 20世紀(jì)50年化法國(guó)Masquelier博±首次從法國(guó)海松的樹(shù)皮中提取得到一種黃 酬類天然抗氧化劑混合物-原花青素，其抗氧化活性為V。的50倍、V。的20倍，并能清除體 內(nèi)過(guò)多的活性氧自由基，降低機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化程度，具有抗氧化、延緩衰老、增加免疫能力 等功效。50年代后期，上述法國(guó)海松樹(shù)皮提取物被注冊(cè)為Pycnogenol藥物，用于提高血管 抵抗力，降低毛細(xì)血管脆性和通透性，防止血管內(nèi)皮損傷等用途。1999年化ynh等化uynh et al，Anticancer Res, 1999)發(fā)現(xiàn)上述法國(guó)海松樹(shù)皮提取物能抑制癌活性代謝物NNK活 化，可防止抽煙誘發(fā)的肺癌。但有研究表明煙草致癌原NNK灌注的動(dòng)物模型中，NNK主要作 用于II型肺泡細(xì)胞、Clara細(xì)胞，使其向腺癌方向發(fā)展，其與甲基膽蔥灌注引起的肺鱗癌模 型病變過(guò)程完全不同。
[0004] 盡管國(guó)外存在關(guān)于法國(guó)海松、新西蘭福射松樹(shù)皮提取物生物學(xué)活性的研究報(bào)道， 但我國(guó)松樹(shù)生存環(huán)境獨(dú)特，其體內(nèi)次生代謝物種類、含量和性質(zhì)與前兩者相比存在諸多差 異。吳杰等人研究了中國(guó)松科中不同品種松樹(shù)皮中活性成分的差異，結(jié)果顯示不同品種松 樹(shù)皮活性物質(zhì)的含量差異顯著，其中，馬尾松樹(shù)皮提取物中的總多酪含量、總黃酬含量、原 花青素和水溶性多糖含量最高。并且，有關(guān)馬尾松樹(shù)皮提取物的研究多集中在由馬尾松樹(shù) 皮提取原花青素等活性物質(zhì)方面，其提取工藝也各有差異。
[0005] 崔映宇等（《食品科學(xué)》，2004年）從馬尾松樹(shù)皮中制備獲得了馬尾松樹(shù)皮提取 物，其提取過(guò)程包括將馬尾松樹(shù)皮經(jīng)篩選、烘干和粉碎后，用純水加熱浸提，浸提液經(jīng)粗濾、 離屯、分離和微濾后，除去懸浮物和大分子雜質(zhì)，再用中空纖維膜超濾，得到含有前花青素等 生物活性成分的透過(guò)液，納濾濃縮，去除糖類、無(wú)機(jī)鹽等雜質(zhì)和水后，干燥，即得。但上述提 取過(guò)程采用熱水浸提，提取溫度較高，導(dǎo)致松樹(shù)皮中含有的揮發(fā)性物質(zhì)丟失，影響萃取物活 性，且純化過(guò)程中W單一原花青素作為目標(biāo)物，其過(guò)濾濃縮條件W及對(duì)糖類等物質(zhì)的去除， 將導(dǎo)致馬尾松樹(shù)皮提取物無(wú)法保持其有效成分的完整性。
[0006] 薄采穎等使用超聲法從馬尾松樹(shù)皮中提取多酪類物質(zhì)，包括將馬尾松樹(shù)皮切碎、 干燥和粉碎后，得到松樹(shù)皮粉末，W 70%乙醇為溶劑，在30°C條件下，料液比為20:1 (ml : g)，超聲提取40min，提取液離屯、過(guò)濾，測(cè)多酪得率。該方法采用乙醇作為提取溶劑，提取溫 度略高，與水作為提取溶劑低溫提取相比，提取物組分將會(huì)有較大差異。
[0007] CN1923830A通過(guò)水溶劑從馬尾松樹(shù)皮中提取原花青素，具體包括W松樹(shù)皮內(nèi)皮層 為原料，加入5-10倍的水，沸騰回流1-化，經(jīng)過(guò)300目管道過(guò)濾器，放出浸提液，重復(fù)一次， 合并浸提液；離屯、，過(guò)柱，濃縮，干燥得到粉末。該方法采用沸騰回流收取提取物，將導(dǎo)致有 效成分的損失。
[0008] CN101468121A公開(kāi)了將紫花首猜、覆盆子、小橫柳和馬尾松樹(shù)皮按照1:1:1:1混 合，加入3倍重量的凈水浸泡4她，在> 100°C下煎煮化，然后初濾、精濾和微孔阻菌精濾，濃 縮后，噴霧干燥，得到粉末。該方法提取原料除馬尾松樹(shù)皮外還包括紫花首猜、覆盆子、小橫 柳，將導(dǎo)致提取物混合組分與單獨(dú)馬尾松樹(shù)皮提取物有較大差異，且采用了高溫煎煮、噴霧 干燥的方法，使得部分有效組分揮發(fā)物不能鎖定被流失。
[0009] 杜酷等研究了回流、索氏提取、超聲提取等不同的浸提方法及不同提取條件，通過(guò) 水溶劑從馬尾松樹(shù)皮中提取原花青素的效率，結(jié)果表明不同的浸提方法，不同的提取條件 都會(huì)影響原花青素得率。且在使用超聲法提取原花青素時(shí)其最佳提取溫度為50°c，并給出 了低溫條件會(huì)影響原花青素提取效率的不利教導(dǎo)。
