囊泡的制作方法
【專利說明】囊泡
[0001] 本發(fā)明涉及用于局部施用治療性、代謝性、化妝性或結構性目標藥劑（"ΑΟΙ"）中的 囊泡制劑以及施用AOI的方法。
[0002] 美國專利號6,165,500描述一種用于施加提供有膜狀結構的藥劑的制劑，該膜狀 結構由一個或若干個兩親性分子層或兩親性載體物質(zhì)組成，以具體地用于將該藥劑運輸至 諸如皮膚和類似物質(zhì)的天然屏障中并且穿過它們。這些Transf ersomes?由一種或若干種組 分組成，最常見的是堿性物質(zhì)、一種或若干種邊緣活性物質(zhì)以及藥劑的混合物。
[0003] 美國專利申請公開號US 2004/0071767描述基于具有懸浮于藥學上可接受的介質(zhì) 中的至少三種兩親性組分的復合聚集物的非留體抗炎藥(NSAID)的制劑。
[0004] 美國專利申請公開號US 2004/0105881描述展開面聚集物，該聚集物可懸浮于適 合的液體介質(zhì)中并且包含至少三種兩親物(兩親性組分)并且能夠改善活性物通過諸如皮 膚的半滲透屏障的運輸，特別是對于通過此類聚集物穿透屏障所進行的體內(nèi)侵襲性藥物施 加。WO 2010/140061描述"空"囊泡制劑用于治療深部組織疼痛的用途。WO 2011/022707描 述"空"囊泡的其他制劑用于治療與脂肪酸不足有關的病癥和特別是與炎癥有關的病癥的 用途?？筛街委熜詫嶓w的囊泡制劑描述于W02011/022707和W02010/140061中。
[0005] 這些文獻沒有公開或教導用于局部施用AOI的囊泡制劑，AOI也不可共價鍵合至囊 泡的組分，使得大部分的AOI在囊泡外部。在本申請的此部分中引用任何參考文獻并不是承 認該參考文獻為本發(fā)明的現(xiàn)有技術。以上所述公開以引用的方式整體并入本文中。
[0006] 在過去已在嘗試將活性化合物(AOI)遞送至體內(nèi)時使用脂質(zhì)體囊泡。
[0007] 脂質(zhì)體("Transfersonies?"）的柔性形式是由脂肪（例如，大豆磷脂酰膽堿)和脂 肪酸或可穿過皮膚表面的表面活性劑(例如，吐溫）的組合制成的囊泡。這些囊泡的表面活 性劑中的聚乙二醇（"PEG"）是吸濕性的并且沿水梯度穿透皮膚孔隙。這些囊泡已經(jīng)測試為 用于通過將所要運輸?shù)腁OI放置于囊泡管腔內(nèi)或?qū)OI并入囊泡的膜中作為膜組分之一經(jīng) 由經(jīng)皮途徑將其他AOI運輸至體內(nèi)的囊泡。
[0008] 這些方法中的任一種必須依賴于某種形式的囊泡破壞，以便釋放Α0Ι。
[0009] 此外，存在可能希望通過皮膚運輸?shù)漠a(chǎn)物，該產(chǎn)物太大而不能以這種方式并入傳 遞體中，或者具有與這些囊泡的一般化學性質(zhì)不相容的化學性質(zhì)。
[0010]此外，在將一些含有PEG的表面活性劑組分替換為AOI的情況下，此影響囊泡的柔 性，并且去除一些動力。
[0011] 本發(fā)明通過使AOI物理地附著于囊泡而規(guī)避這些問題，使得囊泡純粹充當機械裝 置，從而將所需AOI牽引至皮膚表面之下。
[0012] 本發(fā)明的這些囊泡可用于通過使此類部分或AOI附著于囊泡的組分以使得AOI位 于囊泡外側而將其他部分/AOI經(jīng)由經(jīng)皮途徑運輸至體內(nèi)。
[0013] 因此，在第一方面中，本發(fā)明提供一種囊泡制劑，其包含脂質(zhì)、表面活性劑以及 AOI，其中AOI鍵合至囊泡的組分，使得AOI的至少一部分在囊泡的外表面上，并且在囊泡膜 的外部。優(yōu)選地，鍵合至AOI的組分是脂質(zhì)和/或表面活性劑組分。至少一部分意指整個AOI 中在囊泡外部的至少一部分，每個分子的至少5 %、10 %或20 %，合適地40 %或超過50 % (就 分子的尺寸或體積而言)在傳遞體的膜的外部。優(yōu)選大部分AOI，更優(yōu)選整個AOI分子在囊泡 的外部。AOI可共價鍵合至組分，使得其存在于囊泡的外表面上。
