使用溶酶體酸性脂肪酶來治療患者的溶酶體酸性脂肪酶缺乏的制作方法
【專利說明】使用溶酶體酸性脂肪酶來治療患者的溶酶體酸性脂肪酶缺乏
[00011本申請是申請日為2011年9月9日、申請?zhí)枮?01180053951.X、發(fā)明名稱為"使用溶 酶體酸性脂肪酶來治療患者的溶酶體酸性脂肪酶缺乏"的發(fā)明專利申請的分案申請。
[0002] 發(fā)明背景
[0003]溶酶體酸性脂肪酶(LAL)缺乏是罕見的溶酶體貯積病(LSD)，其特征為由于酶的缺 乏而無法降解溶酶體中的膽固醇酯(CE)和甘油三酯(TAG) 1AL缺乏與其它溶酶體貯積病的 類似之處在于底物在許多組織和細胞類型中積聚。在LAL缺乏中，底物積聚在網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng) 的細胞中是最明顯的，包括肝臟中的Kupffer細胞、脾臟中的組織細胞、以及小腸中的固有 層。網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞表達巨噬細胞甘露糖/N-乙?；咸前肥荏w(也稱為巨噬細胞甘露糖受 體、MMR或CD206)，所述受體介導結(jié)合、細胞攝取以及具有GlcNAc或甘露糖封端的N-聚糖的 蛋白質(zhì)的溶酶體內(nèi)化，并且提供用于在這些關(guān)鍵細胞類型中潛在校正酶缺乏的途徑。
[0004]LAL缺乏是多系統(tǒng)疾病，其最常見表現(xiàn)為胃腸、肝臟以及心血管并發(fā)癥，并且造成 明顯的發(fā)病率和死亡率。LAL缺乏的臨床作用是由于脂質(zhì)材料在多種組織的溶酶體中大量 積聚和對膽固醇和脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)機制的強烈干擾，包括肝臟膽固醇合成的實質(zhì)性增加。LAL缺乏 呈現(xiàn)為至少兩種表型:沃爾曼氏病(WolmanDisease，WD)和膽固醇酯積病(CESD)。
[0005]沃爾曼氏病，以首先描述它的醫(yī)生來命名，是LAL缺乏的最具有侵襲性的呈現(xiàn)。這 個表型的特征為胃腸和肝臟表現(xiàn)，包括生長不足、吸收不良、皮脂溢、體重劇烈減輕、淋巴結(jié) 病、脾腫大以及肝腫大。沃爾曼氏病通常在生命期的第1年內(nèi)快速進行并且常常是致命的。 病例報告評論表明由于在生命期的第1年內(nèi)的嚴重LAL缺乏，存活超過12個月齡對于呈現(xiàn)出 生長不足的患者是極其罕見的。在所述最具侵襲性的形式中，生長不足是主要臨床特征，并 且是早期死亡率的主要原因。由肝臟增大和轉(zhuǎn)氨酶升高所證明的肝損害的情況在嬰兒中也 是常見的。
[0006]沃爾曼氏病的診斷通過身體發(fā)現(xiàn)和實驗室分析來確定。嬰兒通常由于腹瀉、持續(xù) 性嘔吐、喂養(yǎng)困難、發(fā)育遲緩以及發(fā)育停滯而在生命期的前兩二個月內(nèi)住院。身體發(fā)現(xiàn)包括 因肝腫大和脾腫大而腹脹，并且放射檢查經(jīng)常揭示腎上腺的鈣化。實驗室評估通常揭示血 清轉(zhuǎn)氨酶水平升高，和內(nèi)源性LAL酶活性不存在或者顯著降低。在一些患者中觀察到膽固醇 和甘油三酯的血液水平升高。
