一種從竹葉中提取竹葉黃酮的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物活性組分提取領(lǐng)域，具體涉及一種從竹葉中提取竹葉黃酮的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]我國竹類資源分布廣泛，對于竹子的利用也有著廣泛的研究。竹筍、竹竿、竹葉都有相關(guān)產(chǎn)品在市場銷售。竹筍長久以來一直主要用作食品，竹竿及相關(guān)制品在我國也具有悠久的使用歷史，而竹葉因其具有非常高的藥用及食用價(jià)值很早就受到關(guān)注。竹葉提取物的主要功能成分是黃酮苷，它是竹葉提取物中抗氧化作用的有效成分，黃酮苷含量越高，抗氧化能力越強(qiáng)。竹葉黃酮苷大多為碳苷黃酮，其糖基通過-c-c-鍵與黃酮母核相連，具有相對穩(wěn)定性高、親水性強(qiáng)、療效高等優(yōu)點(diǎn)，竹葉黃酮在醫(yī)藥、功能性食品、化妝品領(lǐng)域有廣泛的市場前景。
[0003]從竹葉中提取竹葉黃酮的方法有:有機(jī)溶劑提取法、水提取法、微波提取法、超聲波提取法、超臨界流體萃取法等。其中，微波提取法、超聲波提取法、超臨界流體萃取法這些方法在小規(guī)模的實(shí)驗(yàn)中取得了一些有益成效，但仍然存在著技術(shù)與效益方面的不足，由于竹葉本身?xiàng)l件的限制以及成本等因素，使其在工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)和產(chǎn)品成本上受到了制約，目前尚難進(jìn)行規(guī)?；a(chǎn)。比如，微波萃取在理論和實(shí)踐中還存在一些問題，如有機(jī)溶劑的殘留以及微波穿透物質(zhì)內(nèi)部時(shí)的衰減問題等，而且目前這種提取方法仍沿襲高溫煎煮法，長時(shí)間高溫煎煮會影響許多有效成分，降低藥效;又比如，超聲波提取對容器壁的厚薄及容器放置位置要求較高，否則會影響浸出效果，而且超聲波發(fā)生器工作噪音較大，所以工業(yè)應(yīng)用有一定的困難;又比如，超臨界流體萃取法生產(chǎn)成本高，提取物中烷基酚含量較高，超臨界co2是非極性溶劑，對非極性和分子量很低的極性物質(zhì)表現(xiàn)出很好的溶解性，但對極性較強(qiáng)的物質(zhì)溶解能力不足，在竹葉黃酮的提取應(yīng)用上效果不顯著。
[0004]因此，目前工業(yè)上從竹葉中提取竹葉黃酮大都還是采取傳統(tǒng)的有機(jī)溶劑提取法和水提取法。其中，用有機(jī)溶劑提取分離會導(dǎo)致耗時(shí)長、溶劑用量大、有機(jī)溶劑回收難、損耗大、能耗高、成本高、易燃易爆、環(huán)境污染、雜質(zhì)多、提取率低等諸多缺陷，已無法滿足中藥現(xiàn)代化的要求。故而，尋求一種環(huán)境友好的從竹葉中提取竹葉黃酮的方法成為研究的熱點(diǎn)。公開號為CN102068630A的中國專利申請以水為提取溶劑，將新鮮竹葉置于反應(yīng)釜中，在60?100°C下煮1?3小時(shí)，再冷卻浸泡2?5小時(shí)，得到的溶液經(jīng)反應(yīng)釜底部的過濾板和帶有復(fù)絲濾布的過濾器2次過濾后，轉(zhuǎn)入沉降罐靜置12?24小時(shí)，再通過0.45?0.8μπι的濾膜過濾，濾液經(jīng)ΝΚΑ-9極性樹脂層析純化，干燥后所得產(chǎn)品中竹葉總黃酮的含量達(dá)到30?50%。采取該方法的工藝提取時(shí)間較長，提取率較低。公開號為CN101921345Α的中國專利申請公開了一種采用擠壓法提取竹葉多糖和黃酮的方法，將竹葉加入擠壓機(jī)的擠壓腔內(nèi)，在105°C?1601和3?15MPa，得到竹渣，再對擠壓后的竹渣進(jìn)行一次水洗。采取該方法的工藝中，溶劑使用量少、快速，但存在目標(biāo)產(chǎn)物提取不完全、提取溫度較高等問題。