[0014] 在囊泡外部的AOI是指'朝外'的那些AOI。在使鍵合至AOI的表面活性劑或脂質(zhì)組 分與未改性組分混合的囊泡制造期間，改性分子的取向不能被控制。因此，附著于AOI的分 子中約50%將呈'不恰當'取向，這意味著AOI的一部分將存在于囊泡管腔內(nèi)。在呈"恰當"取 向使得AOI在囊泡外部的改性分子中，就物理尺寸/體積而言，AOI分子本身的至少50%在囊 泡膜的外部。制造過程可使得更低比例的AOI在囊泡外部，即AOI的外部濃度可在制劑中的 全部AOI的 1%至10% (包括2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%或9%)、10%至50%、15%至 45 %、20 %至40 %或25 %至30 % (重量/體積）之間。外部濃度是指一旦泡囊已穿透皮膚，即 可用于釋放和/或發(fā)揮治療活性的AOI的濃度。
[0015] 本發(fā)明的囊泡制劑的益處涉及當AOI鍵合至囊泡并且局部施加時，AOI穿透皮膚的 速度、深度以及量，以及AOI的尺寸和性質(zhì)。
[0016] 制劑可以是乳膏、洗劑、軟膏、凝膠、溶液、噴霧、漆、摩絲或成膜溶液。
[0017] 除鍵合至囊泡的AOI以外，囊泡制劑可能或可能不含有任何已知治療劑。包含AOI 的囊泡制劑可能或可能不含有任何其他生物活性或藥物活性產(chǎn)品。生物活性或藥物活性劑 在此被定義為具有藥理學、代謝或免疫學活性的試劑。
[0018] 本發(fā)明涵蓋包含一種或多種磷脂或硫脂和一種或多種有效遞送AOI的表面活性劑 的囊泡制劑。表面活性劑可以是非離子型的。
[0019] 本發(fā)明的囊泡制劑能夠(在不希望受理論約束的情況下)通過囊泡的獨特性質(zhì)實 現(xiàn)其功能，該囊泡為由表面活性劑和脂質(zhì)(諸如大豆磷脂酰膽堿)組成的雙層囊泡。囊泡的 獨特性源于在制劑中包括特定量的非離子型表面活性劑，這在一定程度上改性磷脂膜，使 得所得囊泡呈永久液晶態(tài)，并且由于表面活性劑還賦予膜穩(wěn)定性，所以囊泡是超變形性的 和穩(wěn)定的(具有降低的硬度而不會破裂）。
[0020] 囊泡制劑包含/成形為懸浮于例如局部施加的水性緩沖液中的囊泡。囊泡制劑的 囊泡包含包圍空核心的雙層或單層膜。它們的尺寸從直徑60nm變化到直徑200nm，并且可從 從IOOnm變化到直徑150nm。囊泡為高度親水性的，并且此性質(zhì)與其超變形性一起成為其運 輸穿過皮膚的能力的關鍵。當將本發(fā)明的制劑施加至皮膚并且使其干燥時，囊泡的再水化 驅(qū)動力與其可變形性組合使得囊泡移動到在皮膚滲透性屏障上方和下方具有更高水含量 的區(qū)域中。這驅(qū)使它們通過皮膚孔隙和細胞內(nèi)間隙移動。特定比率的表面活性劑與非離子 型表面活性劑有助于囊泡的經(jīng)皮遞送。囊泡通過孔隙和細胞內(nèi)間隙移動攜帶AOI或?qū)OI與 它們拉在一起。
[0021] -旦它們穿過皮膚，本發(fā)明的囊泡最終以完整囊泡形式存在。囊泡的有效清除由 于其相對大的尺寸而不會經(jīng)由皮膚微血管(毛細血管)進行，但是假設它們與間隙液體一起 運輸至其他組織和/或皮膚施加部位下方的更深組織中。用標記有標記物分子(酮洛芬）的 本發(fā)明囊泡進行的臨床前研究表明，囊泡未進入脈管，因為在局部施加之后，在局部觀測到 高濃度的標記物分子，并且全身性吸收較低。
[0022] AOI可鍵合至囊泡的表面活性劑組分或脂質(zhì)組分?；蛘?，囊泡的脂質(zhì)組分與表面活 性劑組分兩者均可具有與其鍵合的AOI。
[0023]制劑的囊泡可具有單一或多種鍵合至其外表面的AOI。在鍵合多種AOI的情況下， AOI可以是全部相同的，即同質(zhì)的，或AOI可以是不同的，即異質(zhì)的。