[0007]患有LAL缺乏的患者還可以在生命后期呈現(xiàn)出主要的肝臟和心血管損害，并且這 經(jīng)常稱為膽固醇酯貯積病(CESD)。在CESD中，肝臟受到明顯的肝腫大、肝細胞壞死、轉(zhuǎn)氨酶 升高、肝硬化以及肝纖維化的嚴重影響。由于CE和TAG的水平提高，因此心血管損害可以高 脂血癥為特征。在一些患有CESD的受試者中已經(jīng)報導了脂肪沉積物積聚在動脈壁上(動脈 粥樣硬化）。這些沉積物使動脈管腔變窄，并且可以導致血管堵塞，從而增加包括心肌梗塞 和中風在內(nèi)的明顯的心血管事件的風險。然而，并非所有患有LAL缺乏的受試者都發(fā)展出動 脈粥樣硬化。例如，沃爾曼氏病患者承受著與下列疾病有關(guān)的其它癥狀，包括:肝臟和脾臟 增大、淋巴結(jié)病、以及小腸吸收障礙，但是WD通常不以動脈粥樣硬化為特征(TheMetabolic andMolecularBasesofInheritedDisease(Scriver，C.R.，Beaudet，A.L.，Sly，W.S.與 ValleD.編著）第7版，第2卷，第2570頁McGraw-Hi11，1995)。同樣，并非所有CESD患者都展 現(xiàn)出動脈粥樣硬化。參見Di Bisceglie等，Hepatology 11:764-772( 1990) ;Ameis等，J. Lipid Res. 36:241-250(1995) <XESD的呈現(xiàn)對于一些未診斷出的患者高度可變，直到成 年后期表現(xiàn)出并發(fā)癥，而其它人可以在兒童早期呈現(xiàn)出肝功能障礙。CESD與壽命縮短和明 顯的不健康相關(guān)。患有CESD的那些人的預期壽命取決于相關(guān)并發(fā)癥的嚴重性。
[0008]沃爾曼氏病的現(xiàn)有治療選擇非常有限。將抗體施用至發(fā)熱和/或有感染跡象的嬰 兒?？梢蚤_出類固醇替代療法用于腎上腺機能不全和專門的營養(yǎng)支持，并且在沒有這些介 入會預防死亡的證據(jù)的同時，目前也不清楚它們是否對短期存活具有影響。在用骨髓移植 治療的四名患有LAL缺乏的一系列患者中，由于移植數(shù)月內(nèi)所述程序的并發(fā)癥，所有四名患 者都死亡。盡管在后續(xù)病例報導中描述了一些成功的情況，但是死亡率保持較高，并且多名 患者由于他們病情太重而無法從移植前調(diào)節(jié)性方案中存活，因此沒有被移植。極少數(shù)的報 導的長期存活者確實表明造血細胞中的酶缺乏的校正單獨就足以實質(zhì)性改善這種疾病的 臨床狀況。通常通過飲食限制來提供臨床支持以嘗試限制與導致死亡的疾病的急性表現(xiàn)相 關(guān)的不可轉(zhuǎn)運的和不可分解代謝的脂質(zhì)的積累。
[0009]CESD表型的現(xiàn)有治療選擇集中于經(jīng)由控制脂質(zhì)積聚(通過排除富含膽固醇和甘油 三酯的食物的飲食）并且通過施用降膽固醇藥物（例如，斯達汀（statin)和消膽胺 (cholestyramine))抑制膽固醇合成和載脂蛋白B的產(chǎn)生來對癥治療。盡管可以看到一些臨 床改善，但是潛在的疾病表現(xiàn)持續(xù)存在并且仍存在疾病進展。
[0010]已經(jīng)表明，用重組LAL的酶替代療法可以是溶酶體酸性脂肪酶缺乏和相關(guān)病癥的 可行治療選擇（參見Meyers等·（1985)NutritionRes· 5(4) :423-442 ;W09811206;以及 Besley(1984)ClinicalGenetics26:195-203)。使用LAL缺乏的小鼠模型的一些研究已經(jīng) 證實通過每3天一次輸注高劑量的(超過1毫克/公斤體重)重組人LAL，LAL缺乏(LAI/a)小鼠 的一些異常得以校正（例如參見GrabowskiUS2007/0264249)。這些校正LAL缺乏小鼠內(nèi)的 缺陷的早期研究表明為了校正潛在的表型，需要相對大量和高頻率劑量的重組LAL蛋白。還 重要的是應注意，不同于最初描述的LAL+大鼠模型（Yoshida和Kuriyama( 1990 ) LaboratoryAnimalScience，第40卷，第486-489頁），上述研究中使用的LAL-Z-小鼠模型并 不酷似人WD，因為LAL缺乏小鼠并未展現(xiàn)出人患者中觀察到的生長缺陷。