[0005]因此，一種環(huán)境友好、條件溫和、簡單高效的從竹葉中提取竹葉黃酮的工業(yè)化方法亟待開發(fā)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供了一種從竹葉中提取竹葉黃酮的方法，該方法簡單、操作方便、易于工業(yè)化，可快速高效低成本地從竹葉中提取竹葉黃酮，且整個(gè)生產(chǎn)過程條件溫和、對環(huán)境友好，具有良好的推廣應(yīng)用前景。
[0007]—種從竹葉中提取竹葉黃酮的方法，包括以下步驟:
[0008](1)提取竹葉黃酮:
[0009]取竹葉干燥、粉碎后，加水?dāng)嚢?0?60分鐘，超聲分散10?20分鐘，得到固含量為5?10 %的水分散液;在壓力60?1 OOMPa的條件下，將所述水分散液進(jìn)行高壓勻漿處理20?60分鐘，得到勻漿液;將所述的勻漿液在3500?5000r/min下離心10?20分鐘，分離得到上層液體；
[0010](2)制備磁性吸附劑:
[0011](2.1)向反應(yīng)器中持續(xù)通入氬氣，將10?30重量份的分子量為1000?2000的聚乙二醇和0.5?2重量份的十二烷基硫酸鈉加入到反應(yīng)器中混合，劇烈攪拌的同時(shí)以7?9°C/min速率升溫至70?90°C，保持當(dāng)前溫度的同時(shí)向其中加入0.5?1.5重量份的乙酰丙酮鐵，繼續(xù)攪拌5?15分鐘，再以7?9°C/min的速率升溫至240?280°C，反應(yīng)60?90分鐘后，停止加熱使自然冷卻；
[0012]將冷卻后的反應(yīng)物用丙酮超聲分散后，磁性分離得到沉淀;將1?5重量份的所述沉淀超聲分散在100重量份的去離子水中，制得第一溶液；
[0013](2.2)將80?90重量份丙烯酸甲酯，10?20重量份乙二醇二甲基丙烯酸酯、80?100重量份正庚烷、1?3重量份偶氮二異丁腈混合均勻，制成第二溶液;其中，丙烯酸甲酯和乙二醇二甲基丙烯酸酯的總重量份數(shù)為100份；
[0014](2.3)將第一溶液和第二溶液按照體積比為2:1?4: 1的比例進(jìn)行混合，以60?100r/min轉(zhuǎn)速持續(xù)攪拌，以0.5?l°C/min的速率，升溫至60?70°C反應(yīng)2?3小時(shí)，繼續(xù)升溫至75?80°C反應(yīng)2?3小時(shí)，最后升溫至85?90°C反應(yīng)6?8小時(shí)，冷卻至室溫后，經(jīng)過濾、洗滌、干燥處理，得到第一固相物質(zhì)；
[0015](2.4)將所述第一固相物質(zhì)浸泡于N，N-二甲基甲酰胺中充分溶脹，再向其中加入二乙烯三胺混合均勻，將其加熱到120?130°C，反應(yīng)12?24小時(shí)，冷卻至室溫后，將得到的產(chǎn)物進(jìn)行水洗和真空干燥，得到第二固相物質(zhì)；將所述第二固相物質(zhì)浸泡于醋酸酐充分溶脹后，升溫至70?80°C反應(yīng)10?12小時(shí)，冷卻至室溫后，將得到的產(chǎn)物水洗后，得到磁性吸附劑;其中，所述第一固相物質(zhì):N，N-二甲基甲酰胺:二乙烯三胺:醋酸酐的質(zhì)量比為1:(4?10):(1?6):(1?6)；
[0016](3)分離竹葉黃酮:
