miR-223-3p或miR-885-5p模擬物在制備治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用
【專利說明】m i R-223-3p或m i R-885-5p模擬物在制備治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥工程及痛風(fēng)疾病治療技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種內(nèi)源性非編碼小RNA模擬物的新用途，具體涉及miR-223-3p和miR-885-5p模擬物及其用途，具體為制備治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]痛風(fēng)是嘌呤代謝障礙、血尿酸升高引起的單鈉尿酸鹽結(jié)晶在關(guān)節(jié)或組織內(nèi)沉積所致的痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎和慢性痛風(fēng)石等疾病，與高尿酸血癥直接相關(guān)。痛風(fēng)不僅能夠引起關(guān)節(jié)腫脹及組織損傷，而且可增加心腦血管、腎臟等疾病風(fēng)險(xiǎn)。HUA也與多種疾病存在密切關(guān)系，如房顫等。急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎是痛風(fēng)的主要臨床表現(xiàn)，也是原發(fā)性痛風(fēng)的常見首發(fā)癥狀。流行病學(xué)研究顯示全球痛風(fēng)的患病率正在逐年增加，目前在1%_2%左右。
[0003]急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎作為痛風(fēng)發(fā)病的一個(gè)重要階段，也是一個(gè)重要的治療階段，如果能夠及時(shí)控制其發(fā)作癥狀，減少發(fā)作次數(shù)，不但可以減輕患者的痛苦，而且能夠有效延緩疾病的進(jìn)程;但目前對(duì)于急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎尚缺乏有效治療。目前，臨床上治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的常用藥物仍是秋水仙堿、非留體類抗炎藥及糖皮質(zhì)激素等。但上述藥物不能明顯緩解病情和減輕患者的痛苦，而且長期應(yīng)用不良反應(yīng)明顯。最近研發(fā)的靶向藥物IL-Ιβ拮抗劑(如Canakinumab、Anakinra等)雖較傳統(tǒng)藥物有較好效果，但其副作用亦明顯增多。因此，尋找一種安全、有效的急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎治療藥物，是當(dāng)今醫(yī)學(xué)界亟待解決的問題。
[0004]在急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制中，NLRP3炎性體和趨化因子有重要作用;前者激活后可導(dǎo)致IL-Ιβ的釋放，而趨化因子可以趨化更多中性粒細(xì)胞及單核巨噬細(xì)胞到病灶部位引發(fā)炎癥級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)。見1^3炎癥體是由11^3(1111(31601^(16-13；[11(1;[1^ oligomerizat1ndomain(NOD)-1ike receptor containing pyrin domain 3)、ASC(apoptosis-associatedspeck-like protein containing CARD)和procaspase-1 組成的蛋白復(fù)合物，參與多種炎癥性疾病的發(fā)病過程。趨化因子是一類可誘導(dǎo)的、分泌型的前炎癥細(xì)胞因子，對(duì)白細(xì)胞及淋巴細(xì)胞起特異性趨化吸引作用。趨化因子受體通過與相應(yīng)配體結(jié)合對(duì)多種炎癥細(xì)胞進(jìn)行趨化和激活，引起一系列生物學(xué)效應(yīng)。目前研究已發(fā)現(xiàn)了許多趨化因子參與了急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病過程，其中CCL2(Chemokine ligand 2)，亦稱為單核細(xì)胞趨化蛋白I (Monocytechemotactic protein-1，MCP_1)，是痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎中研究最多的一種趨化因子，其在急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎中的作用已被廣泛認(rèn)可。
[0005]MicroRNAs(miRNAs)是一類非編碼的RNA，長約18-25nt，高度保守，主要通過與特SmRNA 3 ’ -UTR結(jié)合在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)，從而參與細(xì)胞分化、生長、凋亡、代謝等功能。目如已發(fā)現(xiàn)有5000多種mi RNAs，而且編碼表達(dá)蛋白的基因中60%以上是受各種miRNAs調(diào)控的。miRNAs在很多疾病中有重要作用，例如腫瘤、炎癥性疾病等。miRNAs具有高度的保守性和表達(dá)的時(shí)空特異性，不同的疾病會(huì)有不同的mi RNAs特異性表達(dá)譜。機(jī)體內(nèi)組織、器官的代謝異?；蚱髻|(zhì)性病變可能導(dǎo)致特定疾病狀態(tài)下某些血清miRNAs表達(dá)水平特異性地升高或降低。雖然miRNAs是當(dāng)前學(xué)術(shù)界的研究熱點(diǎn)，其在炎癥性疾病中的關(guān)鍵調(diào)控作用也已被很多研究證實(shí)，但目前有關(guān)miRNAs在痛風(fēng)發(fā)病機(jī)制中作用的研究甚少，也沒有研究對(duì)miRNAs在痛風(fēng)治療中的作用進(jìn)行研究分析。在miRNAs層面調(diào)控關(guān)鍵因子(如NLRP3和趨化因子等)的表達(dá)，緩解炎癥反應(yīng)，極有可能為治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎提供一種新思路和新方法。目前國內(nèi)外文獻(xiàn)及專利數(shù)據(jù)庫均無用miRNA抑制物或模擬物治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺點(diǎn)，尋求設(shè)計(jì)提供一種有效治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的新藥物，該組合藥物以miR-223-3p和miR-885-5p模擬物為核心原料，具有治療痛風(fēng)的作用，可抑制關(guān)鍵炎癥因子表達(dá)，抑制關(guān)節(jié)液及血清中IL-Ιβ等炎癥因子的分泌，從而達(dá)到治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的效果。