[0011]迄今為止，沒有外源性LAL施用至人，并且沒有有效的療法可用于治療LAL缺乏，包 括WD、CESD以及其它疾病。因此，為了改善患者的生活品質(zhì)，極端需要具有最低施用頻率的 療法。另外，需要在人患者中恢復生長、使肝功能正?；?、增加LAL組織濃度并且增加LAL活 性的治療有效劑量。
[0012] 發(fā)明概述
[0013]本發(fā)明是基于首次人臨床病例，其中患者被成功地給予外源性LAL。患有LAL缺乏 的其它致命形式(沃爾曼氏病或早發(fā)性LAL缺乏)的嬰兒通過施用外源性LAL得到有效治療， 并且對患有遲發(fā)性LAL缺乏的一組人患者評估了LAL酶替代療法的安全性評價?；加性绨l(fā)性 LAL缺乏的嬰兒每周以低劑量施用，而沒有引發(fā)任何不良事件或反應。早在初始施用后1至2 周就觀察到生命體征和臨床/實驗室測量的功效的顯著改善。在每周給藥4個月之后，治療 的嬰兒已經(jīng)恢復正常生長并且展現(xiàn)出與LAL缺乏有關(guān)的所有癥狀(包括吸收障礙、肝腫大以 及肝功能）的明顯改善。遲發(fā)性成年患者也每周給予低量的外源性LAL，沒有不良事件的跡 象。因此，迄今為止收集的臨床數(shù)據(jù)顯示使用本發(fā)明的外源性LAL的酶替代療法提供用于 LAL缺乏的安全且有效的治療。
[0014] 因此，本發(fā)明提供通過施用有效量的外源性溶酶體酸性脂肪酶(LAL)來治療人患 者中與LAL缺乏相關(guān)的疾病或病癥的方法。外源性LAL可以為具有N-連接型聚糖結(jié)構(gòu)的重組 人LAL，所述聚糖結(jié)構(gòu)包含至少一個甘露糖和/或甘露糖-6-磷酸。外源性LAL被有效地內(nèi)化 到例如淋巴細胞、巨噬細胞和/或成纖維細胞的溶酶體中。
[0015]在一些實施方案中，患有LAL缺乏的人患者被診斷為患有沃爾曼氏病(WD)。在一個 實施方案中，施用足以提高WD患者的生長。在一個實施方案中，施用足以恢復WD患者的正常 生長。在其它實施方案中，患有LAL缺乏的人患者被診斷為患有膽固醇酯貯積病(CESD)。根 據(jù)本發(fā)明的治療方法可以提供給任何年齡的人患者。
[0016] 本文還提供通過將有效改善肝功能的量的重組人LAL施用至患者來治療患有LAL 缺乏的人患者的方法。在一些實施方案中，施用足以使肝臟檢驗正?；?。在一個實施方案 中，施用足以降低肝臟轉(zhuǎn)氨酶的血清水平。例如，肝臟轉(zhuǎn)氨酶可以包括血清天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶 (AST)和/或丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)。在一個實施方案中，施用足以使肝腫大減至最小。在一個 實施方案中，施用足以降低患者的肝臟大小。在一個實施方案中，施用足以降低血清鐵蛋白 水平。
[0017] 在一個實施方案中，施用足以降低血清脂質(zhì)水平，包括例如膽固醇酯(CE)和/或甘 油三酯（TG)水平。