[0010] CN101701013A公開(kāi)了用水作為溶劑從松樹(shù)皮中提取原花青素，W松樹(shù)皮為原料， 水為提取溶劑，進(jìn)行超聲波強(qiáng)化浸提，得到原花青素浸提液；再用微濾除雜、超濾純化、納濾 濃縮的膜分離技術(shù)處理，得到濃縮液；再經(jīng)真空干燥或冷凍干燥，得到原花青素產(chǎn)品。該方 法記載了提取過(guò)程在低溫條件下操作，但其【具體實(shí)施方式】選擇了 45°C和50°C進(jìn)行超聲提 取，并仍然W提取原花青素作為主要目標(biāo)物，純化過(guò)程中選擇了與原花青素相適應(yīng)的截留 分子量，得到的凍干產(chǎn)品中原花青素的含量可W達(dá)到67-68% wt，總酪含量可達(dá)到85-87% Wt 〇
[0011] 綜上，馬尾松樹(shù)皮提取物含有多種酪類、糖類等多種成分組合而成的復(fù)合物，且不 同的提取溶劑、提取過(guò)程、提取條件、分離純化操作等，均會(huì)導(dǎo)致最終提取物中組分及組分 比例的差異。
[001引 目前，馬尾松樹(shù)皮提取物抗腫瘤活性的研究主要包括：CN104398541A公開(kāi)通過(guò) 有機(jī)溶劑萃取獲得了包括海松酸、松香酸等成分的提取物，該提取物用于制備抵抗鱗狀細(xì) 胞癌和惡性黑色素瘤等皮膚癌的藥物制劑。崔映宇等通過(guò)熱水浸提得到的W原花青素為 主的馬尾松樹(shù)皮提取物，對(duì)結(jié)腸癌、膀脫癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肺癌、肝癌、骨肉瘤、白血病等癌 細(xì)胞株具有抑制作用；同時(shí)，馮冬茹等也發(fā)現(xiàn)該馬尾松樹(shù)皮提取物還能夠抑制肺腺癌細(xì)胞 Glc-82,肝癌細(xì)胞Be^7402DNian-Yun Yang等證實(shí)馬尾松樹(shù)脂提取物能夠抑制人皮膚鱗狀 細(xì)胞癌細(xì)胞系A(chǔ)431和肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549的增殖。上述公開(kāi)技術(shù)所使用的提取物均來(lái)自于 松樹(shù)皮或馬尾松樹(shù)皮，但由于提取方法不同，相應(yīng)提取物W及提取物的活性也有較大變化。
[0013] 肺鱗狀細(xì)胞癌（spuamous cell carcinoma)是肺IM1支常見(jiàn)的組織學(xué)類型，發(fā)生 在肺（支氣管）的上皮性腫瘤，惡性程度高，鏡下多見(jiàn)細(xì)胞角化和（或）細(xì)胞間橋，多起源于 葉支氣管、段支氣管和亞段支氣管，故肺鱗狀細(xì)胞癌中央型，也有少部分肺鱗狀細(xì)胞癌屬周 圍型。肺鱗癌生長(zhǎng)較腺癌快，但轉(zhuǎn)移比腺癌晚，晚期鱗癌扣發(fā)生肺口淋己結(jié)和縱隔淋己結(jié)轉(zhuǎn) 移，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移少見(jiàn)。中老年男性煙者為高危人群，其發(fā)生率與煙齡和每天吸煙量成正比，鱗 癌術(shù)后5年生存率平均為20 % -25 %。肺鱗癌與其他鱗狀細(xì)胞癌如表皮癌的發(fā)病機(jī)理不同， 肺鱗癌主要由支氣管粘膜上皮發(fā)生鱗狀上皮化生，進(jìn)一步發(fā)生不典型增生，最后癌變；而其 他鱗狀細(xì)胞癌多發(fā)生在有鱗狀上皮覆蓋的部位，如皮膚、口腔等處。盡管有些關(guān)于馬尾松提 取物治療表皮癌和口腔鱗癌的報(bào)道，但基于肺鱗癌與表皮鱗癌發(fā)病機(jī)理的差異，至今為止， 國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)有人使用馬尾松樹(shù)皮提取物來(lái)治療肺鱗癌，也未見(jiàn)任何報(bào)道設(shè)及從馬尾松樹(shù)皮 中提取到能夠抵抗肺鱗狀細(xì)胞癌的提取物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014] 本發(fā)明的目的在于提供一種用于防治肺鱗癌的馬尾松樹(shù)皮提取物的制備方法，包 括下述步驟：1)將馬尾松樹(shù)皮粉碎至200-800目，制得馬尾松樹(shù)皮粉尚在4~25°C條 件下，在馬尾松樹(shù)皮粉中加入水，浸泡1-lOh，其中，馬尾松樹(shù)皮粉與水的質(zhì)量體積比為1 : 2-1:15 ;3)超聲提取5min-2h，過(guò)濾，制得馬尾松樹(shù)皮水提液；4)馬尾松樹(shù)皮水提取液經(jīng)干 燥，即得。
[0015] 本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述馬尾松樹(shù)皮粉碎前經(jīng)篩選、除雜、烘干處理，優(yōu)選 所述烘干溫度為30~80°C，更優(yōu)選為40-70°C，最優(yōu)選為50-60°C。
[0016] 本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中