[0024] AOI可以是元素、離子、小分子、碳水化合物、脂質(zhì)、氨基酸、肽、蛋白質(zhì)、大分子或大 環(huán)分子。AOI可以是微量營養(yǎng)素。
[0025] AOI可以是皮膚結構蛋白（諸如彈性蛋白或膠原蛋白）、治療性蛋白質(zhì)、撲啉或含發(fā) 色團的大分子、維生素、二氧化鈦、氧化鋅、黑色素或黑色素類似物。AOI可以是肽或抗炎藥， 諸如NSAID。具體地說，AOI可以是四肽-7、三肽1、抗壞血酸、萘普生或雙氯芬酸。
[0026] 所要鍵合的AOI可共價或以其他方式直接鍵合至囊泡的磷脂或表面活性劑組分或 囊泡的脂質(zhì)組分?？赡苄枰褂霉矁r或以其他方式鍵合至脂肪酸、表面活性劑或脂質(zhì)組分 與AOI的鍵或橋。在一個實例中，如果要添加無機AOI (例如金屬鹽或金屬氧化物），那么可首 先使另一接頭(例如金屬螯合劑，諸如Η)ΤΑ)結合至囊泡組分。在另一實例中，可能希望使用 更長的分子，例如聚合物(諸如聚乙二醇;PEG)，以促成鍵合過程的功效和/或所鍵合的AOI 的有效性。當希望保持AOI距離囊泡一定距離以防止其干擾膜本身時，此類接頭/更長橋接 分子將特別具有益處。如果AOI特別疏水，那么此干擾可產(chǎn)生。
[0027] 大的分子或大分子可共價鍵合至囊泡組分。實例包括結構性皮膚蛋白質(zhì)，諸如膠 原蛋白和彈性蛋白；治療性蛋白質(zhì)；以及酶。
[0028]可使多種AOI鍵合至脂質(zhì)或表面活性劑組分，以存在于囊泡的外表面上，使得一旦 通過皮膚被吸收，它們即繼續(xù)存在于囊泡的表面上。實例包括抗氧化劑;維生素;無機化合 物，諸如TiO2和ZnO;用于光動力療法中的卟啉分子。
[0029] 通過皮膚將維生素運輸至體內(nèi)可代替產(chǎn)生損失的維生素的能力(例如，維生素 D)， 增強皮膚的（或任何其他器官的）保護和自我修復的能力（例如，維生素 C和E)，或者治療皮 膚病或其他病狀，諸如脂溢性皮炎(例如維生素 B7)。提及皮膚包括身體的整個皮膚和任何 其他外皮，諸如耳、鼻、喉以及眼睛的上皮，包括眼睛的鞏膜，以及其他粘膜，諸如陰道和肛 門/直腸。
[0030] 維生素 D實際上是一組負責增強鈣和磷酸鹽的腸道吸收的脂溶性化合物。此組中 最重要的是D3(膽鈣化醇)和出(麥角鈣化醇）。維生素 D缺乏引起骨軟化癥(兒童佝僂病)并且 已將低水平與低骨密度相關聯(lián)。
[0031] 哺乳動物皮膚通過UV輻射作用于前體7-脫氫膽固醇而形成維生素 D3,并且提供約 90%的維生素 D。防曬劑吸收紫外線并且阻止其到達皮膚。據(jù)報道，基于UVB光譜的防曬系數(shù) (SPF)為8的防曬劑可使維生素 D合成能力降低95%，而SPF為15的防曬劑可使合成能力降低 98% 〇
[0032] 最近，出現(xiàn)了高SPF防曬劑（25SPF與50SPF之間）和完全陽光阻斷產(chǎn)品的使用增加 的趨勢，因為對曬黑的危險的公眾意識已增長。此外，化妝護膚品與彩妝產(chǎn)品均已向其配方 中添加具有15、20以及25SPF的防曬劑，以提供一定程度的防曬作用。
[0033]當制劑包含維生素 D3(這并不是說它另外不包含維生素 C和/或E和/或B7)時，制劑 可并入防曬產(chǎn)品、陽光阻斷產(chǎn)品、曬后產(chǎn)品或其他護膚或化妝產(chǎn)品中，以補充低維生素 D水 平。低維生素 D水平可因低光照條件或使用陽光阻斷物(其可以阻止體內(nèi)制造維生素 D)而引 起。
[0034]因此，本發(fā)明可通過將維生素拴系至柔性經(jīng)皮囊泡（即包含脂質(zhì)和表面活性劑的 制劑)的外表面而使維生素 D3/膽鈣化醇與柔性經(jīng)皮囊泡締合。然后可將所得制劑包括于防 曬劑、曬后制劑以及包括防曬劑的化妝產(chǎn)品中。此"囊泡/維生素 D組合"將穿透皮膚，并且將 其有效載荷遞送至表皮中的基底層和棘層。