[0018] 還提供增加患有LAL缺乏的人患者的LAL活性的方法。所述方法包括將重組人LAL 施用至患者，以便所述施用使得LAL活性增加，如可在例如淋巴細胞和/或成纖維細胞中所 測量。
[0019] 在一個實施方案中，描述通過每5天1次至每30天1次將有效量的外源性LAL蛋白施 用至患者而治療人患者的與LAL缺乏相關(guān)的病狀的方法。
[0020] 在一些實施方案中，患有LAL缺乏的人患者被給予約0.lmg至約50mg外源性LAL/公 斤體重。在一個實施方案中，人患者被給予約0.lmg至約10mg的外源性LAL/公斤體重。在一 個實施方案中，人患者被給予約〇.lmg至約5mg的外源性LAL/公斤體重。
[0021 ] 在一個實施方案中，輸注速率在約0.lmg/kg/h至約4mg/kg/h之間。
[0022] 在一些實施方案中，人患者用第二治療劑治療。第二治療劑可以包括例如降膽固 醇藥物（例如，斯達汀或依澤替米貝（ezetimibe))、抗組胺劑（例如，苯海拉明 (diphenhydramine))或免疫抑制劑。
[0023] 附圖簡述
[0024]圖1A描繪每周接受外源性LAL(SBC-102)給藥(劑量:0.2mg/kg(初始輸注，第0周）； 0.3mg/kg(第1周）；0.5mg/kg(第2周）；以及1 .Omg/kg(第3-8周））的嬰兒男性沃爾曼氏病 (即，早發(fā)性LAL缺乏）患者的血清天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)的水平。圖1B描繪同一患者的血清 丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)的水平?；颊咴诔跏驾斪r的年齡為4個月零1周。
[0025]圖2描繪每周接受外源性LAL(SBC-102)給藥(劑量:0.2mg/kg(初始輸注，第0周）；0.3mg/kg(第1周）；0.5mg/kg(第2周）；以及1 .Omg/kg(第3-8周））的沃爾曼氏病患者的血清 鐵蛋白水平?；颊咴诔跏驾斪r的年齡為4個月零1周。示出第0周初始給藥后1周以后的血 清鐵蛋白水平。
[0026]圖3描繪每周接受外源性LAL(SBC-102)給藥(劑量:0.2mg/kg(初始輸注;第0周）； 0.3mg/kg(第1周）；0.5mg/kg(第2周）；以及1 .Omg/kg(第3-8周））的沃爾曼氏病患者的生長 速度。
[0027]圖4描繪沃爾曼氏病患者的生長曲線(男孩的年齡標準體重(kg)百分位數(shù)）。
[0028]圖5描繪每周接受0.35mg/kg的劑量的外源性LAL的41歲白人男性CESD患者的血清AST水平。
[0029]圖6描繪每周接受0.35mg/kg的劑量的外源性LAL的41歲白人男性CESD患者的血清ALT水平。
[0030]圖7描繪每周接受0.35mg/kg的劑量的外源性LAL的41歲白人男性CESD患者的血清 白蛋白水平。
[0031]圖8描繪每周接受0.35mg/kg的劑量的外源性LAL的41歲白人男性CESD患者的血清 鐵蛋白水平。
[0032] 圖9圖解了四只年齡匹配的雄性大鼠的增重速率，這四只大鼠各自被分配給下列 四種外源性LAL給藥方案中的一種:每周一次lmg/公斤、每周一次5mg/公斤、每2周一次5mg/ 公斤或安慰劑。柱內(nèi)的數(shù)字表示出生后的天數(shù)。
[0033] 圖10描繪野生型對照、外源性LAL治療的LAL缺乏大鼠以及安慰劑治療的LAL缺乏 大鼠的病理學和組織病理學檢查的結(jié)果。宏觀病理學證實用外源性LAL治療的大鼠的肝臟 的顏色和大小正常化。來自用外源性LAL治療的大鼠的肝臟組織的組織病理學顯示基本上 正常的肝臟組織學，這與安慰劑治療的動物中的泡沫狀巨噬細胞的大量積聚形成明顯對 照。