[0017](3.1)將步驟(2)得到的所述磁性吸附劑與步驟(1)得到的所述上層液體按照lg:(50?150)mL的計(jì)量比混合，超聲分散5?10分鐘，振蕩吸附1?3小時(shí);然后通過磁分離將吸附有竹葉黃酮的磁性吸附劑從液相分離出來，用質(zhì)量濃度為5?15 %的乙醇水溶液清洗吸附有竹葉黃酮的磁性吸附劑，再次磁分離，棄去清洗液，得到吸附有竹葉黃酮的磁性吸附劑；
[0018](3.2)向清洗后的吸附有竹葉黃酮的磁性吸附劑中加入含乙酸體積百分比為1?3%的乙醇和乙酸混合液，振蕩洗脫30?60分鐘，磁分離后，收集洗脫液;重復(fù)洗脫1?5次，所述乙醇和乙酸混合液的總用量為取用的所述上層液體的體積的2?5倍，合并所有洗脫液，經(jīng)濃縮和減壓干燥，得到竹葉黃酮。
[0019]優(yōu)選的技術(shù)方案中，步驟(1)中，所述竹葉粉碎為60?100目。
[0020]優(yōu)選的技術(shù)方案中，步驟(1)中，所述高壓勻漿處理的壓力為80MPa，時(shí)間為30分鐘。在優(yōu)選的高壓勻漿處理?xiàng)l件下，竹葉黃酮的提取率最高。
[0021]優(yōu)選的技術(shù)方案中，步驟(2.1)中，所述聚乙二醇的分子量為2000。
[0022]優(yōu)選的技術(shù)方案中，步驟(2.1)中，聚乙二醇:十二烷基硫酸鈉:乙酰丙酮鐵的質(zhì)量比為 30:1.5:0.7。
[0023 ]優(yōu)選的技術(shù)方案中，步驟(2.1)中，所述反應(yīng)溫度為260°C。
[0024]優(yōu)選的技術(shù)方案中，步驟(2.1)中，所述丙酮的量為60?120重量份。
[0025]優(yōu)選的技術(shù)方案中，步驟(2.3)中，所述第一溶液和第二溶液的體積比為3:1。
[0026]優(yōu)選的技術(shù)方案中，步驟(2.3)中，反應(yīng)條件為:升溫至65°C反應(yīng)2小時(shí)，繼續(xù)升溫至75°C反應(yīng)2小時(shí)，最后升溫至85°C反應(yīng)6小時(shí)。
[0027]優(yōu)選的技術(shù)方案中，步驟(3.1)中，所述乙醇水溶液的質(zhì)量濃度為10%。
[0028]優(yōu)選的技術(shù)方案中，步驟(3.2)中，所述乙醇和乙酸混合液中，乙酸體積百分比為
[0029]本發(fā)明中，采取高壓勻漿提取竹葉黃酮，在短時(shí)間內(nèi)使得竹葉中的有效成分在高壓下從水中快速充分溶出，反應(yīng)條件溫和，有利于對活性物質(zhì)的結(jié)構(gòu)保護(hù)，而且不會引入新的有機(jī)雜質(zhì)，保證最終產(chǎn)品的安全性，也減少環(huán)境污染；同時(shí)，采取酰胺化磁性納米粒子對竹葉黃酮進(jìn)行選擇性吸附，簡單高效地實(shí)現(xiàn)竹葉黃酮的分離。
[0030]相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下有益的技術(shù)效果:
[0031]采用本發(fā)明方法從竹葉中提取竹葉黃酮，簡單高效、對環(huán)境友好、提取率高，產(chǎn)品質(zhì)量好，生產(chǎn)周期短、操作方便、成本較低、易于產(chǎn)業(yè)化，具有良好的推廣應(yīng)用前景。
【具體實(shí)施方式】
[0032]下面將結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，下面的實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。
[0033]實(shí)施例1
[0034](1)提取竹葉黃酮:
[0035]將竹葉干燥后粉碎，過80目篩，按照料液