[0007]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明涉及的藥物以miR-223-3p和miR-885-5p模擬物二者中的一種為核心原料，以海藻酸鈉納米級(jí)微囊為載體。
[0008]本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
[0009]本發(fā)明的miR-223-3p或miR-885-5p模擬物在制備治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。
[0010]所述的miR-223-3p模擬物的核苷酸序列為:5，-UGUCAGUUUGUCAAAUACCCCA-3，。
[0011 ]所述的miR-885-5p模擬物的核苷酸序列為:5，-UCCAUUACACUACCCUGCCUCU-3，。
[0012]制備該藥物的過程如下:
[0013]首先采用常規(guī)的公知工藝方法合成miR-223-3p和miR-885-5p模擬物；
[0014]然后采用常規(guī)的公知工藝方法合成海藻酸鈉納米級(jí)微囊，將上述miR-223_3p或miR-885-5p模擬物二者中的一種合成到海藻酸鈉納米級(jí)微囊中；
[0015]最后采用常規(guī)的公知工藝方法將上述miR納米微囊物進(jìn)一步制成穩(wěn)定的液體制劑或粉狀制劑，再加工成形即可。
[0016]本發(fā)明的積極效果如下:
[0017]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，miR-223-3p和miR-885-5p模擬物納米微囊具有療效快、靶向性強(qiáng)、副作用少、安全性高等優(yōu)點(diǎn)，是治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的新型靶向藥物，將極大的造福于社會(huì)大眾。
【附圖說明】
[0018]圖1關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射miR-223-3p模擬物納米微囊可明顯改變滑膜細(xì)胞中miR-223-3p的表達(dá)水平的不意圖(*，〈0.05versus the Control group；#,<0.05versus the Controlgroup)o
[0019]圖2關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射miR-885-5p模擬物納米微囊可明顯改變滑膜細(xì)胞中miR-885-5p的表達(dá)水平的不意圖(*，〈0.05versus the Control group；#,<0.05versus the Controlgroup)o
[0020]圖3miR-223-3p mimic納米微囊可有效減輕關(guān)節(jié)腫脹程度的示意圖(Blankcontrol,空白對(duì)照組;miRNA inhibitor ,miRNA抑制物組;miRNA mimic ,miRNA模擬物組；Model group,痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型組;Colchicine,秋水仙堿組)。
[0021 ] 圖4 miR-223-3p模擬物和miR-885-5p模擬物納米微囊可明顯降低IL-Ιβ表達(dá)水平的示意圖。
[0022]圖5miR-223-3p模擬物和miR-885-5p模擬物納米微囊對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜組織病理學(xué)的影響的示意圖(HE染色，10 X 20倍光鏡下(A，空白對(duì)照組;B ,miRNA抑制物組;C，miR-223-3p模擬物組;D，痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型組;E，秋水仙堿組;F，miR-885_5p模擬物組)。
【具體實(shí)施方式】
[0023]下面的實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0024]實(shí)施例l:miR-223-3p模擬物和miR-885-5p模擬物納米微囊對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型的治療作用
[0025]1.SD大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎分組及造模方法
[0026]實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為6-8周齡，SPF級(jí)SD大鼠，體重180_220g，105只，均為雄性。使用前適應(yīng)性喂養(yǎng)I周，自由攝食飲水，飲食、飲水、活動(dòng)正常即開始實(shí)驗(yàn)。將105只SD雄性大鼠隨機(jī)分為7組，分別為miRNA模擬物組、miRNA抑制物組、白藜蘆醇組(200mg/kg,Sigma)、mmiRNA模擬物+白藜蘆醇組，秋水仙堿組、空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組，每組15只大鼠，各組大鼠在相同條件下攝水飲食。
[0027]2.藥品與試劑:選用白藜蘆醇(Sigma公司，HPLC法測定純度均2 98% )，大鼠用藥劑量參照人鼠體表面積轉(zhuǎn)換換算公式;秋水仙堿組用秋水仙堿，用注射用水配制成10%溶液備用；首先采用常規(guī)的公知工藝方法合成miR-223-3p和miR-885-5p模擬物，具體miRNA核苷酸序