[0034] 圖11描繪在使用順序掃描模式通過共聚焦熒光顯微術(shù)檢查的細胞的溶酶體中，重 組人LAL( SBC-102)和溶酶體標記物的共定位。
[0035]圖12描繪使用巨噬細胞細胞系NR8383通過競爭結(jié)合測定評價的重組人LAL(SBC-102)與GlcNAc/甘露糖受體的結(jié)合特異性。
[0036]圖13描繪重組人LAL在正常細胞和LAL-缺乏細胞中的活體外活性。
[0037]圖14圖解了重組人LAL(SBC-102)治療對LAL缺乏大鼠的內(nèi)部器官質(zhì)量的作用。器 官大小表示為在每周施用媒介物或5mg/kg的SBC-102持續(xù)4周之后，在LAL+大鼠和LALV+大 鼠中在8周齡測定的體重百分率。
[0038]圖15圖解了在每周給予媒介物或5mg·kg"1的SBC-102持續(xù)4周之后，野生型和LAL缺乏大鼠的體重。劑量施用在第4周開始以菱形在X-軸上突出顯示。
[0039]圖16描繪在每周給予媒介物或5mg·kg<的SBC-102持續(xù)4周之后，在WT和LAL缺乏 大鼠中在8周齡測定的肝臟膽固醇、膽固醇酯和甘油三酯的水平。
[0040] 圖17描繪LAL缺乏大鼠的體重增加百分率。
[0041]圖18描繪在施用SBC-102持續(xù)4周之后，LAL缺乏大鼠的肝臟重量(作為體重的百分 率)。
[0042]圖19圖解了在施用SBC-102持續(xù)4周后，LAL缺乏大鼠中的組織膽固醇酯的水平。 [0043]發(fā)明詳述
[0044]本發(fā)明提供用于治療患有對施用外源性溶酶體酸性脂肪酶具有反應性的疾病或 病癥的人的方法。
[0045] 定義
[0046]為了方便起見，說明書、實施例以及所附權(quán)利要求書中使用的某些術(shù)語在本文中 進行闡述以說明和定義用于描述本發(fā)明的各種術(shù)語的含義和范圍。
[0047]如本文使用的"LAL"是指"溶酶體酸性脂肪酶"并且貫穿本說明書這兩個術(shù)語可互 換使用。LAL可以是人蛋白，S卩，人溶酶體酸性脂肪酶。如本文使用的術(shù)語"SBC-102"是指重 組人溶酶體酸性脂肪酶。LAL在文獻中還被稱為酸膽固醇酯水解酶、膽固醇酯酶、脂肪酶A、 LIPA以及固醇酯酶。
[0048]LAL催化膽固醇酯和甘油三酯水解為游離膽固醇、甘油和游離脂肪酸。因此，"LAL活性"可以例如通過熒光底物4-甲基傘形酮油酸酯(4MU0)的裂解來測量。4MU0的裂解可以 例如通過所釋放的焚光團（flurophore)4_甲基傘形酮(4MU)在約360nm處的激發(fā)和在460nm 處的發(fā)射來檢測。結(jié)果可以以相對熒光單位(RFU)來報告。例如，在30分鐘端點測定中裂解 的底物的量可以相對于4MU標準曲線來量化，并且一個活性單位(U)可以定義為在37°C下裂 解1微摩爾的4MU0/分鐘所需要的酶的量。因此，LAL的功能性片段或變異體包括具有LAL活 性(例如，水解膽固醇酯和/或甘油三酯的能力）的片段或變異體。
[0049]如本文使用的"外源性LAL"是指非患者天然產(chǎn)生的LAL。例如，外源性LAL包括施用 至患者的重組LAL蛋白、分離自人或動物并且施用至患者的LAL蛋白以及由于施用編碼LAL 的RNA和/或DNA或增加內(nèi)源性LAL蛋白表達的另一種治療而在患者中產(chǎn)生（即表達)的LAL蛋 白。