[0035]在體內(nèi)，膽鈣化醇(維生素 D3)首先在肝臟中轉(zhuǎn)化成鈣二醇。循環(huán)鈣二醇然后在腎 臟中轉(zhuǎn)化成三醇(維生素 D的生物活性形式）。低血鈣二醇（25-羥基-維生素 D)可因避開陽光 而產(chǎn)生。因此，本發(fā)明包括借助于鍵合或拴系至囊泡組分而將鈣二醇或鈣三醇與經(jīng)皮囊泡 締合。
[0036]某些其他維生素(例如維生素 C和維生素 E)具有重要的抗氧化性質(zhì)，并且這已經(jīng)被 看到，它們被并入護膚品，以減輕老化和皮膚損傷的跡象。
[0037] 維生素 E的最具生物活性形式是脂溶性α-生育酚，并且本發(fā)明的一個實施方案期 望將α-生育酚與囊泡組分締合以并入包括防曬劑和曬后產(chǎn)品的護膚制劑中以使陽光損傷 得以改善。
[0038] 維生素 C(水溶性抗壞血酸)是包括若干膠原蛋白合成反應的許多酶促反應中的輔 因子。這些反應在傷口愈合和預防毛細管出血中是重要的。因此，本發(fā)明包括將抗壞血酸與 囊泡組分締合，以將兩者并入護膚和防曬制劑中以改善對膠原蛋白的損害，并且并入傷口 護理產(chǎn)品中。
[0039] 因此，當微量營養(yǎng)素包含維生素 C和/或維生素 E時，可將制劑并入防曬產(chǎn)品、陽光 阻斷產(chǎn)品、曬后產(chǎn)品或其他護膚或化妝產(chǎn)品中，以補充表皮和真皮維生素 C和/或維生素 E， 并且阻止或協(xié)助修復被陽光損傷或老化的皮膚。
[0040] 維生素 Β7(水溶性生物素)是羧化酶的輔酶。生物素的缺乏可引起呈皮疹形式的皮 炎。此外，苯丙酮尿癥(不能分解苯丙氨酸)患者展現(xiàn)濕疹和脂溢性皮炎形式，其可通過增加 膳食生物素得以改善。
[0041] 因此，當微量營養(yǎng)素包含維生素 B7時，可將制劑并入防曬產(chǎn)品、陽光阻斷產(chǎn)品、曬 后產(chǎn)品或其他護膚或化妝產(chǎn)品中，以補充表皮和真皮維生素 B7,并且改善與此維生素缺乏 有關的皮膚病。
[0042]諸如四肽-7或三肽-1的肽可鍵合至囊泡膜的脂肪酸或表面活性劑組分。四肽-7可 適用于對抗炎癥并且借助于產(chǎn)生膠原蛋白來刺激皮膚再生。這意味著，它在皮膚護理和抗 衰老產(chǎn)品中特別有用。三肽-1具有同樣的作用。通過皮膚的外層有效遞送可在更低水平/濃 度下提供增加的效果，從而使由白介素抑制產(chǎn)生的可能的副作用減至最少。
[0043]非留體抗炎藥(NSAID)是止痛劑，其通常用于緩解骨關節(jié)炎癥狀、運動相關的關節(jié) 疼痛、背部疼痛、頭痛以及牙痛。NSAID的實例是阿司匹林、布洛芬、雙氯芬酸以及萘普生。另 外，直接將此類藥物有效并且高效遞送至疼痛和炎癥部位可使得使用更低劑量和/或靶向 型劑量，并且因此減少或消除諸如胃腸道問題、腎臟問題以及心臟問題等副作用。
[0044]本發(fā)明可包括將更大量的小的非活性AOI鍵合至囊泡的表面，使得一旦在皮膚下 方，其即變得錨定并且囊泡本身的存在的益處(例如保水、結構支撐)的持久性可得以延長。 [0045] AOI可鍵合(或附著或拴系）至囊泡的表面活性劑組分。如果分子具有羥基，那么鍵 合至表面活性劑可通過酯鍵直接鍵合至表面活性劑上。一種替代鍵合方法是用AOI取代表 面活性劑(例如，在吐溫(Tween，一種聚乙二醇聚合物）的情況下）的原子或官能團。第三種 鍵合方法是任選經(jīng)由酯鍵直接鍵合至脂肪酸。如果AOI是無機分子，那么可首先將另一連接 分子結合至囊泡組分，例如在金屬鹽情況下是諸如Η)ΤΑ等金屬螯合劑。如果希望AOI可固定 在距離囊泡某一距離以使其效率最大化(例如，以暴露作為酶的AOI上的活性位點），那么可 將連接分子，例如聚合物鏈(例如聚乙二醇)鍵合至囊泡組分與AOI兩者。
[0046] AO