[0050] "靜脈內(nèi)注射"在醫(yī)學上經(jīng)常稱為IV推注或團注，是指以下施用途徑:其中注射器 被連接IV接入裝置，并且藥劑被直接注射，通?？焖僮⑸洌⑶胰绻赡芤痨o脈刺激或 過于快速的作用，則有時持續(xù)至多15分鐘的時間。一旦藥物被注射到IV管的流體流中，則必 須有一些手段來確保它從管中到達患者。通常，這通過以下來完成：允許流體流正常流動， 并且由此攜帶藥物至血流中。然而，在一些情況下，在第一注射之后使用第二流體注射(有 時稱為"沖洗(flush)"），以促進藥物進入血流。
[0051] "靜脈內(nèi)輸注"是指以下施用途徑:其中藥劑在延長的一段時間內(nèi)進行遞送。例如， 藥劑可以在1至8小時之間的一段時間內(nèi)遞送至患者。藥劑還可以在約1、約2、約3、約4、約5、 約6、約7或約8小時的時期內(nèi)遞送至患者。為了完成靜脈內(nèi)輸注，可以使用IV重力滴注或IV 栗。當患者僅僅在某些時刻需要藥劑并且不需要另外的靜脈內(nèi)流體(例如，水溶液，其可含 有氯化鈉、葡萄糖或其任意組合)時，通常使用IV輸注，所述靜脈內(nèi)流體如恢復電解質(zhì)、血糖 以及水損失的那些流體。
[0052]如本文使用的術(shù)語"禽類"是指分類學鳥綱的生物體的任何種、亞種或?qū)伲绲?限于雞、火雞、鴨、鵝、鵪鶉、野雞、鸚鵡、雀、鷹、烏鴉以及平胸鳥，包括鴕鳥、鴯鹋以及食火 雞。所述術(shù)語包括原雞(Gallusgallus)或雞的各種已知品種（例如，白色來亨雞(White Leghorn)、棕色來亨雞（BrownLeghorn)、橫斑蘆花雞（Barred-Rock)、蘇塞克斯雞 (Sussex)、新漢夏雞(NewHampshire)、羅德島雞(RhodeIsland)、澳洲黑雞(Australorp)、 米諾卡雞(Minorca)、蘆花雞(Amrox)、加州灰雞(CaliforniaGray))，以及火雞、野雞、鶴 鶉、鴨、鴕鳥以及通常以商業(yè)數(shù)量飼養(yǎng)的其它家禽的品種。它還包括在發(fā)育的所有階段的單 個禽類生物體，包括胚胎和胎兒階段。
[0053]術(shù)語"家禽得到的"或"禽類得到的"是指由家禽產(chǎn)生或獲得的組合物或物質(zhì)。"家 禽"是指可以作為禽畜飼養(yǎng)的禽類，包括但不限于:雞、鴨、火雞、鶴鶉以及平胸鳥。例如，"家 禽得到的"可以指雞得到的、火雞得到的和/或鵪鶉得到的。
[0054] 如本文使用的術(shù)語"患者"是指正在接受或已經(jīng)接受或準備接受例如由醫(yī)學護理 提供者所指導的醫(yī)學護理或治療的任何人。
[0055]如本文使用的"治療有效劑量"是指產(chǎn)生希望的治療反應所需的藥物的劑量(例如 量和/或間隔）。治療有效劑量是指一種劑量，相比于未接受這種劑量的對應受試者，所述劑 量使得疾病、病癥或副作用得到改善的治療、治愈、預防或改善，或者疾病或病癥的發(fā)生率 或惡化率降低。所述術(shù)語在它的范圍內(nèi)還包括有效增強生理功能的劑量。
[0056]術(shù)語治療（"treat"、"treating"以及"treatment"）是指減輕、減緩或改善疾病或 癥狀、預防附加癥狀、改善或預防癥狀的潛在病因、抑制疾病或病癥、阻止疾病或病狀的發(fā) 展、緩解疾病或病狀、引起疾病或病狀好轉(zhuǎn)、緩解由疾病或病狀引起的病狀、或預防性和/或 在癥狀已發(fā)生之后停止疾病或病狀的癥狀。
[0057]如本文關(guān)于特定劑量使用的"kg^1"、"每kg"、"/kg"和"每公斤"表示哺乳動物的"每 公斤體重"，因此這些術(shù)語可互換使用。
[0058]如本文使用的術(shù)語"多肽"意欲涵蓋單個"多肽"以及多個"多肽"，并且是指由通過 酰胺鍵(也稱為肽鍵)線性連接的單體(氨基酸)構(gòu)成的分子。術(shù)語"多肽"是指兩個或更多個 氨基酸的任何一個或多個鏈，并且不是指特定長度的產(chǎn)物。因此，肽、二肽、三肽、寡肽、"蛋 白質(zhì)"、"氨基酸鏈"或用于表示具有兩個或更多個氨基酸的一個或多個鏈的任何其它術(shù)語 都被包括在"多肽"的定義內(nèi)，并且術(shù)語"多肽"可以代替或與任何這些術(shù)語互換使用。術(shù)語 "多肽"還意欲表示多肽的表達后修飾產(chǎn)物，包括但不限于糖基化、乙?；⒘柞；?、酰胺化、 通過已知保護/阻斷基團而衍生化、蛋白水解性裂解、或被非天然存在的氨基酸修飾。多肽 可以衍生自天然生物來源或由重組技術(shù)產(chǎn)生，但不必從指定核酸序列翻譯。它可以以任何 方式產(chǎn)生，包括通過化學合成。
[0059]如本文所使用，兩個氨基酸序列或兩個核苷酸序列之間的同源性百分率等于這兩 個序列之間的同一性百分率。兩個序列之間的同一性百分率是由序列共享的相同位置的數(shù) 量的函數(shù)（即，同源性％=相同的位置的數(shù)量/位置的總數(shù)X100)，其中考慮了為優(yōu)化兩個 序列的比對而需要引入的間隙數(shù)和各間隙的長度。兩個序列之間的序列比較和同一性百分 率的確定可以使用數(shù)學算法來完成，如以下在非限制性實例中所述。
[0060] 兩個氨基酸序列之間的同一性百分率可以使用已被并入ALIGN程序(版本2.0)中 的E.Meyers和W.Miller(Comput.Appl.Biosci·，4:11-17(1988))的算法，使用PAM120權(quán)重 殘基表，間隙長度罰分12,和間隙罰分4來確定。另外，兩個氨基酸序列之間的同一性百分率 可以使用已被并入到GCG軟件包(在http://www.gcg .com可得）中的GAP程序中的Needleman 和Wunsch(J.Mol,Biol.48:444-453( 1970))算法，使用Blossom62矩陣或PAM250矩陣，間隙 權(quán)重16、14、12、10、8、6或4，以及長度權(quán)重1、2、3、4、5或6來確定。
[0061] "分離的"多肽或其片段、變異體或衍生物意欲為不在它的天然周圍環(huán)境中的多 肽。不要求特定的純化水平。例如，分離的多肽可以是從它的原生或天生環(huán)境中移出的。如 本文所公開，在宿主細胞中表達的重組產(chǎn)生的多肽和蛋白質(zhì)被認為是分離的，通過任何適 合的技術(shù)分離、分開、或者部分或?qū)嵸|(zhì)性純化的天然或重組多肽也被認為是分離的。
[0062]本文公開的其它多肽是上述多肽的片段、衍生物、類似物、或變異體以及其任意組 合。當談到本文公開的任何多肽時，術(shù)語"片段"、"變異體"、"衍生物"以及"類似物"包括保 留對應的天然多肽的至少一些活性的任何多肽(例如，保留水解膽固醇酯和/或甘油三酯的 能力的LAL多肽片段、變異體、衍生物以及類似物）。多肽片段包括例如蛋白水解片段、以及 缺失片段。多肽變異體包括如上所述的片段，以及由于氨基酸取代、缺失或插入而具有改變 的氨基酸序列的多肽。變異體可以天然或非天然存在。非天然存在的變異體可以使用本領(lǐng) 域已知的誘變技術(shù)來產(chǎn)生。變異型多肽可以包含保守或非保守氨基酸取代、缺失或添加。衍 生物是已經(jīng)被改變以展現(xiàn)出在原生多肽上未發(fā)現(xiàn)的另外的特征的多肽。實例